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相似文献
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1.
龙牙百合DNA的提取及ISSR-PCR体系的建立   总被引:2,自引:1,他引:1  
[目的]研究龙牙百合总DNA的提取方法,建立优化的ISSR-PCR反应体系和程序,为种质资源研究奠定基础。[方法]利用改良的CTAB法提取龙牙百合基因组DNA,并对影响ISSR扩增反应的各因素进行优化。[结果]获得了高质量的龙牙百合基因组DNA;优化的龙牙百合ISSR-PCR反应体系为,25μl体系中含60 ng模板DNA,0.4μmol/L ISSR引物,2.0 mmol/L Mg2+,1.5 UTaq酶,0.2 mmol/LdNTPs;反应程序为,94℃预变性5 min;然后进行40个循环:94℃变性50 s,52℃复性45 s,72℃延伸75 s;循环结束后72℃延伸8 min。[结论]建立了适合于龙牙百合的ISSR-PCR反应体系及程序,为种质资源研究奠定了基础。  相似文献   

2.
喻晓  文涛  曾杨 《西南农业学报》2007,20(6):1304-1306
以大百合DNA为模板,采用正交试验设计,对影响大百合RAPD-PCR扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立大百合RAPD反应的优化体系。结果表明最优大百合RAPD-PCR的反应体系(20μl):Mg2 (2.0 mmol/L)1.0μl、dNTPs(0.2 mmol/L)1.0μl、primer(0.6 umol/L)1.3μl、DNA(30 ng/μl)1.0μl、Taq酶1U、10×buffer2μl;扩增程序为:在94℃下预变性5 min,然后进行35个循环(94℃变性30s、37℃退火50s、72℃延伸1 min),最后在72℃延伸10 min,在电压为50 V下电泳1 h。  相似文献   

3.
[目的]建立台兰稳定可靠的ISSR-PCR分子标记反应体系。[方法]用改良的CTAB法提取叶片的基因组DNA,并对影响台兰ISSR-PCR反应体系的主要成分进行筛选和优化。[结果]台兰的ISSR-PCR优化反应体系为:25μl PCR反应体积中,2.5μl 10×PCR buffer,2.0 mmol/L MgCl2,100 ng模板DNA,0.5 mmol/L dNTPs,0.22 U Taq DNA聚合酶,0.4μmol/L引物,15.78μl双蒸水。最佳扩增程序为:94℃预变性5 min,然后进行40个循环:94℃变性30 s,复性温度根据各引物的TM值略低1~2℃,30 s,72℃延伸50 s,循环结束后72℃延伸7 min。[结论]台兰ISSR-PCR优化反应体系为今后利用ISSR技术进行台兰种质资源的遗传多样性分析奠定了技术基础。  相似文献   

4.
李黛  曾燕玲  代鸣 《湖北农业科学》2012,51(19):4393-4395
以贵州林下野生淡黄花百合(Lilium sulphureum Baker)幼嫩叶片为材料,采用改良的CTAB法提取百合基因组DNA,得到了较高质量的DNA.并对影响随机扩增多态DNA性(RAPD)反应的主要因素进行了优化,建立并优化了野生淡黄花百合的RAPD反应体系及程序.优化的20μL反应体系中包含20 ng模板DNA,2.0 mmol/L Mg2+、0.25 mmol/L dNTPs、1.0 U Taq DNA聚合酶、10×Buffer 2μL、0.4 μmol/L随机引物、ddH2O补足至20μL.优化的RAPD扩增程序为94℃3 min;94℃50 s,37℃40 s,72℃80 s,40个循环;72 ℃ 10 min,4℃保存.该反应体系具有较好的稳定性及可重复性,适合贵州野生淡黄花百合遗传多样性研究.  相似文献   

5.
蕙兰ISSR-PCR反应体系的建立和优化(英文)   总被引:1,自引:0,他引:1  
[目的]以蕙兰(Cymbidium faberi Rolfe)基因组DNA为模板,对影响ISSR-PCR扩增结果的因素进行筛选和优化,建立适合蕙兰的ISSR-PCR的最佳反应体系。[方法]利用改良的CTAB法提取蕙兰基因组DNA,并对影响ISSR-PCR扩增结果的因素进行优化。[结果]获得了高质量的蕙兰基因组DNA并建立了最适的蕙兰ISSR-PCR体系(25μl),即2.5μl10×PCRbuffer,2.0mmol/LMgCl2,60ng模板DNA,160μmol/LdNTPs,1.25UTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物,双蒸水15.85μl;最佳扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性30s,复性温度比引物的Tm值低2~3℃,30s,72℃延伸50s,40个循环;72℃延伸7min。[结论]该优化体系的建立可为今后利用ISSR标记技术进行蕙兰遗传多样性研究提供依据。  相似文献   

6.
 以苎麻属植物为材料,研究苎麻属植物RAPD分析中的主要影响因素,采用差异性材料DNA为模板和双重正交优化设计的方法。建立苎麻属植物RAPD PCR反应体系:25μL反应体系中含Taq DNA聚合酶1.5U,Mg2+2.1 mmol/L,dNTP 0.2μmol/L,Primer 0.75μmol/L,模板DNA 150ng。最佳扩增程序:先94℃变性4min,再94℃变性45s,37℃复性45s,72℃延伸90s共36个循环,最后 72℃延伸5min,4℃保存。经检验,该体系能适应苎麻属多个种植物的RAPD PCR的正常扩增。  相似文献   

7.
[目的]研究人参基因组SRAP-PCR的扩增条件,建立其优化扩增体系。[方法]采用单因子实验方法探讨模板DNA、引物浓度、dNTPs浓度、Mg^2+浓度等因素对PCR结果的影响。[结果]优化后的扩增程序为:94℃预变性2 min;94℃变性30 s,48℃复性30 s,72℃延伸1 min,共40次循环;72℃延伸7 min。最佳反应体系为:DNA模板30 ng,上下游引物浓度2.0μmol/L,dNTPs浓度0.3 mmol/L,Mg^2+2.5 mmol/L,总体积25μl。[结论]建立了满足人参SRAP-PCR的优化扩增体系,为人参亲缘关系和遗传多样性SRAP分析提供快速、简便、重复性好的实验方法。  相似文献   

8.
人参SRAP-PCR体系优化条件的建立(摘要)   总被引:3,自引:0,他引:3  
[目的]研究人参基因组SRAP-PCR的扩增条件,建立其优化扩增体系。[方法]采用单因子实验方法探讨模板DNA、引物浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度等因素对PCR结果的影响。[结果]优化后的扩增程序为:94℃预变性2min;94℃变性30s,48℃复性30s,72℃延伸1min,共40次循环;72℃延伸7min。最佳反应体系为:DNA模板30ng,上下游引物浓度2.0μmol/L,dNTP浓度0.3mmol/L,Mg^2+2.5mmol/L,总体积25μl。[结论]建立了满足人参SRAP-PCR的优化扩增体系,为人参亲缘关系和遗传多样性SRAP分析提供快速、简便、重复性好的实验方法。  相似文献   

9.
[目的]研究石鲽基因组DNA的提取及其RAPD体系的建立和优化。[方法]以石鲽为试材,按常规酚/氯仿抽提法提取其基因组的DNA,对影响RAPD反应的各因素进行优化,建立了石鲽的最佳RAPD反应体系和程序。[结果]采用常规酚/氯仿抽提法获得的DNA完全能够满足RAPD分析的要求。通过优化建立一套适合石鲽的稳定的RAPD反应体系:反应体系总体积为25μl,包括10×buff-er2.5μl,MgCl22 mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,引物0.2μmol/L,模板30 ng,Taq酶1 U。扩增程序为:94℃预变性5 min,45次PCR循环(94℃变性45 s,36℃退火45 s,72℃延伸2 min和72℃延伸10 min。利用该体系对OPK和OPV系列共40条引物进行扩增,发现其中部分引物能产生稳定、清晰的条带。[结论]该体系为石鲽遗传多样性以及相关分子标记的研究奠定了基础。  相似文献   

10.
春兰ISSR-PCR反应体系的建立和优化   总被引:1,自引:1,他引:0  
[目的]为进一步从分子水平上研究春兰种群的遗传多样性奠定基础。[方法]以春兰基因组DNA为模板,通过单因子试验研究ISSR反应体系中主要成分对扩增结果的影响,以寻找适合春兰ISSR分析的反应体系。[结果]春兰的ISSR反应体系较适宜的扩增条件为:25lμPCR反应体积中,15.78μl双蒸水,2.5μl 1×CR buffer,1.1 UTaqDNA聚合酶,100 ng基因组DNA,2.0 mmol/L MgCl2,150μmol/LdNTPs,2μmol/L引物。最佳扩增程序为:94℃预变性5 min,然后进行40个循环;94℃变性45 s,复性温度比各引物的TM值略低1~2℃,45 s,72℃延伸75 s,循环结束后72℃延伸7 min,4℃保存。[结论]该优化系统的建立为进行春兰鉴定及种质遗传多样性分析提供了一个标准化程序。  相似文献   

11.
王福亮  黄文功 《安徽农业科学》2009,37(15):6911-6913
[目的]优化亚麻RAPD反应条件,筛选亚麻RAPD引物。[方法]DNA条带扩增采用PCR技术,条带的分离采用琼脂糖凝胶电泳法,成像利用紫外成像系统。[结果]试验优化亚麻RAPD反应条件:25出反应体系中,含10×Buffer,Mg^2+ (1mmol/L),Taq酶1U,Genome DNA 50ng.dNTP 0.25mmol/L.RAPD primer1.5μmol/L。PER反应程序为:94℃预变性4min;97℃变性40s,37℃退火1min,72℃延伸90s,40个循环;72℃延伸10min。试验利用3个有代表性的亚麻品种从70条引物中筛选出12条多态性好,重复性高的引物。[结论]该试验筛选出12条引物,并优化了亚麻RAPD反应条件,为亚麻的分子鉴定奠定了基础。  相似文献   

12.
温郁金ISSR-PCR反应体系的建立及条件优化   总被引:1,自引:1,他引:0  
[目的]寻找一个可用于温郁金ISSR-PCR的最适宜反应体系。[方法]利用CTAB法提取基因组DNA,同时利用PCR扩增技术和方法,对引物、模板DNA、Mg2+d、NTP、Taq聚合酶等反应条件进行优化。[结果]反应体系的最佳条件是总体积为25μl,其中Mg2+浓度(25mmol/L)2.2μl,Taq聚合酶(5 U/μl)0.4μl,引物浓度(20μmol/L)1.5μl,模板DNA(5 ng/μl)1.5μl,dNTP(2.5 mmol/L)2.2μl,10×PCRbuffer2.5μl;PCR扩增程序为:1个循环的94℃预变性5 min;94℃变性35 s,相对应的引物退火温度退火1 min,72℃复性1.5 min,共36个循环;最后72℃延伸10 min。[结论]该体系是适合温郁金ISSR-PCR反应的最适宜体系,具有省时、经济、简便以及扩增条带清晰而稳定等特点,为今后温郁金遗传多样性的研究奠定了基础。  相似文献   

13.
大果油茶基因组DNA提取及ISSR反应体系建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
【目的】建立大果油茶的ISSR-PCR适宜扩增反应体系和程序,为其深入研究奠定基础。【方法】以大果油茶嫩叶片为供试材料,采用改良的SDS法提取其基因组DNA,并对其ISSR反应体系条件进行筛选及优化。【结果】提取的基因组DNA纯度和完整性较好,OD260/OD280值在1.8~2.0之间,DNA无降解现象,完全可以满足ISSR-PCR扩增要求。在25.0μLISSR-PCR反应体系中,各组分的适宜浓度配比为:40ng/μL模板DNA1.0μL、2.5mmol/LdNTPs2.0μL、5U/μLTaqDNA聚合酶0.2μL、10μmol/L引物1.0μL、10×PCR Buffer2.5μL(含有Mg2+),加ddH2O至25.0μL。PCR反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性40s,52℃和53℃退火40s,72℃延伸90s,40个循环;最后72℃延伸7min。由此可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱。【结论】建立的ISSR-PCR反应体系可用于研究大果油茶遗传变异和多样性。  相似文献   

14.
油茶DNA提取及RAPD分析最佳反应体系的建立   总被引:1,自引:1,他引:0  
阙生全  张芳 《安徽农业科学》2008,36(3):902-903,905
[目的]为建立油茶RAPD分析的最佳反应体系。[方法]分别用改良SDS法和CTAB法从12个油茶品种的新鲜幼叶中提取基因组DNA。通过测定OD260和OD280来比较两种方法提取DNA的纯度。建立油茶的RAPD反应程序,通过优化反应条件获得油茶RAPD分析的最佳反应体系。[结果]CTAB法提取的油茶基因组DNA纯度高于SDS法。油茶RAPD分析的最佳反应体系为:1.0 UTaq DNA聚合酶、1.5 mmol/L MgCl22、00μmol/L dNTP1、0 pmol/L随机引物2、0 ng DNA模板2、μl 10×PCR buffer,加重蒸水至20μl。油茶的RAPD反应程序为:95℃预变性3 min;94℃变性1 min,40℃退火1 min,72℃延伸2 min,40循环;72℃延伸7 min。[结论]该研究所用DNA纯度较高,反应条件控制严格,试验中扩增稳定性较好,是适合油茶RAPD分析的最佳反应体系。  相似文献   

15.
宫宇  刘宪虎  李美善  许明子  张春影  吴琼 《安徽农业科学》2010,38(12):6134-6135,6196
[目的]建立牛皮杜鹃RAPD反应体系。[方法]以野生牛皮杜鹃的叶片为材料,采用改进CTAB法提取基因组DNA,并对影响RAPD扩增反应的各因素进行优化。[结果]适合牛皮杜鹃的RAPD反应体系为:在20μlPCR反应体积中加模板DNA10ng,Mg2+浓度1.5mmol/L,引物OPC0515pmol/μl,dNTP0.15mmol/L,TaqDNA聚合酶1.0U。[结论]该研究为牛皮杜鹃的遗传多样性分析提供了有益的参考。  相似文献   

16.
木豆随机扩增多态性DNA的反应体系研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
[目的]分析影响木豆RAPD-PCR反应中的主要因素,优化反应条件。[方法]以木豆品种ICPL87091为试材,以木豆基因组DNA为模板,通过对PCR反应体系中各种参数的优化设置,分析比较各种因素对RAPD扩增结果的影响,建立适宜的反应体系。[结果]试验得到了较为理想的适宜木豆的反应体系。优化的木豆RAPD反应条件为:模板DNA浓度30 ng,随机引物1.6μmol/L,dNTPs(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)各0.2 mmol/L,Mg2+浓度2.0 mmol/L,Taq酶1.0 U,反应体积为25μl。循环体系为:先94℃1 min,35℃2 min,72℃2 min,5个循环;然后94℃30 s,37℃1 min,72℃1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min。[结论]利用这一反应体系可有效地进行木豆随机扩增多态性DNA分析,极大地提高了实验结果的可重复性。  相似文献   

17.
[目的]为辣椒的品种资源鉴定与遗传多样性分析奠定基础。[方法]采用改良的CTAB法对辣椒叶片基因组DNA进行提取,并采用正交试验设计法对辣椒RAPD-PCR反应进行优化筛选。[结果]采用改良的CTAB法获得了高质量的辣椒基因组DNA,用Tris-平衡酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1,V∶V∶V)进行抽提,最后再用氯仿抽提以除去其中含有的酚,避免了对后续PCR扩增的影响。基于一般的RAPD反应程序和调整试验,优化了PCR反应体系。结果表明,在模板20 ng 1.5μl、引物(20μmol/L)1.5μl、dNTPs(2.5 mmol/L)2.2μl、10×Buffer缓冲液(含Mg2+)2.5μl、Taq(5 U/μl)0.35μl条件下扩增效果较好。[结论]建立了最适的辣椒RAPD扩增体系。  相似文献   

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