LH抗体间接ELISA检测方法的建立

以高纯度的促黄体素（LH）作为包被抗原,建立了检测LH抗体的间接ELISA法,该法的最适抗原包被浓度为1μg/mL,最佳酶标山羊抗小鼠抗体稀释度为1∶1500.该法只与LH阳性小鼠血清呈现阳性反应,而与LH阴性小鼠血清和小鼠促卵泡素（FSH）阳性血清呈现阴性反应.结果表明,该法具有良好的特异性和重复性,可用于LH免疫后抗体水平检测.     

珍珠草的栽培技术

珍珠草有名虎眼万年青,喜凉爽湿润的气候条件,适宜于亚温带大陆性季风气候地域,以北方地域为例,冬寒夏暖,四季分明.年日照时数2466小时,≥10℃的积温在2330-2450℃,无霜期113-130天;年降水量691毫米,降水多集中在5-8月份.而珍珠草的生长温度在8-30℃,最适宜的生长温度是10-25℃.     

促性腺激素(LH,FSH)对鸡卵泡孕酮分泌的影响

摘出垂体12 h 后的卵泡孕酮(P_4)浓度显著下降.单独添加 LH 时第一卵泡(F_1)的P_4浓度显著增加,同时添加 LH 和 FSH 时,所有卵泡的颗粒层 P_4浓度恢复到对照的水平.但是单独添加 FSH 时无促进作用.LH 和 FSH 的处理对卵泡的卵泡膜 P_4浓度影响极小.在细胞培养液中添加 LH 和 FSH 可以促进颗粒层的 P_4合成,这种反应以 F_1最为明显.LH 和 FSH同时添加时对颗粒层 P_4合成有显著效果,但是对卵泡膜 P_4合成无明显促进作用.表明 P_4在 LH和 FSH 的协同调控下,主要在 F_1的颗粒层中合成.     

促性腺激素对猪卵母细胞体外成熟的影响

在成熟液中同时添加不同浓度(0.25～2.0μg/mL)FSH和不同浓度(0.25～2.0μg/mL)LH,探讨这2种促性腺激素结合使用对猪卵母细胞体外成熟的影响.结果显示,当FSH的添加浓度为0.25～2.0μg/mL及LH的添加浓度为0.25～2.0μg/mL时,猪卵母细胞的核成熟率极显著高于没有添加FSH和LH的对照组(P＜0.01),而FSH和LH不同浓度组合之间对猪卵母细胞核成熟影响差异不显著(P＞0.05).结果表明,成熟液中同时添加0.25μg/mL FSH和0.25μg/mL LH便能极显著地促进猪卵母细胞的核成熟率,国产FSH和LH用于猪卵母细胞体外成熟研究是可行的.     

MLF植物乳杆菌R23培养基优化

根据乳酸菌的营养需求,采用均匀设计优选具有苹果酸乳酸发酵能力植物乳杆菌R23生长的培养基组分,并对培养基进行正交优化,筛选出无Mn2+及含Mn2+培养基LH16、LH18组合.采用LH16、LH18培养基培养植物乳杆菌R23,在25℃恒温培养24 h,菌量分别达到3.40×109 cfu·mL-1和6.67×109 cfu·mL-1.     

大刺鳅促黄体生成素基因克隆及其组织表达分析

[目的]克隆大刺鳅(Mastacembelus armatus)促黄体生成素(LH)基因及明确其表达规律,为进一步阐明LH基因在大刺鳅性腺发育过程中的生理功能及揭示大刺鳅的生殖调控机理提供参考依据.[方法]采用RACE克隆大刺鳅LH基因cDNA全长序列,从GenBank中选择硬骨鱼类、两栖动物、鸟类和哺乳动物等物种的LH氨基酸序列,通过ClustalX 2.1进行氨基酸序列比对,以MEGA 6.0中的邻接法(NJ)构建系统发育进化树,并应用实时荧光定量PCR检测分析大刺鳅LH基因在不同组织及不同性腺发育期的表达情况.[结果]大刺鳅LH基因cDNA序列全长799 bp,包括224 bp的5'非编码区(5'-UTR)、131 bp的3'非编码区(3'-UTR)和444 bp的开放阅读框(ORF),共编码147个氨基酸残基,第1~22位氨基酸残基组成其信号肽区域.大刺鳅LH氨基酸序列C-末端区域高度保守,但N-末端区域与其他硬骨鱼类、两栖动物、鸟类和哺乳动物存在明显差异.大刺鳅LH氨基酸序列与其他鱼类的LH氨基酸序列同源性较高,其中与黄鳝(Monopterus albus)的亲缘关系最近.大刺鳅LH基因在其脑组织中的相对表达量最高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.05);在卵巢、心脏、肝脏和精巢中的相对表达量次之;大刺鳅LH基因在不同发育期卵巢和精巢中的表达变化趋势一致,从II期开始其相对表达量随之增加,至V期时达峰值.[结论]大刺鳅LH氨基酸序列具有高度保守区域,其基因在各组织中广泛表达,尤其在脑组织和性腺中具有较高表达量,提示LH的靶基因可能在脑—垂体—性腺轴上,参与大刺鳅的性腺发育调控,主要促进卵母细胞和精子成熟并刺激排卵或排精.     

不同山羊品种促黄体素分泌状况对繁殖性能的影响

为了解促黄体素(LH)分泌状况对不同品种山羊繁殖性能的影响,选择河北中部地方山羊(冀中山羊)发情正常、健康的经产羊和青年羊为试验组,太行山羊为对照组。放射免疫法跟踪测定发情周期内血液LH含量。比较不同群体和繁殖状况山羊的LH含量的相对波动周期、振幅变化,并对LH含量变化与排卵数进行相关分析。在发情周期内,冀中山羊LH含量的波动振幅显著高于太行山羊,经产冀中山羊LH含量的相对波动周期显著长于其他群体,LH的波动频率与排卵数呈负相关。结果表明:(1)在繁殖周期内LH含量波动振幅和相对波长是影响山羊排卵数的主要因素;(2)经产冀中山羊长的LH作用时间和高的LH浓度振幅,可使优势卵泡数目增多,也保证了LH等促性腺激素启动卵泡成熟排卵的足够时间;(3)繁殖性能发育成熟过程和LH对繁殖性能的作用机制存在种群差异。     

贵州黑山羊促黄体素β基因多态性及其与产羔数的关系

通过对贵州黑山羊LHβ基因序列进行分析,研究贵州黑山羊LHβ基因的多态性及其与产仔数问的关系.结果表明,在贵州黑山羊30只母羊的LHβ基因832 bp核苷酸系列中,共发现2个变异位点,分别位于138 bp和240 bp处,均为同义变异,其中240 bp处碱基由C变成T,且变异前后的平均产仔数相同,而在138 bp处的碱基由G变成C,形成AA和AB 2种基因型,AB基因型的羊比AA基因型的平均产仔数多产1.02只,且差异显著(P<0.01).说明,LHβ基因138 bp住点的多态性与贵州黑山羊繁殖性能之间可能存在相关性.     

非繁殖季节太行山羊胚胎移植方案研究

对48只太行山羊(供体羊)、40只布尔山羊和120只唐山奶山羊(受体羊)进行了同期发情、超数排卵和胚胎移植试验.试验结果表明:CIDR+PMSG组对布尔山羊同期发情,有效发情率为75%;CIDR+FSH组对唐山奶山羊同期发情,有效发情率为73%;CIDR+FSH+LH组平均可用胚胎数与CIDR+PMSG组和CIDR+PMSG+LH组差异均达到极显著水平(P<0.01),与CIDR+FSH组差异显著(P<0.05).用CIDR+FSH+LH法超数排卵时,CIDR+FSH组对唐山奶山羊进行同步发情,受体妊娠率为56%;CIDR+PMSG组对布尔山羊同步发情,受体妊娠率为60%水平.因此,在非繁殖季节对太行山羊采用CIDR+FSH+LH法超数排卵和以布尔山羊及唐山奶山羊为受体分别用CIDR+PMSG和CIDR+FSH同步发情来进行胚胎移植的技术方案是可行的.     

湖羊与美利奴羊发情期外周血浆中促黄体素脉冲分泌的差异

据Baird等(1981)~[2]报道,绵羊在卵泡期卵泡的成熟和排卵依赖于基础LH值的上升和LH脉冲频率的增加。MeNatty K.P.等~[3]指出,多胎的波罗拉羊与单胎美利奴羊相比,LH脉冲的幅度较大,但分泌频率则相似。本试验的目的是测定多胎的湖羊和单胎的美利奴羊发情后至排卵峰出现前LH脉冲的幅度和频率变化的差异,以探测其与湖羊多胎性的关系。 试验在1988年9～10月进行.试验羊为经产3～5岁母羊,膘情中等。用公羊于5:00～6:00     

高产纤维素酶的绿色木霉菌种的诱变和筛选(英文)

[目的]诱变和筛选高产纤维素酶的绿色木霉菌种。[方法]利用紫外线对出发菌株进行诱变,经过初筛和发酵检测挑选出高产纤维素酶的菌株。[结果]筛选到高产纤维素酶的绿色木霉K6,酶活是出发菌株的1.39倍。[结论]诱变筛选得到的K6菌株高产纤维素酶,为秸秆纤维素的利用奠定了基础。     

产耐热性纤维素酶菌株的分离·鉴定及其酶学性质研究

[目的]筛选耐热性纤维素降解细菌菌株,进行鉴定并研究其酶学特性。[方法]采用刚果红法从腐烂秸秆与腐殖质土壤样品中分离纤维素降解菌,通过形态学观察与16S rRNA序列分析鉴定其种属,并对该纤维素酶进行酶学性质研究。[结果]筛选到1株纤维素酶活性高的菌株NP29,经鉴定该菌株为芽孢杆菌属(Bacillus)微生物。对该菌所产纤维素酶酶学特性的研究表明,该酶反应的最适pH为4.5,最佳反应温度为65℃,具有良好的pH稳定性和热稳定性。在37℃、pH7.0的条件下,该菌株在发酵36 h后纤维素酶活性可达1.8 U/ml,且产酶量与细菌生长密切相关。[结论]     

高产纤维素酶的黑曲霉菌种的选育

[目的]为纤维素的进一步开发利用奠定理论基础。[方法]选取菌落直径较大的黑霉菌株W1作为出发菌株进行紫外线诱变,检测诱变菌株在不同发酵时间的纤维素酶活力。[结果]黑曲霉W1经紫外线诱变10 min达到92%致死率。在试验检测的108 h范围内,随着培养时间在一定范围内延长,出发菌株W1菌株和从中筛选出的高产纤维素酶菌株NW1的酶活均有不同程度的提高,NW1在28℃100r/min培养84 h后酶活最高达到1.515 U/ml,W1培养84 h酶活达到0.958 U/ml,较出发菌株W1提高了1.58倍。之后2者的酶活都随着培养时间的延长稍有降低。利用0.1%刚果红染液初步检测诱变10 min的黑曲霉分泌纤维素酶情况,结果发现诱变菌株NW1分泌纤维素酶能力最强。[结论]黑曲霉诱变菌株具有较强的分泌纤维素酶的能力。     

纤维素酶产生菌的诱变与筛选

[目的]为提高纤维素酶产生菌的酶活力。[方法]以抚顺近郊堆积腐烂秸秆的土壤为分离源,利用CMC刚果红平板培养基筛选出纤维素水解圈与菌落直径比值(Hc值)较大的菌株Y-07。以Y-07为出发菌株,在最适诱变剂量条件下,对其进行紫外线诱变和亚硝酸诱变。[结果]经过3轮复筛,紫外线诱变后的U10菌株为试验中获得的高产纤维素酶菌株,其酶活最高达到2.499 IU/ml,其活性是Y-07的3.41倍。[结论]该方法为进一步提高纤维素酶产生菌的酶活力奠定了基础。     

高产碱性纤维素酶细菌的筛选鉴定及其酶学特性与发酵条件研究

【目的】从自然环境中分离筛选高产纤维素酶的菌株,开展碱性纤维素酶的酶学特性分析,为该菌株及所产纤维素酶的综合开发利用打下基础。【方法】采用羧甲基纤维素钠（CMC_Na）平板筛选法筛选纤维素酶高产菌株,利用生理生化分析结合分子生物学法对菌株进行鉴定,并通过3, 5-二硝基水杨酸（DNS）法研究其活性特征与发酵条件。【结果】在长期覆盖枯树叶的土壤中分离获得1株高产碱性纤维素酶的菌株,经鉴定该菌株为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）,名称为B. cereus strain CQNUX 3-1。酶活性分析显示该菌株胞外分泌液具有内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶及β-葡萄糖苷酶的活性,其酶活力分别达107.7、33.1和155.6 U/mL。酶学特征分析表明3种酶组分均具有较好的耐碱和一定的耐高温能力。其中,内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的最佳反应温度分别为70、60和40℃;最佳反应pH分别为8.0、9.0和9.0;Fe3+能增加3种酶的酶活力,而β-葡萄糖苷酶具有较好的EDTA、尿素和Cu2+耐受性。发酵条件对菌株产酶的分析结果表明,该菌株发酵温度在37℃较适宜;发酵第4 d时的酶活力达最大值;该菌株能在碱性发酵环境下生长并产酶,在初始pH为7.0时发酵酶活力最高。【结论】筛选获得的纤维素酶高产菌株B. cereus strain CQNUX 3-1所生产的纤维素酶具有较高的反应温度适用性和较强的碱耐受性,菌株发酵产酶温度适中,且有较宽的发酵pH适用范围,可作为碱性纤维素酶生产资源菌株,具有应用于纤维素酶制剂制备与生产、纤维素资源综合利用等领域的潜力。     

地衣芽孢杆菌LCB-8的紫外诱变及优良菌株的选育

[目的]对地衣芽孢杆菌LCB-8进行紫外诱变,以提高其产淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶的能力。[方法]利用紫外线进行诱变,并对诱变株淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶的活力进行定性和定量测定。[结果]当紫外诱变的时间为30 s时,菌落的致死率达72.4%,因此紫外线照射诱变最佳时间为30 s。经初筛和复筛,得到2株较好的诱变株。其中,DY-97的淀粉酶活提高150%,蛋白酶活提高78%,纤维素酶活提高17%;DY-34的纤维素酶活提高31%,淀粉酶活提高46%,蛋白酶活提高64%。[结论]通过诱变筛选得到的DY-97可用于含蛋白质和淀粉较多的饲料发酵,而DY-34可用于含纤维素较多的饲料发酵。     

紫外线诱变黑曲霉提高产酶活力的研究(英文)

[目的]选育高产纤维素酶生产菌。[方法]以一株黑曲霉(Aspergillus niger)为出发菌株,经过紫外线(UV)诱变处理,选育出一株纤维素酶高产菌株生产菌。[结果]在适宜的条件下,选育得到的菌株2(15)产CMC活力最强,与出发菌株相比提高了近50%。[结论]今后应用于饲料生产中提供基础。     

一株片烟中纤维素降解菌的筛选鉴定及其初步应用研究

采用刚果红平板法从津巴布韦醇化片烟上筛选纤维素降解菌,根据形态学、生理生化特征以及16S rRNA核酸序列对所筛菌株进行鉴定,并对其酶学性质和片烟降解进行研究。结果表明:初步鉴定所筛得产纤维素酶活较高的菌株C-11属于枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。该菌株所产纤维素酶催化最适温度为50℃、最适pH值为7.0。Fe3+和Ca2+对酶活力有促进作用,Mg2+对酶活力影响较小,而K+、Co2+、Zn2+、Na+对酶活力有不同程度的抑制作用。该菌株所产纤维素酶降解片烟中纤维素的最适温度为50℃,最适时间为2 h,片烟中的纤维素失重率达到41.23%。     

海南树栖白蚁肠道中高产纤维素酶菌株的筛选

以栖息在海南印度紫檀树上的等齿印白蚁的变种为材料,通过以羟甲基纤维素钠（CMC-Na）作为唯一碳源的选择性培养基的筛选,获得1株高产纤维素酶的菌株,经初步鉴定,该菌为芽孢杆菌属的细菌.发酵培养48 h,该菌所产纤维素酶的活性达到（7.813±0.340）U·mL^-1.     

低纤维素酶背景里氏木霉菌株的构建和应用

丝状真菌里氏木霉（Trichoderma reesei）产生的纤维素酶主要包括纤维二糖水解酶和内切葡聚糖酶。在使用里氏木霉表达外源基因时，它们会形成较高的纤维素酶背景，而且其表达还可能会导致对细胞转录、翻译和分泌等相关资源的占用。应用CRISPR/Cas9技术，在体外组装Cas9/gRNA复合物并转化里氏木霉以定点敲除主要的纤维二糖水解酶cbh1基因，同时结合RNAi干扰技术来沉默主要的内切葡聚糖酶eg2基因，以期一步构建里氏木霉低纤维素酶背景的表达系统。获得了一株纤维素酶表达显著下降的11号转化子SUS6。该转化子中，cbh1的表达完全消失，而eg2基因的表达水平较出发菌株SUS5降低了98%。以该转化子为宿主表达外源基因NfBgl3A，两个代表性转化子的β-葡萄糖苷酶酶活最高分别为172.4和79.3 U·mL^-1，远高于以出发菌株（高纤维素酶背景）为宿主表达β-葡萄糖苷酶酶活（两个代表转化子分别为11.6和31.9 U·mL^-1）。因此，构建低纤维素酶背景的菌株作为表达宿主，还可明显的提高某些异源基因的表达水平。