中性蛋白酶酶解蛋清制备活性肽的研究

研究了AS1398中性蛋白酶酶解鸡蛋蛋清制备小分子活性肽,确定了酶解的最佳工艺:pH值8.0,酶解温度60℃,底物浓度4%,酶加入量为底物浓度的7%,水解时间4h.在此条件下,水解度达到26.1%.用SephadexG-15测定了水解物分子量分布,结果表明:水解产物中的主要成分是分子量集中在1 300Da的寡肽.     

酶法水解螺旋藻蛋白研究

[目的]研究木瓜蛋白酶对螺旋藻蛋白的水解作用。[方法]采用正交试验设计分析温度、酶浓度、pH值、水解时间对水解度的影响,利用葡聚糖凝胶柱Sephadex G-25层析测定螺旋藻多肽分子量。[结果]木瓜蛋白酶水解螺旋藻蛋白的最适宜工艺参数为:温度55℃,酶与底物比0.4%,时间3 h,pH值6.0。[结论]当水解度为82.6%时,2个螺旋藻多肽洗脱峰的分子量分别为2 992和231 Da。     

碱性蛋白酶水解大豆多肽及抑制ACE效果的研究

[目的]为了进行碱性蛋白酶水解大豆多肽及抑制ACE效果的研究。[方法]利用胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和碱性蛋白酶分别水解大豆蛋白,制备具有ACE抑制活性的大豆多肽,通过正交优化试验确定碱性蛋白酶的最佳水解条件,考察底物浓度、反应时间、反应温度与大豆蛋白酶解多肽对ACE抑制活性的影响,并将超滤法和聚丙烯酰胺凝胺电泳技术相结合,考察大豆蛋白酶水解物的分子量分布。[结果]结果表明,碱性蛋白酶的最佳水解条件为底物浓度5%,加酶量4%,水解时间2h。[结论]该研究为更好地利用大豆蛋白展示了良好的应用前景。     

人工养殖中华鲟鱼皮中胶原蛋白提取工艺研究

[目的]研究确定人工养殖中华鲟鱼皮中胶原蛋白的酶法提取工艺。[方法]以胶原蛋白得率为指标,采用单因素试验,考察各因素对人工养殖中华鲟鱼皮中胶原蛋白得率的影响。[结果]胃蛋白酶为最适宜提取酶,人工养殖中华鲟鱼鱼皮中胶原蛋白提取的最佳条件为料液比1∶10 g/ml,加酶量2.0%,提取时间6 h,胶原蛋白的得率为82.7%,含量为49.9%。[结论]该提取工艺稳定,提取率高,适用于人工养殖中华鲟鱼鱼皮中胶原蛋白的提取。     

核桃蛋白中性蛋白酶水解物的制备及其抗氧化活性研究

[目的]研究制备核桃蛋白水解物的最佳工艺条件及水解物的抗氧化活性。[方法]以核桃蛋白为底物,采用正交试验研究制备其中性蛋白酶水解物的工艺条件,通过测定自由基清除能力研究酶水解物的抗氧化活性。[结果]制备核桃蛋白酶水解物的最优工艺条件为:温度40℃、底物浓度4%、酶浓度4 000 U/g、pH值8.0;核桃蛋白酶水解物的水解度与其对羟自由基(OH.)和超氧阴离子自由基(O2.)的清除能力有关,其水解度为24.2%时对羟自由基(OH.)和超氧阴离子自由基(O2.)的清除率分别为17.0%和52.0%。[结论]采用Sephdex G-25凝胶柱层析对水解度为24.2%的酶水解物进行分离,得到了A、B、C和D 4种肽混合物,其中,肽混合物C的自由基清除能力最大,肽混合物D最小。     

有机酸提取草鱼皮胶原蛋白的工艺研究

[目的]研究草鱼皮基本成分及鱼皮胶原蛋白的提取工艺。[方法]通过正交试验确定有机酸提取草鱼胶原蛋白的最佳提取工艺条件，并对所提取的胶原蛋白进行紫外光谱分析币口氨基酸组成分析。[结果]结果表明，采用0.5mol/L的柠檬酸，料液比为1：10，溶胀时间为24h时，可充分提取草鱼皮中的胶原蛋白，提取率可达92．88％。[结论]该研究可为开发草鱼的附产物提供科研依据。     

罗非鱼鱼皮酸溶性胶原蛋白的制备工艺研究简

[目的]研究从罗非鱼鱼皮中用酸溶剂提取胶原蛋白的最佳条件.[方法]以罗非鱼鱼皮为原料,利用酸处理提取胶原蛋白.以提取溶液、浓度、浸提时间、料液比为因素,通过测定其羟脯氨酸含量,计算不同提取条件下胶原蛋白的得率.再利用响应面法对提取条件进行优化,对拟合多项式回归模型进行分析.[结果]由响应面优化得到罗非鱼鱼皮中胶原蛋白最佳酸提取工艺条件为：乙酸浓度0.53 mol/L,浸泡时间64.8h、料液比1∶25 g/ml,此条件下胶原蛋白提取量试验均值为244.86 mg/g.[结论]研究可为罗非鱼鱼皮中胶原蛋白的提取利用提供参考.     

Alcalase蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究

[目的]研究Alcalase蛋白酶对大豆分离蛋白的水解作用及水解物的性质。[方法]通过单因素试验,研究pH值、温度、酶浓度、底物浓度等因素对Alcalase蛋白酶酶解大豆分离蛋白的影响,通过正交试验确定Alcalase蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳水解条件。[结果]Alcalase蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳水解条件是pH值8.0、温度60℃、酶浓度1000U/g、底物浓度3%,水解时间2h,大豆分离蛋白水解度为46.13%。[结论]酶解后大豆分离蛋白的水解度达到了制备大豆多肽的要求。     

不同分子量壳聚糖对大鼠肝脏止血和生物相容性的影响

[目的]探究壳聚糖的分子量对其止血和生物相容性方面的影响。[方法]选取分子量约1万、5万、10万Da的壳聚糖(脱乙酰度90%)为研究对象,建立大鼠肝创面模型,进行肝组织HE染色、PCNA免疫组化试验和扫描电镜观察。[结果]壳聚糖各组止血的时间比模型对照组明显缩短且组织粘连程度轻(P0.05),分子量对壳聚糖止血时间和减轻粘连方面影响差别不显著(P0.05)。壳聚糖各组均能引起肝细胞水肿,其中,分子量5万Da组影响程度最小,分子量1万Da组最大。分子量5万Da壳聚糖组肝细胞增殖活跃且电镜下肝细胞结构轮廓清晰,细胞核完整,细胞器良好;分子量10万Da组壳聚糖肝细胞轮廓模糊,细胞核有变性、损伤;分子量1万Da壳聚糖组增生活跃、轮廓大体清楚,线粒体水肿严重,内质网扩张和断裂。[结论]分子量5万Da壳聚糖对大鼠肝脏组织止血效果和生物相容性较好。     

乌贼内脏酶解多肽的制备和抗氧化活性研究

[目的]探讨乌贼内脏酶解多肽的制备和抗氧化活性。[方法]以乌贼内脏为原料,用胰蛋白酶对其进行水解,采用单因素和正交试验方法研究酶解温度、酶解时间、加酶量和pH对水解度和抗氧化性的影响;通过检测羟自由基清除率、DPPH清除率和还原力评价不同分子量水解物多肽的抗氧化性。[结果]当酶解温度为35℃,时间为5 h,加酶量为5 000 U/g,pH为7.5时,水解度最大;当酶解温度为40℃、时间为7 h、加酶量为4 500 U/g,pH为8.0时,水解物对羟自由基清除率最大。超滤后不同分子量多肽对羟自由基的清除率为3～5 kD3 kD以下5～10 kD;DPPH清除率:3～5 kD3 kD以下5～10 kD;还原力:3 kD以下3～5 kD5～10 kD。[结论]乌贼内脏酶解多肽具有较好的抗氧化活性,不同分子量多肽的活性不同。     

Study on Enzymatic Hydrolysis of Gadus morrhua Skin Collagen and Molecular Weight Distribution of Hydrolysates

Process parameters on enzymatic hydrolysis and molecular weight （MW） distribution of collagen hydrolysates from Gadus morrhua skin were investigated. The optimal process parameters were obtained by the single-factor and orthogonal experiments. The molecular weight distribution of hydrolysates was determined using both Sephadex G25 partition and high speed liquid chromatography electricity spray mass spectrum （HPLC-ESI-MS）. Collagen hydrolysates were first gained by an alkaline protease ＂alcalase＂ for 3 h at temperature （50~C）, pH （10.0）, substrate concentration （75 g L-~）, and E/S （3%）. The molecular weight distribution of collagen hydrolysates ranged from 300 to 1 500 Da, and most of peptides were under 1 200 Da. Sephadex G25 partition and HPLC-ESI-MS should be successfully employed to determine the molecular weight distribution of collagen hydrolysates.     

肉桂挥发油的抗氧化作用研究

[目的]研究肉桂挥发油的抗氧化活性。[方法]测定了肉桂挥发油的还原力、对脂质过氧化的抑制作用和清除自由基的能力。[结果]还原力的测定表明，肉桂挥发油（0．06％）与Vc（O．02％）相比较，效果相当（α=0．01）；肉桂挥发油具有较强的抗氧化能力和一定的清除自由基的能力。[结论]肉桂挥发油是一种较好的天然抗氧化剂。     

龙须菜蛋白质的提取及其酶解产物的抗氧化特性

以干燥后的龙须菜(Gracilaria lemaneiformis)粉为原料,采用超声辅助碱提酸沉法提取龙须菜蛋白质。首先通过单因素实验选择了影响龙须菜蛋白质提取率的因素及水平范围,然后以Box-Behnken中心组合设计原理建立二次响应面回归模型,确定了最佳提取条件为:碱浓度0.2 mol·L^-1、液固比24:1 (mL·g^-1)、超声时间70 min、超声功率482 W,在此条件下的龙须菜蛋白质提取率为73.78%。此外,对提取得到的龙须菜蛋白质进行了酶解,分别研究了木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、植物蛋白复合酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶对酶解产物抗氧化活性和分子量的影响。结果表明,在酶解4 h后,碱性蛋白酶酶解产物的抗氧化活性显著高于其他4种酶酶解产物和龙须菜蛋白质,其铁离子还原能力(ferric reducing antioxidant power, FRAP)、1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)自由基清除率和2,2'-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除率分别为81.88 μg·mL^-1、63.29%、64.25%,分子量主要集中在1 500 u以下。本研究可为龙须菜蛋白质的提取及其高值化利用提供一定参考。     

基于DPPH自由基清除能力的蝉蜕成分抗氧化活性研究

[目的]研究蝉蜕多巴胺成分在体外试验中自由基DPPH清除的效果.[方法]利用DPPH法测定蝉蜕成分的抗自由基活性.[结果]蝉蜕中分离得到2种N-乙酰基多巴胺聚合物（2R,3S）-2-（3’,4’-二羟基苯基）-3-乙酰氨基-7-（N-乙酰基-2＇＇氨基乙基）-1,4-苯并二氧六环（1）和（2R,3S）-2-（3’,4’-二羟基苯基）-3-乙酰氨基-7-（N-乙酰基-2”-氨基乙烯基）-1,4-苯并二氧六环（2）,化合物1和2在DPPH自由基清除试验中表现出抗自由基活性（1：EC50=8.9 μmol/L和2：EC50 =7.8 μmol/L）.[结论]蝉蜕多巴胺成分具有较强的抗自由基活性.     

山黄皮果总黄酮体外清除自由基活性研究

[目的]研究山黄皮果总黄酮体外清除自由基的活性。[方法]采用Fenton(邻二氮菲)法和邻苯三酚自氧化法(325 nm)评价山黄皮果总黄酮体外清除自由基活性,以Vit C为阳性对照品。[结果]山黄皮果总黄酮清除羟自由基和超氧阴离子自由基的EC50分别为58.7和23.5μg/ml,Vit C清除羟自由基和超氧阴离子自由基的EC50分别是128.8和77.6μg/ml,表明山黄皮果总黄酮的清除能力比Vit C强。[结论]山黄皮果总黄酮具有较强的体外清除自由基能力,是一种天然有效的自由基清除剂。     

不同分子量枸杞多糖体外抗氧化活性研究

[目的]研究不同分子量枸杞多糖的体外抗氧化活性。[方法]采用膜分离技术对枸杞多糖(LBP)进行分离,以得到分子量<1万(LBP1)、1万～3万(LBP2)、3万～5万(LBP3)、>5万(LBP4)的多糖,并对LBP及这4种小分子枸杞多糖的体外抗氧化活性进行测定。[结果]不同分子量的小分子多糖抗氧化活性均高于粗多糖,其中LBP2清除超氧阴离子自由基作用、清除羟自由基活性、总抗氧化能力最强,显著高于LBP。[结论]为合理开发与高效利用枸杞多糖提供了新方法。     

金华火腿副产品酶解物的MRPs抗氧化活性

 【目的】分析金华火腿副产品酶解物的组成,研究其美拉德反应产物(MRPs)的抗氧化活性。【方法】采用反相高效液相色谱对酶解物的氨基酸组成进行测定,高效凝胶过滤色谱分析相对分子质量分布情况。通过与葡萄糖、木糖进行反应制备MRPs,经体外试验评定MRPs的抗氧化活性。【结果】酶解物中游离氨基酸占5.52%,总氨基酸中必需氨基酸含量为21.68%;酶解物主要由相对分子质量180—500 D的成分组成。随着反应时间的延长,金华火腿副产品酶解物的MRPs颜色不断加深,DPPH自由基清除率与还原力均呈上升趋势。酶解物与木糖的反应速度相对较快;在反应90 min时,DPPH自由基清除率与还原力显著高于与葡萄糖的反应产物,抗氧化活性更强。【结论】金华火腿副产品酶解物具有较高的营养价值,主要由2—4肽构成,与葡萄糖、木糖反应所得的MRPs均具有一定的DPPH自由基清除能力和还原力。     

萝卜清除DPPH自由基活性研究

[目的]研究萝卜清除DPPH自由基的活性.[方法]通过对萝卜叶水提物、水提物不同极性部位萃取物、萝卜中脂肪油类有效成分β-谷甾醇进行清除DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）自由基活性测试,对萝卜的抗氧化能力进行评价.[结果]以柠檬酸为对照其清除能力大小顺序为：乙酸乙酯层＞二氯甲烷层＞萝卜叶水提物＞β-谷甾醇＞石油醚层＞柠檬酸.[结论]萝卜具有较好的抗氧化能力.     

花生活性肽的分子量分布及抗氧化活性研究

[目的]研究花生活性肽的分子量分布及其与抗氧化活性的关系。[方法]采用截留分子量8.0、3.5、1.0 kD的透析袋对花生蛋白酶水解液进行分级分离,得到不同分子量范围的抗氧化肽,分别测定其清除自由基的能力,并与Tricine-SDS-PAGE技术相结合,考察花生蛋白酶解物的分子量分布。[结果]分子量范围在1.0 kD以下的多肽混合物含量分别为碱性蛋白酶和风味酶的总水解物的76.21%和83.42%,不同分子量范围的水解物均具有一定的清除自由基的能力,且随分子量的减小而增大,分子量范围在1.0 kD以下的组分对碱性蛋白酶和风味酶中的自由基的清除能力最强,分别为(87.41±0.66)%和(67.88±0.48)%。[结论]花生活性肽的抗氧化能力较强,尤其是分子量1.0 kD以下的短肽,具有较好的开发应用前景。