橘小实蝇生物学特性研究

通过对橘小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)在18℃、22℃、25℃、28℃、30℃下卵、幼虫、蛹的发育历期及室内条件下成虫羽化、取食、交配、产卵等生物学特性的研究，结果表明，橘小实蝇卵、幼虫、蛹的发育历期随温度的降低而延长，其发育最适温度为25～30℃。在25℃下，卵、幼虫、蛹的平均发育历期分别为1．5d、19．5d和12．5d；在28℃下，卵、幼虫、蛹的平均发育历期分别为1．3d、16d和9d。成虫具趋光性，羽化高峰为9：00～10：00，8：00～10：30和15：00～18：00为取食时间，多数成虫只交配1次，交尾高峰为19：30～22：30，产卵高峰为16：00～18：30，产卵开始后约20d达产卵高峰期，卵聚产。初孵幼虫具群聚性和负趋光性，幼虫成熟后具趋光性．跳跃能力极强。老熟幼虫经1～2d预蛹期后化蛹，湿度以60％-70％为宜。     

瓜实蝇的发育起点温度和有效积温研究

在不同恒温条件下测定了瓜实蝇的发育历期,并应用直线回归法计算出瓜实蝇卵、幼虫、蛹和成虫发育起点温度分别为12.16 ℃、11.91 ℃、11.65 ℃和13.99 ℃;有效积温分别为17.22 d·℃、76.38 d·℃、134.92 d·℃和802.57 d·℃.     

低温冷藏对亚洲玉米螟蛹发育及成虫繁殖力的影响

研究了亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)蛹低温冷藏(T=4~6℃、RH=70±10%)不同时间对蛹的发育历期、羽化率和成虫产卵量、卵的历期、卵的孵化率的影响.结果表明,低温冷藏5、10、15 d蛹的发育历期与对照无显著差异,冷藏20 d以上蛹的发育历期显著缩短;冷藏15 d以上的蛹的羽化率比对照显著降低,冷藏20 d的羽化率仅为29.50%,冷藏30 d不能羽化.低温冷藏对成虫的生殖力也有影响,冷藏5 d其成虫的产卵量、卵的孵化率与对照无差异,冷藏10、15和20 d的平均单雌产卵量分别为122.54、115.85和18.3粒,孵化率分别为92.25%、88.35%和65.25%,比对照(309.76粒和97.50%)显著降低,但卵的发育历期均无差异.研究结果表明,在4~6℃、RH70±10%条件下,亚洲玉米螟蛹低温冷藏最佳时间为5 d,最长时间不要超过15 d.     

松墨天牛有效积温测定

研究测定了松墨天牛(Monochamus alternatus)的卵、幼虫、蛹在不同温度条件下的发育起点温度(C)和有效积温(K)。卵期恒温条件下:C=14.1士0.93℃,K=100.83士7.16日度;幼虫恒温条件下:C=12.6士1.06℃,K=657±6.4日度。幼虫自然变温条件下1~3龄幼虫C=13.1±0.78℃,K=327±10.96日度。4~5龄幼虫C=12.4±1.24℃,K=314±8.24日度;蛹期恒温条件下:C=11.18±0.91℃,K=169±10.68日度。以此对陕南秦巴山区的松墨天牛成虫羽化盛期和幼虫钻蛀期进行准确预测,为防治适期提供了依据。观察结果表明:松墨天牛在饲养条件下成虫羽化期6~10 d,交配2~4 d后产卵,雌虫平均产卵量62.3个;卵期为5~7d,卵的孵化率为83.4%;幼虫共5龄,1~5龄幼虫龄期分别为5~8 d、8~11 d、8~12 d、12~15 d和8~11 d,幼虫化蛹率82.49%;蛹期为8~14 d,蛹的羽化率为89.58%。成虫一生的产卵量169.89±53.22粒。     

固沙林新害虫柠条瘿潜蝇(Hexomyza caraganae)生物学特性研究

柠条癭潜蝇(Hexomyza caraganae)是在甘肃陇西地区固沙主要树种柠条(Caragana korshinskii)上新发现的蛀干害虫。本研究在温度25℃,相对湿度(RH)50%、光周期15L∶9D的室内条件下,观察柠条瘿潜蝇羽化习性、成虫寿命、交尾和产卵,幼虫的取食和化蛹习性等;在田间定点定时观察年生活史。结果表明,柠条瘿潜蝇在甘肃陇西地区1a发生1代,以2龄幼虫在潜道中越冬;次年3月下旬-4月上旬蜕皮进入3龄;4月上中旬3龄幼虫老熟化蛹;4月下旬至5月下旬为成虫期,成虫出现2~24h开始交尾;交尾完成后的12~24h开始产卵,卵期从4月中旬持续到6月中旬。在室内条件下,柠条瘿潜蝇卵、幼虫、蛹、成虫的发育历期分别为36、265、19、6d,完成1个世代约需320d。其卵孵化率、幼虫化蛹率、蛹的羽化率分别为55%、61%、70%。羽化多发生在6:00-12:00,羽化后静伏整理翅膀之后开始飞行;成虫雌雄性别比为7∶4,雌虫平均寿命为5.6d,雄虫平均寿命为6.1d;成虫交尾多发生于上午,交尾时间25~35min;交尾结束12~24h开始产卵,产卵时用产卵器刮破寄主皮层,将卵产在叶基芽苞周围皮下湿润处;1龄幼虫主要取食柠条韧皮部,2龄幼虫逐渐由韧皮部向木质部蛀食,3龄幼虫食量剧增,大量排泄,并在潜道上部或下部蛀掘羽化孔。研究明确了柠条瘿潜蝇在田间的年生活史及发生规律,确定了其成虫性比、寿命、产卵方式以及幼虫蛀食习性等主要生物学特性,可为柠条瘿潜蝇的人工饲养及科学防控提供基础资料。     

金凤蝶生物学特性研究

通过不同恒温条件下饲养金凤蝶Papilio machaon Linnaeus以研究其生长发育。结果表明,金凤蝶卵、幼虫和蛹的发育历期均与温度呈直线关系,发育起点温度分别为8.32℃、9.11℃和8.95℃,有效积温分别为79.39d.℃、297.99 d.℃和182.47 d.℃;16℃条件下蛹滞育。9月份起室内常温条件下金凤蝶卵、幼虫和蛹的发育历期分别为（2.98±1.04）d、（21.84±2.67）d和（22.52±12.52）d;孵化率、化蛹率和羽化率分别为66.13%、55.28%和95.59%;绿色蛹占91.18%,明显高于褐色蛹;蛹质量（1.05±0.16）g,成虫性比（♀/♂）为0.97。     

不同寄主营养条件下的瓜实蝇实验种群生命表

30℃下采用苦瓜、黄瓜、丝瓜饲养的瓜实蝇的发育历期分别为44.82、43.12、46.08 d,幼虫、蛹、世代历期、雄成虫寿命差异显著;平均每雌产卵量分别为878.41、895.65、806.35个,差异显著;采用苦瓜、黄瓜、丝瓜饲养的瓜实蝇实验种群的种群趋势指数(I)分别为228.39、268.70、201.59,净生殖率(R0)分别为59.2532、94.0800、48.9910,差异显著;其它生命表参数差异不显著;周限增长率(λ)均大于1,说明瓜实蝇的种群为正增长.     

低温储存普通草蛉卵对其生命力的影响

【目的】研究普通草蛉卵低温储存的有效时间。【方法】低温储存普通草蛉卵,分析比较不同储存时间对孵化率、幼虫历期、化蛹率、蛹期及羽化率的影响。【结果】普通草蛉卵在(6±1)℃、RH(60±5)%的环境下低温储存7¹3 d,其孵化率、幼虫历期、化蛹率、蛹期、羽化率等各处理间无显著差异。低温储存时间超过15 d,其孵化率、幼虫历期、化蛹率、羽化率出现显著差异。【结论】普通草蛉卵在(6±1)℃、RH(60±5)%的环境下,低温储存天数不宜超过13 d。     

花斑皮蠹生物学研究及幼虫密度对化蛹的影响

为搞清楚花斑皮蠹的生物学特性和幼虫密度与化蛹的关系,对花斑皮蠹采用室内饲养和系统观察.结果表明,(1)在相对湿度为(75±3)%,温度为35℃、32.8℃、27.8℃、22.8℃、17.8℃的条件下,花斑皮蠹的蛹期分别为(3.97±0.91) 、(4.07±0.88)、(5.13±0.89)、(9.41±1.49)、(18.8±4.3) d,成虫产卵前期分别为(2.14±0.69)、(2.25±0.59)、(2.43±0.92)、(4.53±2.34) 、(17.23±5.65) d,卵期分别为(5.59±0.49)、(5.9±0.97) 、(8.85±1.04) 、(13.79±1.0) 、(28.6±0.26) d,蛹平均羽化率为(98.7±0.4)%,每雌虫平均产卵量为(53.6±5.8)粒,卵平均孵化率为(82.8±3.7)%;(2)羽化后的成虫取食蜂蜜后其寿命相应延长,未交尾的雌虫寿命长于雄虫,而交尾后则相反;(3)虫口密度越大末龄幼虫化蛹历期越长;(4)雌雄性比为1.0:1.1.     

温度与花绒寄甲发育及生殖关系的研究

【目的】确定温度与花绒寄甲卵、幼虫、茧蛹发育的关系,为其人工饲养提供依据。【方法】分别用不同温度处理花绒寄甲的卵、幼虫、蛹和成虫,每天定时观察记录其孵化、发育、化蛹和羽化情况,以及不同营养条件下成虫的死亡数量和产卵情况。【结果】花绒寄甲卵期发育速率与温度的关系符合幂指数模型,有效积温K和发育起点温度C分别为(126.09±9.58)d.℃和(12.802 2±0.330 2)℃;幼虫期和茧蛹期发育速率与温度的关系符合指数模型,K、C分别为(139.0±8.29)d.℃,(11.7±0.58)℃和(265.24±9.00)d.℃,(13.9±0.99)℃。在缺乏营养及16~19℃条件下,花绒寄甲成虫组群死亡率达50%的时间为62.2~63 d,当饲料供给充足时,在22~25℃条件下成虫的产卵量最大。【结论】保障食物供给后,花绒寄甲成虫在所有温度处理下的寿命均达5年以上,其饲养和繁殖的最适宜温度为22℃。     

农杆菌介导pta和sb401基因共转化水稻的研究

利用农杆菌介导法,将半夏凝集素(pta)基因和高赖氨酸蛋白(sb401)基因导入水稻中,经潮霉素抗性筛选,得到70株独立再生植株.通过PCR检测,从中筛选出18株转基因植株.对这些转基因植株当代进行Southern blotting分析表明:pta 基因和sb401基因已经共转化并整和到受体基因组中.对转基因植株后代的叶片进行RT-PCR分析表明:pta基因在转录水平上得到了有效的表达.测定10株T0转基因植株成熟种子的赖氨酸和总蛋白质量分数表明,与对照相比,赖氨酸和总蛋白的提高率分别为8.48%～35.34%和4.55%～32.74%,表明sb401基因在大部分转基因植株成熟种子中的蛋白质水平上得到了比较有效的表达.     

猕猴桃DCL、RDR和AGO基因家族的鉴定与分析

为研究猕猴桃RNAi抗病毒机制相关基因DCL、RDR和AGO。本研究采用blastp比对法和NPS@、SignalP-5.0及TMHMM 2.0等数据库对猕猴桃RNAi相关蛋白家族进行鉴定及其对应基础性质(如：亚细胞定位、二级结构等)的分析。结果在猕猴桃中共鉴定获得4个DCL、6个RDR和18个AGO基因，其中19个基因分布在13条染色体(即第3、6、9、12、13、16、17、18、19、23、26、27、29号染色体)上，另外9个基因未定位到染色体具体位置。 AcAGO1d、 AcAGO2a、 AcAGO2b、 AcAGO2d基因在19号染色体成簇存在。RDR基因和 AGO2/7基因包含的内含子较少，其他的AGO和DCL基因包含的内含子较为丰富。这些猕猴桃基因均与番茄更近缘，它们编码的蛋白质含有不同比例的二级结构类型，无规则卷曲占50%左右，其次是α-螺旋和β-折叠。本研究完善了猕猴桃DCL、RDR和AGO编码基因的鉴定，后分析其对应的基础性质，以期为猕猴桃抗病毒研究奠定基础。     

大豆铁蛋白基因GmFerritin在玉米中的遗传转化

使用In-Fusion试剂盒构建表达载体pCUB-Zein::ferritin-35s::bar,以玉米自交系齐319茎尖分生组织为受体,采用农杆菌介导法,将玉米胚乳特异启动子基因15 kDβ-Zein驱动的大豆铁蛋白ferritin基因转入玉米,共筛选出272株除草剂(草铵膦)抗性植株,其中108株PCR检测呈阳性,转化率达3.6%,初步判断Zein::ferritin基因已转入玉米基因组中。     

中华绒螯蟹Myostatin基因在蜕皮过程中的表达分析

本研究通过荧光定量PCR（qRT-PCR）技术对中华绒螯蟹Myostatin（EsMSTN）基因在不同组织及蜕皮阶段的表达情况进行了分析。结果显示,(1) EsMSTN在C期中华绒螯蟹肌肉组织中的基因表达水平最高,胸神经节和脑神经节中也有较高水平的表达,暗示EsMSTN基因的功能并不局限于肌肉生长的调节。(2) 在不同蜕皮阶段,肌肉中EsMSTN的基因表达水平在AB期最高,D期最低,推测EsMSTN可能正向调节中华绒螯蟹肌肉生长,参与肌肉组织蜕皮后的生长以及蜕皮前的萎缩过程;肝胰腺、上皮组织中EsMSTN的最高基因表达水平都出现蜕皮后的AB期,C期或D期相对表达量最低,这可能与上述器官的细胞增殖主要发生在AB期有关;胸神经节中EsMSTN的表达水平在E期最高,D期最低,暗示EsMSTN正向调节胸神经节中的神经发生。     

密穗小麦(Triticum compactum)Glu-1位点亚基组成分析

采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对来自21个国家的50份密穗小麦Glu-1位点亚基组成进行了鉴定与分析.结果表明,在3个位点共检测到15种不同的亚基类型,21种组合形式.其中,以2*,7 8,2 12和N,7 8,2 12组合为主,各占22%和16%.在各位点等位变异中,Glu-B1位点变异类型最多,共10种,以7 8(42%)、20(20%)和21(12%)为主.Glu-A1和Glu-D1位点各有3种和2种等位变异,分别以N(50%)和2 12(88%)为优势亚基.更为重要的是选出一些具有优质亚基的材料,其中1份材料亚基组合为(1、7 8、5 10),品质评分达到满分(10分)可供小麦遗传改良.     

球孢白僵菌MZ060812菌株对西花蓟马的致病性研究

【目的】明确球孢白僵菌MZ060812菌株对西花蓟马的致病性,为该菌株在农业害虫防治中的开发应用及后续研究奠定基础。【方法】采用浸渍法,测定球孢白僵菌MZ060812菌株不同孢子浓度对西花蓟马成虫和若虫的致病性。【结果】在3.0×105～3.0×108mL-1浓度下,球孢白僵菌MZ060812菌株对西花蓟马成虫的致死中时间(LT50)值分别为9.61,6.63,5.57和4.49d;致死中浓度(LC50)分别为3.307×108、1.528×107、4.030×106和5.839×105mL-1。对若虫的LT50值分别为8.51,6.81,5.00和4.02d;LC50分别为2.352×107、4.933×106、2.151×106和5.068×106mL-1。【结论】球孢白僵菌MZ060812菌株对西花蓟马有较好的防治效果。     

牦牛SPAG11基因克隆与生物信息学分析

【目的】克隆牦牛(Bos grunniens)精子相关抗原11(Sperm-Associated Antigen 11,SPAG11)基因,并了解其分子结构特征,为进一步研究牦牛SPAG11生物学功能奠定基础。【方法】从牦牛睾丸中提取总RNA,RTPCR扩增并克隆SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E基因,测序后进行生物信息学分析。【结果】克隆出牦牛SPAG11基因3个亚型:SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E,序列大小分别是351,408和261bp,分别编码117,129和80个氨基酸,其中SPAG11 D和SPAG11E序列包含1个完整开放阅读框(ORF),SPAG11C序列包含部分ORF。牦牛SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E核苷酸序列与黄牛(Bos taurus)相应序列相似性最高,而与黄牛β-防御素1相似性较低(50%)。3个蛋白亚型均具有β-防御素家族基本特性,生物信息学分析显示其均含有磷酸化位点。【结论】成功克隆牦牛SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E基因,明确了其编码蛋白的分子结构特征。     

寡糖对毛白杨抗溃疡病的诱导效应

【目的】寡糖可以诱导毛白杨愈伤组织产生防卫反应,以提高其抗病性,从而抵御杨树溃疡病菌的入侵。【方法】分别采用筛选出的杨树溃疡病菌菌丝体、壳聚糖、果胶糖活性较高的降解物寡糖A1、B、C3诱导毛白杨愈伤组织,以加无菌水为对照(CK),并在诱导48h后用针刺接种法接种杨树溃疡病菌,检测毛白杨愈伤组织中丙二醛(MDA)、富含羟脯氨酸糖蛋白(HRGP)及绿原酸含量的动态变化。【结果】3种寡糖A1、B、C3分别诱导48h后接种杨树溃疡病菌,毛白杨愈伤组织中MDA含量变化先略有升高,之后缓慢下降,在接种后60h急剧升高,并在接种60～96h毛白杨愈伤组织中MDA含量变化为:CK>寡糖C3>寡糖B>寡糖A1;毛白杨愈伤组织中HRGP含量在0～96h均有不同程度的增加,并且寡糖A1诱导并接种的毛白杨愈伤组织中HRGP和绿原酸含量明显高于寡糖B、C3及对照,毛白杨愈伤组织中绿原酸含量的变化趋势呈单峰曲线。方差分析表明,与接种前相比,3种寡糖A1、B、C3分别诱导并接种后毛白杨愈伤组织中MDA、HRGP及绿原酸含量均有极显著增加(P<0.01)。【结论】寡糖诱导并接种杨树溃疡病菌后,毛白杨愈伤组织中的MDA、HRGP及绿原酸含量均有明显提高,从而增强其抗病性。     

枸杞苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与表达分析

为研究枸杞苯丙氨酸解氨酶基因LcPAL在干旱和盐逆境中的作用,采用RT-PCR和RACE方法克隆了LcPAL基因(Genbank No.KX781247)。该基因cDNA长度为2 544bp,含有2 163bp的完整开放阅读框,编码720个氨基酸。蛋白序列分析表明,其包含典型的PAL酶活性中心序列(GTITASGDLVPLSYIA),与其他植物的PAL蛋白有很高的同源性。系统进化树表明,枸杞LcPAL与茄科植物的PAL蛋白聚为一类,说明两者的亲缘关系较近。利用实时荧光定量PCR方法检测发现,LcPAL基因在枸杞的叶中表达量最高,果实中表达量最少。其在聚乙二醇(PEG)、氯化钠(NaCl)胁迫下诱导表达,但表达模式不同。研究结果推测从枸杞中克隆获得苯丙氨酸解氨酶(LcPAL),是典型的PAL家族成员,在枸杞各组织发育过程中具有重要功能,且在枸杞抗干旱和抗盐逆境过程也起一定作用。     

胡萝卜类黄酮含量的测定及DcCHS基因家族的鉴定分析

查尔酮合成酶(chalcone synthase, CHS)是类黄酮合成过程中的第一个关键酶,具有重要的生理功能。测定胡萝卜不同发育时期、不同组织部位的类黄酮含量,并在全基因组水平上对胡萝卜CHS基因家族进行鉴定和分析。结果表明,无论在苗期还是收获期,胡萝卜叶中的类黄酮含量均极显著地高于根中的含量。叶中的类黄酮含量在不同发育时期无显著差异,而根中的类黄酮含量在不同发育时期却差异显著。胡萝卜基因组中共有12个DcCHS基因,分布于5条染色体上,氨基酸序列长度为253～398 aa,外显子1～3个。经预测,DcCHS蛋白均定位于细胞质,二级结构以α-螺旋和无规卷曲为主。DcCHS蛋白可分为ClassⅠ和ClassⅡ两类,含有10种保守基序,motif1、4、6、7为CHS蛋白N端结构域,motif2、3、8为CHS蛋白C端结构域。这些研究结果可为胡萝卜CHS基因的功能研究提供参考。