汤阴北艾内生真菌的分离鉴定与系统发育分析

对取样于河南汤阴县扁鹊庙内的艾草样品进行表面消毒后,进行内生真菌分离、纯化,基于5.8S-ITS区序列对所得菌株进行种属鉴定,并通过MEGA 7.0软件构建系统发育树。结果表明,从汤阴北艾的茎、叶中共分离得到13株内生真菌,隶属于3属(链格孢属Alternaria、耙齿菌属Irpex、球毛壳属Chaetomium)6种(链格孢菌Alternaria sp.、极细链格孢霉Alternaria tenuissima、球毛壳菌Chaetomium globosum、链格孢属链格孢菌Alternaria alternata、白菜黑斑病菌Alternaria brassicae、白囊耙齿菌Irpex lacteu),其中叶中为3属6种,茎中为1属2种,链格孢属真菌为两者共同优势真菌。根据亲缘关系,这些内生真菌可分为3大类。总体来看,汤阴北艾内生真菌群落结构较为单一,种群丰富度较低,优势菌属为链格孢属。     

薏苡种仁内生真菌的分离及其抗菌活性

为筛选薏苡种仁内生真菌的抗菌活性,采用组织分离法,从禾本科黍亚科蜀黍族薏苡种仁中分离内生真菌,采用菌饼法筛选其抗菌活性。通过5．8 S ITS 分子系统学鉴定菌种,高效液相色谱法（HPLC）分析鉴定菌种发酵液正丁醇提取物次的生代谢产物。结果表明：分离共获得23株薏苡种仁内生真菌,其中,有弯孢霉属、链格孢属、砖孢属、茎点霉属、灰软盘菌属、稻黑孢属、玉蜀黍赤霉属、曲霉属及其他真菌。57％的菌株至少对测试菌株中的1种具有抗菌活性,且 GZR19号菌株具有广谱抗菌活性并鉴定为1种茎点霉（Phoma sp ．）,其发酵液的次生代谢产物在该色谱条件下主要有4种物质含量较高,其中可能存在具有抗菌活性的化合物。     

杜仲内生真菌对植物病原真菌的抑菌活性研究

为了研究杜仲内生真菌对植物病原真菌的抑制作用,以苹果腐烂病菌(Cytospora sp.)、番茄灰霉病菌(Botrytis cintrea)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium f.sp.cucumerinum)、玉米大斑病菌(Helminthos porium turcicum)和白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)为供试菌种,对49株杜仲(Eucommia ulmoides Oliv)内生真菌及其次生代谢物进行了抑菌活性试验。结果表明,有22株内生菌至少对3种测试菌有抑制作用,9株内生菌对6种测试菌都有抑制作用;11株内生菌的次生代谢产物至少对3种测试菌有抑制作用,4株内生菌的次生代谢产物对6种测试菌都有抑制作用。说明从杜仲内生真菌中可以选择出对植物病原真菌具有良好抑制作用的菌种。     

油茶产黄酮内生真菌的初步研究

试验通过对前期从油茶中分离出的内生真菌进行液体发酵培养、浓缩发酵液等操作获得菌株的次生代谢产物,继而通过盐酸-镁粉颜色反应初筛和薄层层析法复筛,得到2株具有产黄酮能力的内生真菌。这2株内生真菌经形态学鉴定分属于青霉属(Penicillium)和链格孢属(Alternaria),并测得发酵液中的黄酮含量分别为0.011 3和0.013 5 mg/m L。     

山东部分地区烟草赤星病病原菌的形态学与分子生物学鉴定

烟草赤星病是由链格孢菌引起的叶部真菌病害,对烟叶产量和质量影响较大。收集山东诸城、即墨、高密3个地区的烟草赤星病病原菌,通过病原菌菌落和分生孢子形态特征研究,明确所收集的12株病原菌均属于链格孢属真菌。利用DNAMAN软件和NCBI数据库进行真菌r DNA-ITS区域序列分析,初步确定:A3、A4、A7为Alternaria sp.;A1、A2、A5、A6、A9、A10、A11、A12为链格孢Alternaria alternata;A8为细极链格孢Alternaria tenuissima。表明山东部分地区烟草赤星病的病原菌主要为链格孢菌Alternaria alternata。此研究为链格孢菌致病机制研究和烟草赤星病防治提供理论依据。     

产紫杉烷类物质的链格孢1011菌种的培养和发酵条件

用真菌学方法对产紫杉烷类物质的链格孢1011菌种培养和发酵条件进行了研究，结果表明：该菌易培养，生长发育迅速。用固体培养基培养，划破菌落或变温交替培养，可促进大量产孢。发酵条件优化结果：种子培养的最佳时间为3d,发酵最佳培养时间为8d，前体物苯甲酸纳可促进化合物I的合成，通过氮、碳源优化组合，发酵培养基的最佳氮、碳源每100mL萄糖2．2g,花生饼粉2．6g,黄豆饼粉0．2g,淀粉2．2g,蛋白胨0．48g,酵母膏0．5g,氯化铵0．58g,硫酸镁0．3g,磷酸二氢钾0．3g。采用最佳发酵条件优化培养，可使发酵产物化合物I的组分比原始培养条件下产量提高了262％。     

4个黄芩内生真菌菌株的鉴定及抗菌活性研究

通过形态学观察和ITS序列系统发育分析确定了4个黄芩内生真菌菌株的分类学地位,N.SBA9为密实链格孢Alternaria compacta,N.SBA10为链格孢属的种Alternaria sp.,N.SBA 34为节菱孢属的种Arthrinium sp.,N.SBA 35为粉红螺旋聚孢霉Clonostachys rosea,其有性型为淡色生赤壳菌Bionectria ochroleuca。以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、致病性大肠埃希氏菌Enteropathogenic Escherichia coli(EPEC)、肠炎沙门氏菌Salmonellae enteritis、九州镰孢霉Fusarium kyrushuense等7种指示菌对上述4个菌株的发酵液原液、发酵液乙醇提取物和菌丝体乙醇提取物进行抑菌活性测定的结果表明,各菌株的发酵液原液的抗菌谱较广,分别可拮抗3~6种指示菌;发酵液和菌丝体的醇提物的抗菌谱较窄,分别可拮抗1~2种指示菌,且抑菌活性普遍较高,抑菌圈直径大多大于20 mm。     

南方红豆杉紫杉醇产生菌的分离与鉴定

从南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)根部树皮内表皮中分离得到69株内生真菌,通过HPLC检测发酵液中紫杉醇含量,共获得7种紫杉醇产生菌,同时,通过形态学分析以及ITS序列分析确定分别属于链格孢属(Alternaria)、葡萄孢盘菌属(Botryotinia sp.)、刺盘孢属(Colletotrichum)、拟茎点霉属(Phomopsis)和枝孢菌(Cladosporium),其中链格孢属真菌紫杉醇产量最高,平均为271.54μg/L,是目前见诸报道的产量最高的链格孢菌,亦是从红豆杉根部树皮中筛选出的紫杉醇产量较高的野生菌株之一。该菌株的发现为紫杉醇高产菌的选育提供了又一优良的种质资源。     

旱柳内生真菌多样性研究

从呼和浩特市树木园、内农大校园、和林格尔县、古路板林场和榆林镇5个地区采集的旱柳中共分离到内生真菌1 409株(其中未产孢382株),经显微镜形态观察鉴定1 027株分属于3亚门4纲5目6科27属.不同生境、树龄、部位分离获得的内生真菌在数量、分布和种群上存在差异,各部位都有独立属,说明了旱柳内生真菌具有种群多样性及组织专一性特点.其中链格孢属(Alternaria sp.)和青霉属(Penicillium sp.)的分离频率分别为26.76％和11.92％,为优势菌属.     

烟草内生真菌分布特征研究

从烟草的根、茎、叶中共分离得到619株内生真菌,根据形态特征鉴定出12个属。其中链格孢属(Alternaria)和毛壳属(ChaetomiumKunze)为优势种群,分别占已分离菌株数的24.56%、18.74%。不同组织部位所分离得到的内生真菌在种群及数量上都存在差异:根中的优势属为镰孢属,占到了根中分离菌种数的28.32%;叶和茎中的优势属是链格孢属,分别占到叶和茎中分离菌种数的31.02%和28.88%;表明烟草内生真菌的分布具有一定的组织专一性。