5种植物乙醇提取物及其复配物对荔枝霜疫霉菌的抑菌活性

【目的】研究5种植物乙醇提取物及其复配物对荔枝霜疫霉菌的抑菌活性,为开发荔枝水果保鲜剂和植物源复配杀菌剂提供科学依据。【方法】采用超声波辅助提取法提取丁香、黄柏、细辛、苦参和花椒等5种植物的乙醇提取物,利用生长速率法和孢子囊萌发法探讨5种植物乙醇提取物及其复配物对荔枝霜疫霉菌的抑制作用。【结果】丁香、黄柏和细辛在提取物浓度5.000 mg/m L下对荔枝霜疫霉菌的抑菌率均为100.00%,苦参和花椒的抑菌率分别为83.00%和74.00%。丁香、细辛、黄柏、苦参和花椒的乙醇提取物对荔枝霜疫霉菌的抑菌中浓度(EC50)分别为0.30、0.51、0.58、1.21和1.48 mg/m L。在1∶1(V/V)的配比下,苦参与花椒乙醇提取物的复配物抑制荔枝霜疫霉菌菌丝生长的增效比率(SR)最高,为4.59,表现为增效作用;丁香+黄柏、丁香+细辛和黄柏+细辛复配物的SR则在0.5~1.5,表现为相加作用。【结论】丁香、黄柏、细辛、苦参和花椒等5种植物的乙醇提取物对荔枝霜疫霉菌有较强的抑菌活性,其复配物对抑制荔枝霜疫霉菌菌丝生长具有增效或相加作用。在抑菌复配剂配伍时,可从降低成本和保护野生植物资源角度考虑选择适当的植物种类。     

抑菌植物的筛选及甘草对5种植物病原真菌抑菌活性的研究

为了寻找新的植物源杀菌剂,采用菌丝生长速率法测定了17种植物提取物对荔枝霜疫霉病菌Peronophythora litchi的抑菌活性.结果显示:辣蓼Polygonum lapathifolium、白花油茶Camellia oleifera甲醇提取物(干粉)10 mg/mL处理7 d后的抑菌率分别达74.37%、77.02%,而甘草Glycyrrhiza uralensis根甲醇提取物相同质量浓度时的抑菌率达到97.83%;甲醇对甘草的提取率为23.04%,甘草的甲醇提取物1和5 mg/mL处理对荔枝霜疫霉病菌菌丝生长的抑菌率分别为63.84%和80.68%,对荔枝霜疫霉病菌孢子囊芽管萌发的抑制中质量浓度(EC50)为0.47 mg/mL,对荔枝霜疫霉病菌、辣椒疫霉病菌Phytophthora capsici、芒果炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides、香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.cubense和草莓叶斑病菌Cladosporium herbarum菌丝生长的EC50依次为0.62、0.89、9.70、6.42和4.53 mg/mL,表明甘草甲醇提取物具有较好的抑菌活性,有望继续研究开发成新的杀菌剂.     

23种植物提取物对荔枝霜疫霉病菌的抑菌活性

采用菌丝生长速率法测定了盾叶薯蓣等23种植物提取物对荔枝霜疫霉病菌的抑菌活性。结果表明:甲醇对荔枝霜疫霉病菌生长的影响明显小于乙醇、丙酮、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、苯、甲苯、正丁醇。盾叶薯蓣(根)、水菖蒲甲醇提取物(干粉)10 mg/mL浓度处理后7 d抑菌率分别为94.14%和98.50%;野核桃、百部、苦参、朱砂藤、八角莲、筒鞘蛇菰甲醇提取物相同浓度时抑菌率达80%以上。75%乙醇对盾叶薯蓣的提取率20.80%。盾叶薯蓣75%乙醇提取物1.0 mg/mL和5.0 mg/mL处理对荔枝霜疫霉病菌丝生长的抑菌率分别为86.64%和96.15%,对荔枝霜疫霉病菌孢子囊芽管萌发的抑制中浓度(质量浓度)为497.30 mg/L。     

21种植物提取物对荔枝霜疫霉菌和芒果炭疽病菌的抑菌活性

采用菌丝生长速率法测定了巴核桃等21种植物甲醇提取物对荔枝霜疫霉菌和芒果炭疽病菌的抑菌活性.结果表明,以10 mg(干粉)/ml溶剂处理后5 d对荔枝霜疫霉菌抑菌活性较高的是巴核桃、大杨柳和甘草提取物,抑菌率分别为100%、87.72%、87.20%;对芒果炭疽病菌抑菌活性较好的是水茄提取物,其抑菌率为69.74%.     

不同提取方法对植物粗提物抑制荔枝霜疫霉效果的影响

采用浸泡提取法和超声波提取法制备8种植物的粗提物,以菌丝生长法和孢子囊萌发法测定抑荔枝霜疫霉(Peronophythora litchi)的活性,并对黄柏(Cortex phellodendri)粗提物的抑菌活性进行初步研究。结果显示,植物粗提物对荔枝霜疫霉菌丝生长和孢子囊萌发抑制作用中,超声波提取法优于浸泡提取法,两种方法制备的黄柏粗提物抑菌作用均较强,质量浓度为5 mg/m L时,黄柏超声波提取法和浸泡提取法获得的粗提物对菌丝生长抑制率都为100%、孢子囊萌发抑制率为61.77%和41.76%,黄柏超声波提取法和浸泡提取法粗提物抑菌丝生长的有效中浓度(EC50)分别为585.62、685.65μg/m L。表明不同提取方法获得的粗提物抑菌活性不同,超声波提取法有利于抑荔枝霜疫霉活性物质的提取,黄柏粗提物抑荔枝霜疫霉菌活性较高。     

31 种植物甲醇提取物对荔枝霜疫霉菌和炭疽病菌的抑菌活性测定

以荔枝霜疫霉菌(Peronophythora litchii)和荔枝炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)两种荔枝上最为重要的病原真菌为供试菌,采用含毒介质的生长速率培养法,对采自广东省的31种植物的甲醇提取物对病原菌菌丝线性生长的抑菌活性进行离体测定。结果表明:在0.01 g/mL浓度下,对荔枝霜疫霉菌抑菌率大于60%的植物有9种,其中黄石斛(Dendrobium tosaense)、毛唇芋兰(Nervilia fordii)、葛(Pueraria phaseoloides)和土牛七(Thunbergia grandiflora)4种植物甲醇提取物的抑菌率达到100%;对荔枝炭疽病菌抑菌率大于60%的植物有2种,其中一点红(Emilia sonchifolia)的抑菌率达到100%,地丁草(Corydalis bungeana)的抑菌率为71.35%;同时对两种病原菌的抑菌率都大于50%的是地丁草(C.bungeana)。     

三峡地区20种植物甲醇提取物的抗真菌活性

以6种重要的植物病原真菌:荔枝霜疫霉菌Peronophthora litchii、黄瓜疫霉菌Phytophthora melonis、稻瘟病菌Magnaporthe grisea、稻纹枯病菌Rhizoctonia solani、西瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.niveum和香蕉炭疽病菌Colletotrichum musae为供试菌,对采自三峡地区的20种植物的甲醇提取物的抑制菌丝生长活性进行离体测定.结果表明:在甲醇提取物干质量浓度为10 mg/mL下,对荔枝霜疫霉菌抑菌活性较高的植物有山萝花Melampyrum roseum(100%)、毛华菊Dendranthema vestitum(100%)和金缕梅Hamamelis mollis(82.35%)等12种;对黄瓜疫霉菌抑菌活性较高的植物有山萝花(100%)、毛华菊(96.23%)和兰香草Caryopteris incana(82.43%)等12种;对稻瘟病菌表现较高抑菌率的植物是金缕梅(61.51%)和宜昌润楠Machilus ichangensis(61.51%);对稻纹枯病菌有较高抑菌率的植物是透骨草Phryma leptostachya(78.48%)和歪头菜Vicia unijuga(78.03%);对西瓜枯萎病菌和香蕉炭疽病菌抑菌率最高的植物均是金缕梅,抑菌率分别为51.12%和61.07%.对植物抑菌活性筛选中植物材料干质量的总抑制活性进行了讨论.     

花椒油主要活性物质对荔枝霜疫霉的抑菌活性

为寻找新型植物源抑菌物用于荔枝霜疫霉菌(Phytophthora litchi Chen.)的防治,以花椒(Zanthoxylum bungeanum Maxim.)油中主要活性物质柠檬烯、桉树脑、月桂烯等为试验材料,采用菌丝生长速率法测定其对荔枝霜疫霉菌的抑制活性,并将柠檬烯与苦参碱复配,测定复配物的抑菌效果。结果表明,当柠檬烯、桉树脑的浓度分别为32. 0、40. 0 mg/L时,抑菌率均为100. 0%,当月桂烯的浓度为400. 0 mg/L时,抑菌率为88. 2%,柠檬烯、桉树脑、月桂烯等3种活性物质的抑菌中浓度分别为7. 2、6. 5、97. 2 mg/L;当柠檬烯和苦参碱复配时增效比为1. 8,抑菌效果具有增效作用。花椒油中3种主要活性物质均对荔枝霜疫霉菌具有抑制作用,从抑菌中浓度来看,桉树脑的抑菌能力最佳,其次为柠檬烯,月桂烯最弱。柠檬烯与苦参碱复配后抑菌效果更佳。     

鱼类水霉病植物源性杀菌剂的筛选

为探究鱼类水霉病植物源性杀菌剂的抑菌效果,以水霉病菌为供试病菌,选取了多种具有消炎、杀菌功效的药用植物进行抑菌活性筛选,以抑菌圈直径大小为指标,确定植物提取物对水霉菌的抑菌效果;筛选抑菌效果较强的植物提取物,测定其对水霉菌的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC),以及其对水霉菌生长抑制率、菌丝生长量的影响。结果表明:黄连、油茶饼、大黄等植物提取液对水霉菌的生长具有较强抑制效果;三者对水霉菌的MIC值均较低,分别为3.125、6.25、12.5mg/mL,对水霉菌的MBC值相差不大,均在为50 mg/mL左右。总体上,黄连表现出了相对最优的抑菌效果,当黄连提取液处理浓度达到500 mg/L时,抑菌率达到97%以上,菌丝鲜重低于0.02 g,抑菌效果最佳。     

64种植物提取物的离体抗真菌活性评价

测定了64种植物的甲醇提取物对荔枝霜疫霉菌(Peronophythora litchii Chen ex Ko et al.)和香蕉炭疽病菌(Colletotrichummusae(Berk.et Curt.)Arx)的离体抗菌活性.试验结果显示,在提取物质量浓度为0.01 g/mL时,对荔枝霜疫霉菌菌丝生长的抑制率高于50%的植物共有30种,对霜疫霉菌孢子囊萌发的抑制率高于50%的植物共有26种;对香蕉炭疽病菌菌丝生长的抑抑制率高于50%的植物共有18种,对香蕉炭疽病孢子萌发的抑制率高于50%的植物共有6种;对两种病原菌的菌丝生长与孢子萌发抑制率均大于50%的植物有开口箭(Tupistra chinensis Bak.)和苍耳(Xanthinum sibiricum Patrin).     

植物源杀菌剂的筛选

以80％乙醇和丙酮为溶剂，提取19种区域性植物和66种中草药的活性成分，用琼脂扩散法对其进行抑菌活性测定。结果表明，在生药浓度200mg／mL条件下，有10种提取物对大肠杆菌有抑菌活性，7种提取物对金黄色葡萄球菌有抑制菌活性，其中石榴皮、五倍子、没食子、肉桂、丁香5种提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都表现出了很强的抑制作用（DIZ≥20mm），用两倍稀释法测定这5种提取物的最小抑菌浓度（MIC），发现抑菌活性只与提取物的浓度有关，与溶剂种类无关，本研究结果还表明，黄酮类化合物至少是其中一种主要的抗菌物质，而且这些活性物质很可能具有作为天然广谱抗菌剂的潜力。     

13种药用植物粗提物抑菌活性的初步研究

以草莓灰霉病菌（Botrytis cinerea）、桃褐腐病菌（Monilinia fiucticola）、李子干枯病菌（Macrophoma ku-watzukia）为供试真菌,采用生长速率法和孢子萌发法对黄连等13种药用植物不同提取物的抑菌活性进行测定。结果表明在植物提取物为4 mg/mL时,13种药用植物的39种提取物对上述3种供试菌种都有不同程度的抑制作用,其中黄连、丁香、绞股蓝、黄柏甲醇提取物的抑菌活性较高,对3种供试菌株的平均抑制率达50%以上,对孢子萌发的平均抑制率大于40%,其中黄连甲醇提取物的活性最高,平均抑制率达60%以上。     

中草药提取物对板蓝根根腐病菌抑制作用研究

测试了123种中草药提取物对茄腐镰刀菌(Fusarium solani)菌落生长及分生孢子萌发的抑制作用。结果表明:提取物浓度为0.01 g/mL时,99种提取物对菌落生长具有显著的抑制作用,其中苦楝皮和威灵仙的抑菌率大于50%,北沙参的抑菌率达到了100%;112种提取物对分生孢子萌发具有显著抑制作用,其中11种提取物的抑制率在50%以上,而且北沙参和牛膝的抑制率达到了100%。将抑制率大于50%的11种提取物稀释为200倍,进行二次筛选,发现苦楝皮和威灵仙2种提取物对菌落生长的抑制作用下降,而北沙参对菌落生长抑菌率仍为100%;11种提取物对分生孢子萌发抑制率下降的幅度在21.59%~47.02%,而北沙参的抑制率最高,为74.50%。北沙参的抑制中浓度(EC50)为3.621 mg/mL。     

中草药提取物对蔬菜两种采后病原真菌的抑菌活性研究

以灰葡萄孢菌和链格孢菌为供试病菌,采用生长速率法和培养板连续稀释法在离体条件下研究了木香、决明子等16种中草药提取物抑菌活性,对其效果较好的中草药提取物最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)进行了初步确定。试验结果显示,北豆根与黄柏在质量浓度为10.0mg/mL时,对两种病原真菌菌丝生长的抑制率均高于60%。它们对灰葡萄孢菌的最小抑菌浓度MIC依次是12.5,25mg/mL,最小杀菌浓度浓度MFC分别为:25,50mg/mL;对链格孢菌的MIC分别是6.25,12.5mg/mL,MFC都高于MIC两倍,分别是12.5,25mg/mL。     

黄连饮片中小檗碱的提取和重金属镉去除工艺的研究

采用有机溶剂热回流法提取黄连中的小檗碱,并使用响应面法对提取过程中的提取液乙醇浓度、提取温度、固液比对提取效果的影响进行了研究;同时采用原子吸收分光光度法测定经过不同处理后黄连饮片中镉的含量和小檗碱含量来研究黄连中重金属镉的去除。结果表明,黄连中小檗碱的最佳提取工艺为53%的乙醇浓度,提取温度62℃,固液比1:11,提取次数2次,每次1 h;重金属镉去除的工艺以3%氨水6 h+3%NH4NO36 h混合处理效果最佳,镉含量为0.037 6 mg·kg-1,小于0.3 mg·kg-1。小檗碱含量为8.0%。     

中草药对5种蔬菜病菌的抑制作用

用95%乙醇对12种中草药进行浸提,研究浸提液(物)在室内条件下对辣椒疫病菌、番茄灰霉病菌、茄黄萎病菌、黄瓜枯萎病菌和黄瓜菌核病菌的抑制作用。结果表明:丁香、细辛、甘草、黄连、苦参、蛇床子、辛夷对上述病菌的菌落生长有明显的抑制作用,尤其是丁香的抑菌作用最为明显。少数中草药如败酱草等对5种病菌菌落生长均有不同程度的促进作用。此外,丁香、黄连、甘草等浸提物对番茄灰霉病菌、茄黄萎病菌和黄瓜枯萎病菌分生孢子萌发具有明显的抑制作用。     

梵净山野生黄连花粉活力研究

采用TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)法测定花粉活力,研究了温度、相对湿度、蔗糖含量、硼酸含量等因子对野生黄连花粉活力的影响,以期为探索梵净山野生黄连的生殖机制提供理论依据。结果表明,当温度为26℃、相对湿度为60%时,梵净山野生黄连花粉活力达最大值(45.9%),比温度20℃、相对湿度70%时的花粉活力(10.5%)增加35.4个百分点。随着温度和相对湿度的增加或降低,梵净山野生黄连花粉活力均呈下降的趋势。当蔗糖含量20%、硼酸含量0.006%时,花粉活力为93.4%,当蔗糖含量大于或小于20%,硼酸含量大于或小于0.006%时,梵净山野生黄连的花粉活力均表现为下降。因此,在梵净山野生黄连开花时,控制温度26℃、相对湿度60%,同时喷施20%蔗糖、0.006%硼酸,可以大大提高黄连的花粉活力。     

不同植物提取液的杀线虫活性评价

通过测定比较不同植物水提取液对南方根结 2龄线虫的生物活性及毒力、以及不同提取溶剂和光照处理条件下植物提取液的杀线虫活性 ,结果表明不同植物种类、部位的提取液 ,其杀线虫活性存在明显差异 ,雷公藤、烟草、细辛、夹竹桃、鸡矢藤、蓖麻、万寿菊和马缨丹叶的水提取液对线虫的杀虫效果 (2 4h)分别为10 0 %、10 0 %、10 0 %、90 .0 %、87.1%、84 .3%、77.3%和 32 .4 % ,万寿菊花、叶、茎水提取液杀线虫效果分别为10 0 %、77.3%和 4 8.2 % ;烟草、雷公藤、夹竹桃、细辛叶的水提取液对 2龄线虫的致死中浓度 (LC50 )分别为830 .5mg/L、1770 .8mg/L、1336 .4mg/L、10 2 0 .4mg/L ;不同溶剂提取的植物提取液的杀线虫活性也存在差异 ;万寿菊、蓖麻和马缨丹叶的水提取液经太阳光照射 6h后 ,其杀线虫活性明显增强