‘高原之火’北美海棠叶片组培快繁再生体系

以‘高原之火’北美海棠叶片为外植体,研究‘高原之火’北美海棠叶片愈伤组织的诱导及不定芽再生技术体系,并对不定芽发生过程进行组织细胞学观察。结果表明:叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+0.15 mg·L~(-1) TDZ+1.5 mg·L~(-1) NAA,诱导率高达80%,愈伤组织不定芽分化率达60%,每块愈伤组织芽数最高达18.8个;不定芽增殖与壮苗最佳培养基为1/2MS+0.5 mg·L~(-1)BA+0.5 mg·L~(-1)IBA及1/2MS+1.0 mg·L~(-1)BA+1.0 mg·L~(-1)IBA,增殖系数达3.4,每瓶正常不定芽数达10.2个;芽苗在1/4MS+1.0 mg·L~(-1)IBA+0.15%活性炭培养基上不定根诱导率最高,达86.7%;生根小苗炼苗移栽后成活率达80%;叶片不定芽诱导过程的组织细胞学观察表明,不定芽的发育起源为混合型,一种为外起源,一种为内起源,内起源为主要方式。     

大豆叶柄离体再生体系研究

[目的]建立大豆叶柄外植体的离体再生体系,为大豆遗传转化体系的改进和提高提供技术基础。[方法]以大豆品种‘K06-82’无菌苗叶柄为外植体,比较不同种类的植物生长调节剂及其组合对叶柄愈伤组织诱导、不定芽分化、不定芽伸长及生根等过程的影响,建立大豆叶柄离体再生体系。[结果]大豆品种‘K06-82’的叶柄愈伤组织形成的适宜培养基为改良MS+2.0 mg·L~(-1)α-萘乙酸(NAA),愈伤组织形成率为74.21%,愈伤组织密度为0.72 g·cm~(-3);不定芽分化的适宜培养基为改良MS+2.0 mg·L~(-1)6-苄氨基嘌呤(6-BA)+0.2 mg·L~(-1)NAA,分化率为49.82%,平均不定芽数2.98个;不定芽伸长的适宜培养基为改良MS+1.0 mg·L~(-1)赤霉素(GA3),伸长比率为35.62%,平均芽长为2.01 cm;不定根诱导的最适培养基为1/2改良MS+0.8 mg·L~(-1)吲哚丁酸(IBA),生根率和生根苗的移栽存活率分别达到88.32%和97.80%。[结论]初步建立了大豆叶柄外植体的离体再生体系。     

‘海尔特兹’树莓组织培养及其叶柄再生体系的建立

为研究树莓的工厂化育苗技术,提高树莓育苗质量和效率,以树莓品种‘海尔特兹’带腋芽的茎段为试验材料,通过对其腋芽初代培养、茎段增殖、叶柄不定芽和根的诱导等过程中植物生长物质合理组合,及防止茎段褐化的最适p H值进行筛选,建立‘海尔特兹’树莓组织培养及其叶柄再生体系。结果表明,腋芽诱导的最佳培养基为MS+1.0mg·L~(-1)6-BA+1.0mg·L~(-1)IAA,萌芽率100%;茎段最佳增殖培养基为MS+0.5 mg·L~(-1)6-BA+0.1mg·L~(-1)NAA,p H值为5.70,增殖系数为5.0;诱导叶柄产生愈伤组织再生不定芽的最佳培养基为MS+2.0mg·L~(-1)TDZ+1.0 mg·L~(-1)IBA,其愈伤组织诱导率为100%,不定芽再生率为53%;幼苗最佳生根培养基为1/2 MS+0.7 mg·L~(-1) IBA,生根率达95%。     

杉木愈伤组织的继代增殖与植株再生

通过建立杉木愈伤组织增殖和植株再生体系,旨在为杉木体细胞杂交和遗传转化等基因工程研究提供高效受体系统。以杉木子叶、下胚轴诱导的愈伤组织为材料,研究了不同激素组合及浓度、培养条件对愈伤组织的继代及植株再生的影响。结果表明:不同激素组合及浓度对愈伤组织的继代有显著影响,2,4-D有利于降低继代过程中的褐化现象,NAA、KT有利于愈伤组织的继代增殖。DCR+6-BA 1.5 mg·L~(-1)+KT 1.0 mg·L~(-1)+NAA 1.0 mg·L~(-1)和DCR+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+KT1.5 mg·L~(-1)+NAA 1.5 mg·L~(-1)是愈伤组织继代增殖的最佳培养基。暗培养和800 lx光照强度是愈伤组织继代的最佳培养条件。愈伤组织在继代30~45 d期间内需转移至新培养基。愈伤组织在MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+KT 1.5 mg·L~(-1)再生芽诱导率最高,诱导率为80%。经过一次继代的愈伤组织比未经过继代的单个再生芽数多,平均可达3~4个。再生苗在1/2MS+IBA 1.0 mg·L~(-1)培养基中生根率高达89.5%。     

河北杨叶片诱导不定芽再生体系的建立

以河北杨无菌苗叶片为外植体材料,诱导叶片分化产生不定芽,然后对不定芽进行增殖和生根培养,形成再生植株。结果表明:最佳不定芽诱导培养基为MS+0.3 mg·L~(-1)TDZ+0.5 mg·L~(-1)IBA,不定芽诱导率达到100%;最佳增殖培养基为MS+0.5 mg·L~(-1)KT+0.3 mg·L~(-1)IBA,增殖率可达85%;最佳生根培养基为1/2MS+0.3 mg·L~(-1)IBA,平均生根率可达到92.86%;组培苗移栽成活率为93.7%。本研究建立了河北杨高效植株再生体系,为河北杨的遗传改良和分子育种研究奠定了基础。     

翠菊品种库蕾娜叶片和叶柄及茎段的再生研究

为加速翠菊新品种的培育和扩繁,研究利用种子消毒接种获得的无菌苗作为外植体,以MS、1/2MS为基本培养基,添加不同浓度的6-BA、NAA依次进行愈伤组织诱导、愈伤组织分化、不定芽生根。结果表明:茎段为再生体系的最佳外植体,愈伤诱导培养基为MS+2.0mg·L-1 6-BA+0.2mg·L-1 NAA,诱导愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+1.0mg·L-1 6-BA+0.1mg·L-1 NAA,不定芽最佳生根培养基为1/2MS。叶片、叶柄最佳愈伤诱导培养基MS+4.0mg·L-1 6-BA+0.2mg·L-1 NAA,愈伤分化培养基只分化不定根。     

中华补血草的组织培养和植株再生体系优化

为进行中华补血草优良品种的保存和培育,为从分子水平进行泌盐植物耐盐机理研究奠定基础,本研究以中华补血草无菌苗叶片为外植体,对中华补血草的组织培养和再生体系进行了优化。结果表明,以MS+6-BA 0.1 mg·L~(-1)+NAA 0.2 mg·L~(-1)培养基为愈伤组织诱导最佳培养基,愈伤组织诱导率为100%;以MS+6-BA 1.5 mg·L~(-1)+NAA 0.2 mg·L~(-1)为丛生芽诱导最佳培养基,诱导率为99.06%;丛生芽继代培养适宜的培养基为MS+NAA 0.2 mg·L~(-1)+6-BA 0.15 mg·L~(-1);以MS+NAA 0.2 mg·L~(-1)培养基为最佳生根率培养基,生根率为87%,且根系生长良好。     

矮牵牛梅林愈伤组织诱导与植株再生

为建立矮牵牛梅林的高频再生体系,以叶器官为材料,研究不同生长调节剂配比、叶片不同部位和不同形态愈伤对不定芽再生的影响。结果表明:6-BA和NAA及其配比极显著影响矮牵牛梅林不定芽再生率,其中NAA 0.3mg·L-1极显著促进了矮牵牛梅林不定芽的再生,6-BA和NAA浓度超过1.0mg·L-1和0.5mg·L-1时,刺激玻璃化的发生。叶片不同部位极显著影响不定芽的再生,芽分化率由高到低依次是叶柄带主叶脉不带主叶脉,愈伤组织形态决定芽分化能力和质量,叶柄直接分化丛芽是梅林再生的优良外植体,分化率达98.3%。芽诱导最佳培养基为MS+6-BA 1.0mg·L-1+NAA 0.3mg·L-1,其产生不定芽无玻璃化且分化率高,为68.3%。叶片愈伤组织诱导最佳培养基为MS+6-BA 1.0mg·L-1+NAA 0.3mg·L-1,其不定芽分化率为68.3%且未产生玻璃化苗;最佳生根培养基为1/2 MS培养基,生根率达100.0%;继代增殖培养最佳培养基为MS+6-BA 0.5mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1,丛生芽多且大小均匀。     

红阳猕猴桃快繁体系优化

为提高红阳猕猴桃组织培养效率,以红阳猕猴桃雌株幼嫩的不带芽枝条、带叶脉和不带叶脉叶片为外植体,通过不同激素(6-BA、NAA)不同浓度诱导外植体出不定芽、生根等处理,建立高效稳定的快速繁殖体系。结果表明:幼嫩的不带芽茎段和带叶脉的叶片极易形成愈伤组织和不定芽,经过筛选最适诱导不定芽的培养基分别为MS+3mg·L~(-1)6-BA+0.2mg·L~(-1) NAA和MS+2mg·L~(-1) 6-BA+0.3mg·L~(-1) NAA,生长大量的愈伤组织之后萌发不定芽,出芽率均能达到100%,成芽数/接种数分别达到4.6和4.4。采用不带芽的幼嫩茎段为外植体时,减少了试验材料的浪费,两种培养基均能不断再生不定芽,省去了增殖培养基的筛选,节省了培育时间。1/2MS+0.7mg·L~(-1) IBA诱导不定芽生根效果最佳,生根率达到90%。     

突脉秋海棠组织培养及快速繁殖研究

通过对突脉秋海棠(Begonia retinervia)叶片的离体培养和快速繁殖实验,探讨突脉秋海棠愈伤组织诱导,及不定芽的分化、增殖和生根的最佳培养条件.结果表明:以突脉秋海棠叶片为外植体,愈伤诱导率最高可达87.92％;适于突脉秋海棠叶片愈伤组织诱导的培养基为MS+ 6-BA 2.0 mg·L-1+ NAA 0.2 mg·L-1;适于愈伤组织分化成不定芽及不定芽继代的培养基为MS +6-BA 1.0 mg·L-1 +NAA 0.2 mg·L-1,诱导分化率为89.32％,20 d继代倍数达6倍以上;适于生根的培养基为1/2MS+ NAA 0.8mg·L-1 +AC0.1％,生根率达95.00％.研究确定了突脉秋海棠的组织培养配方并初步建立起一套较为完善的快速繁殖技术体系.     

杂交构树叶片组培快速繁殖体系的建立

为满足市场对杂交构树种苗的需求,以无菌苗叶片为外植体进行组织培养,优化其快速繁殖技术。结果表明:1)愈伤组织诱导及不定芽分化的适宜培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L,其愈伤组织诱导率达91.7%,不定芽分化率为88.3%。分化出的不定芽长势较好,叶片的颜色浓绿,且愈伤褐化、软化现象较少。2)继代增殖的适宜培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA30.5mg/L,增殖倍数可达5倍;3)生根适宜培养基为改良B5+6-BA 0.01mg/L+NAA 0.3mg/L+IBA0.5mg/L,生根率为60%。     

玉竹愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养体系的建立

以玉竹叶片和根状茎为外植体,研究植物生长调节剂、碳源和pH对玉竹愈伤组织诱导的影响以及植物生长调节剂对愈伤组织增殖的影响,通过正交试验初步建立并优化玉竹愈伤细胞的悬浮培养体系。结果表明,叶片和根状茎愈伤组织诱导的最佳培养基均为MS+1.0mg·L~(-1)?6-BA+0.5mg·L~(-1)?NAA+30%蔗糖,培养基最佳pH5.6,叶片和根状茎愈伤组织增殖的最佳植物生长调节剂组合均为2.0mg·L~(-1)?6-BA+0.8mg·L~(-1)NAA,且根状茎愈伤组织的诱导率和增殖倍数均明显高于叶片。根状茎愈伤细胞悬浮培养的最佳接种量80g·L-1,最佳植物生长调节剂组合1.5mg·L~(-1)6-BA+0.6mg·L~(-1)?NAA,细胞生长曲线与多糖含量变化曲线均呈"S"形,细胞最佳继代周期16d,多糖含量在培养14d时最高,培养基pH呈先下降后上升然后趋于稳定趋势。     

杜仲愈伤组织继代培养条件的优化

为了建立杜仲愈伤组织再生体系,为转基因研究提供平台,以成熟胚诱导的浅黄色愈伤组织和幼胚诱导的乳白色愈伤组织为材料,研究不同培养基、继代时间、继代次数对杜仲愈伤组织生长和不定芽诱导的影响。结果表明:浅黄色愈伤组织继代培养后具有不定芽的分化能力,乳白色愈伤组织继代培养后褐化死亡;愈伤组织继代培养基为MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.05mg/L,继代周期为18d;愈伤组织继代次数对愈伤组织增殖有显著影响,以继代4次的增殖倍数最高,达2.5;愈伤组织继代次数对不定芽的诱导有显著影响,以继代2次的愈伤组织不定芽诱导率最高,达到66.7%,继代4次的愈伤组织不定芽的增殖系数最高,为3.2。     

重瓣东方百合Double surprise离体快繁技术体系的建立

为探讨东方百合新品种Double surprise的组培快繁技术,以其花瓣为初级外植体,以初级外植体诱导形成的无菌苗鳞片和叶片作为次级外植体,分别探讨了外植体诱导、不定芽增殖、组培苗生根以及炼苗移栽的较优条件。结果表明:花瓣诱导不定芽的较优培养基为MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.3mg·L-1,诱导率可达86.67%,诱导系数为2.73;MS+TDZ2.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1为诱导无菌苗鳞片和叶片直接产生不定芽的较优培养基,不定芽诱导率分别为88.89%和91.11%,诱导系数分别为6.67和5.67;MS+PIC1.0mg·L-1+TDZ0.5mg·L-1为无菌苗鳞片间接诱导愈伤组织的较优培养基,愈伤组织诱导率和分化系数分别为90.00%和3.27;MS+PIC 1.0 mg·L-1+TDZ 0.1 mg·L-1为无菌苗叶片间接诱导愈伤组织的较优培养基,愈伤组织诱导率和分化系数分别为93.33%和3.70;较优的不定芽增殖培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1;不定芽生根的较优培养基为1/2MS+IBA 1.0 mg·L-1;草炭∶蛭石∶珍珠岩(体积比)=1∶1∶1的混合基质为Double surprise较优移栽基质,成活率可达88%。     

洋水仙Dutch Master愈伤组织的诱导、分化及植株再生

以洋水仙品种Dutch Master的鳞茎、叶、花葶及无菌苗叶片作为外植体,选用MS为基本培养基,分别添加不同质量浓度的NAA(0.5,1.0,1.5mg·L~(-1))、IBA(0,0.5,1.0mg·L~(-1))、2,4-D(0,0.1,0.2,0.5,1.0,2.0mg·L~(-1))、6-BA(0.5,1.0,1.5,2.0,3.0mg·L~(-1))和KT(0.1,0.3,0.5mg·L~(-1)),研究不同外植体和不同外源激素配比对小鳞茎的诱导,愈伤组织的诱导、继代及植株再生的影响。结果表明:在Dutch Master初代培养阶段,6-BA的影响效应最大,随着6-BA质量浓度的升高,诱导率呈上升趋势,最适宜的初代培养基配比为:MS+6-BA 3.0mg·L~(-1)+NAA 0.5mg·L~(-1)+2,4-D 0.2mg·L~(-1);以带鳞茎盘的双鳞片作为外植体诱导小鳞茎效果最好,诱导率达76.7%;鳞片部位以鳞茎外层鳞片的培养效果最好,分化率达97.5%;在Dutch Master愈伤组织诱导阶段,2,4-D的影响效应最大,当2,4-D浓度为1mg·L~(-1)时,愈伤组织诱导率的均值(K2)为峰值,最适宜的愈伤组织诱导培养基配比为:MS+2,4-D 1mg·L~(-1)+6-BA 1.5mg·L~(-1)+KT 0.1mg·L~(-1),Dutch Master无菌苗叶片愈伤组织诱导率可以达到81.3%;在Dutch Master愈伤组织继代培养阶段,最适宜的继代培养基配比为:MS+2,4-D 0.5mg·L~(-1)+6-BA 1mg·L~(-1),可以增殖分化得到没有玻璃化的小植株。     

东方百合Tiger Woods离体快繁技术体系的建立

为探讨东方百合新品种Tiger Woods的组培快繁技术,以其花器官为外植体获得无菌试管苗,以无菌苗鳞片和叶片为次级外植体诱导不定芽形成,通过扩繁、生根获得完整植株,炼苗后移栽。结果表明:花梗与花丝诱导能力较强,其最适诱导培养基分别为MS+6-BA 2.0mg·L~(-1)+NAA 0.3mg·L~(-1)与MS+6-BA 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.3mg·L~(-1)。无菌苗鳞片、叶片直接诱导产生不定芽的最适培养基为MS+TDZ 2.0mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)与MS+TDZ 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.5mg·L~(-1),诱导率为100%和93.33%,诱导系数为4.48和2.88;而上述两种外植体间接诱导愈伤组织的最适培养基为MS+PIC 1.0mg·L~(-1)+TDZ 0.5mg·L~(-1)与MS+PIC 1.0mg·L~(-1)+NAA0.5 mg·L~(-1),愈伤诱导率为93.33%和96.67%,分化系数为4.53和3.63。小鳞茎膨大最适培养基为MS+蔗糖75g·L~(-1),生根最佳培养基为MS+IBA 0.5mg·L~(-1),移栽最佳基质为草炭:蛭石:珍珠岩=1∶1∶1,成活率达91.11%。     

海州常山叶片愈伤组织诱导及不定芽再生

为获得海州常山愈伤组织和不定芽,以海州常山叶片作为外植体,研究了不同消毒方法、培养基种类、培养条件和植物生长调节剂配方对海州常山叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响。研究结果表明:海州常山叶片灭菌最适方法为75%酒精处理30 s,再用0.1%Hg Cl2溶液处理5 min;暗培养有助于愈伤组织的诱导;愈伤组织诱导的最适培养基为MS+6-BA 0.50 mg·L~(-1)+NAA 0.10 mg·L~(-1),诱导率最高达66.67%;愈伤组织最适增殖培养基为MS+6-BA 0.50 mg·L~(-1)+NAA 0.05 mg·L~(-1),愈伤组织平均大小达21.76 mm;最佳分化培养基为MS+6-BA 0.50 mg·L~(-1)+NAA 0.01 mg·L~(-1),分化率为13.33%。     

彩叶凤梨愈伤组织诱导及不定芽分化的研究

以实验室现有彩叶凤梨为材料,探讨激素对其愈伤组织诱导及不定芽分化的影响。取彩叶凤梨无菌苗上生长的短缩茎(侧芽)接种于不同激素配比的MS培养基中诱导产生愈伤组织,然后将愈伤组织切块接种到不同的分化培养基上,诱导器官分化,统计出芽率,观察芽生长状态。试验结果为,诱导彩叶凤梨愈伤组织产生的适宜培养基为MS+2,4-D 4 mg·L~(-1)+NAA 2 mg·L~(-1),出愈率可达83.6%。愈伤块大、质地致密,有芽点;愈伤组织芽分化培养优先选择MS+6-BA 4 mg·L~(-1)+NAA 0.4 mg·L~(-1)培养基,分化率可达96.7%,出芽速度较快,出芽数较多,长势良好。试验表明,NAA能促进彩叶凤梨愈伤组织诱导及不定芽分化;高浓度2,4-D可以促进彩叶凤梨愈伤组织的生成,而高浓度的6-BA可以促进愈伤组织分化不定芽。     

丰香草莓叶片的植株再生研究

[目的]为采用叶片组织培养技术进行大规模生产草莓种苗提供依据。[方法]以丰香草莓叶片为外植体,用4种不同的培养基诱导其愈伤组织,并对愈伤组织进行扩繁,筛选最佳的诱导培养基。[结果]MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基最快产生愈伤组织,愈伤组织诱导率、生根率、不定芽诱导率均最高,分别为69.4%、10%、11.67%,且愈伤组织体积较大,生根总数最多,不定芽生长茂盛,叶片多而大,最终获得具根系可移植室外的完整植株543株,增殖扩繁倍数达50,增殖效果极好。MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1mg/L培养基的愈伤组织诱导率为63.8%,且愈伤组织体积最大。[结论]草莓叶片诱导愈伤组织、不定芽并最终获得大量再生植株的最佳培养基是:MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L。     

正交试验优化红颜草莓离体再生体系

[目的]优化红颜草莓离体再生体系。[方法]采用正交试验,研究不同培养基、植物生长调节剂的种类及浓度对红颜草莓叶片不定芽再生的影响。[结果]IBA是影响叶片不定芽增殖的重要因素;最适诱导培养基为MS+TDZ 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L,诱导率为90.00%;最佳分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L,分化率为8.1%;最适增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.2mg/L,平均每个不定芽的增殖倍数为7.67;最适继代培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L,每个处理的平均苗高5.98 cm;最适生根培养基为1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L,每个处理的平均根数为4.5根。[结论]为进一步研究草莓的遗传转化奠定了基础。