胡萝卜悬浮细胞原生质体的培养及植株再生的研究

采用继代培养4～5 d 后的胡萝卜悬浮细胞,经酶解获得大量原生质体,并在不同的培养基上经培养,细胞进行分裂,形成愈伤组织,获得了完整的再生植株。探讨了影响原生质体培养及植株再生的多种因素,实验表明:①原生质体的培养密度在5×10~4/mL～5×10~5/mL 范围内均可,以2.5×10~5/mL 为佳。②对于细胞的分裂、细胞团的生长以及愈伤组织的形成,以改良的 B_5培养基最好,N_5培养基其次,MS 较差。③适当降低原生质体培养基中的甘露醇浓度,有利于细胞的分裂和生长。④在本实验所涉及的培养方法中,以液体浅层培养为优。⑤诱导愈伤组织分化,以 1mg/L KT 为佳。⑥不同培养基对愈伤组织的生长速度和分化频率产生一定影响,以 MS 培养基提高分化频率效果较好。     

水稻愈伤组织生活力和寿命的研究（Ⅰ报）

水稻单细胞无性系的培养体系已经建立起来,并开始进行人工种子的研究,利用水稻原生质体也业已再生出植株。由水稻单细肥或原生质体培养诱导成植株,其中最主要的途径是经过由愈伤组织的悬浮振荡培养,游离出单细胞或由愈伤组织由用酶解离出原生质体。在这一过程中,所获得的单细胞必须是具有较强生活力和分化能力的胚性细胞。所以,愈伤组织的生活力和寿命是单细胞或原生质体培养的重要基础。关于水稻愈伤组织的生活力和寿命,国内外研究的不多。我们沈阳农业大学农学系     

两种水稻优良亲本高频离体再生系统的建立

以杂交水稻2个优势亲本的成熟胚为材料，研究影响其愈伤组织诱导、继代和再生的相关因素。结果表明：培养基中较高比例的硝态氮和氨态氮之比、较丰富的无机微量元素以及提高维生素B1和肌醇含量可显著提高愈伤组织的诱导和培养效果；在合适的2，4-D浓度下，添加其他外源激素不能显著提高愈伤组织的诱导率，但可改善愈伤组织的胚性生长状态；交替使用不同的培养基成分和激素浓度配比可使长期继代培养物保持胚性状态；预分化和干燥处理能有效提高植株再生的频率和质量。     

包心菜无菌苗子叶及叶片原生质体高频分裂和高频植株再生

以包心菜子叶和叶片原生质体为材料，经不同液体培养基（Ｂｐ１，Ｂｐ２，Ｂ１）浅层培养，再生细胞高频分裂并形成愈伤组织，愈伤组织经扩增后转移至分化培养基上诱导植株分化，从这两种原生质体获得了再生植株。在原生持培养过程中，原生质体及细胞团的褐化程度与培养基中的有要分的多少有关。原生质体的分化频率与培养基中植物激素种类关系基大。在植株分化时，谷氨酰胺和腺嘌呤对植株分化有很促进作用。另外，原生质体的来源...     

包心菜无菌苗子叶及叶片原生质体高频分裂和高频植株再生

以包心菜子叶和叶片原生质体为材料。经不同液体培养基(Bp1,Bp2,B1)浅层培养,再生细胞高频分裂并形成愈伤组织。愈伤组织经扩增后转移到分化培养基上诱导植株分化,从这两种原生质体中获得了再生植株。在原生质体培养过程中,原生质体及细胞团的褐化程度与培养基中的有机成分的多少有关。原生质体的分化频率与培养基中植物激素种类关系甚大。在植株分化时,谷氨酰胺和腺嘌呤对植株分化有很大促进作用。另外,原生质体的来源及原生质体培养基对原生质体植株分化能力均有不同的影响。     

芜菁油菜叶肉原生质体再生植株

以芜菁油菜为材料，从无菌苗５—８天叶龄的叶片分离叶肉原生质体，然后以６×１０￣４／ｍＬ的密度用ＭＰ１－３液体培养基进行浅层培养。培养１０天后，用ＭＰ４培养基对ＭＰ１－２中的培养物进行稀释（１：１）．用ＭＰ５培养基对ＭＰ３中的培养物进行稀释（１：１），每次间隔１０天。在培养期间时常用手轻轻摇动培养物。用这种方法，再生细胞分裂并形成愈伤组织，愈伤组织经ＭＳ１培养基增殖３周，转到分化培养基上诱导植株分化，分化出的苗经诱导生根发育成完整的小植株（共５４株）．在研究中发现：①激素的种类、浓度及组合对刺激细胞分裂的作用差异明显；②提高培养基的ｐＨ值可明显地控制细胞褐化；③ＡｇＮＯ＿３（５ｍｇ／ｍＬ）有益于愈伤组织分化植株；④谷氨酰胺（８０ｍｇ／ｍＬ）和腺嘌呤（４０ｍｇ／ｍＬ）能提高愈伤组织的植株分化频率；⑤原生质体培养基对原生质体植株的分化亦有影响．     

NH4＋/NO3-对珍汕胚的愈伤组织诱导和分化的影响

 研究了早籼稻品种珍汕97的七成熟胚和成熟胚诱导愈伤组织及植株再生的条件,通过改变大量元素的配比和培养条件,可较大的提高其愈伤组织诱导及植株再生的频率;发现大量元素对珍汕97的愈伤组织诱导培养有着重要作用,其中氨态氮与硝态氮的比列尤为重要结果表明:7成熟胚和成熟胚在氨态氮与硝态氮的比列在2∶1时诱导效果最好,其愈伤组织的分化能力也最好;在12 h光照条件下愈伤组织的分化能力明显高于暗培养。     

马铃薯悬浮细胞原生质体培养及植株再生

试验所培养的 3个基因型的马铃薯悬浮细胞原生质体均获得再生植株。愈伤组织继代培养基、分化培养基及基因型对分化频率有显著影响     

草木樨状黄芪A4转化系原生质体培养研究

建立了草木樨状黄芪A4转化系原生质体再生植株的实验体系.以草木樨状黄芪发根农杆菌A4转化系再生植物幼叶为材料,通过酶解法,游离出大量有活力的原生质体,原生质体经培养持续分裂形成了愈伤组织,并分化出再生苗.比较了不同酶解时间、培养密度和培养基对原生质体分裂和再生植株的影响.结果表明,原生质体植板密度为3×105个/mL,采用液体浅层培养,在附加了2.0mg/L 2,4-D、0.5mg/L 6-BA、0.3mol/L甘露醇和2%蔗糖的DPD培养基中,可获得最高分裂频率,达32.4%.原生质体持续分裂形成愈伤组织可高频[(91.75±3.1)%]分化出再生苗.甘露碱纸电泳和PCR分析表明,外源基因T-DNA在原生质体来源的再生植株中仍然存在.     

云南水稻品种原生质体培养研究

采用KPR和R2培养基进行水稻原生质体培养，日本晴、楚粳8号、云粳9号、大白谷和元江普通野生稻先后获得了原生质体培养的成功，除日本晴外，其余品种均为首次报道，品种间绿苗再生率有显著差异。日本晴最高，大白谷最低，同一品种不同的俞伤组织间，分化率有很大差异。有的愈伤组织极易分化出绿苗，有的不能再生出绿苗，说明分化前的预培养非常重要。N6分化培养基的再生绿苗率极显著地高于MS。配方为N6 葡萄糖20g/L 蔗糖30g/L IAA0.2mg/L 6-BA0.5mg/L Agarose-110g?L的培养基。分化率最高，按初次接种的愈伤组织块计，每块平均再生绿苗1.4苗,酶解原生质体量的多少,与愈伤组织在N6 1mg/L2,4-D的液体培养基中悬浮培养时间的长短有关,悬浮时间较长则易于获得较多的原生质体.日本晴的再生植株中,有两株多移栽到抽穗仅45d,有可能是极早良的变异株,有些植株的粒型和稃毛也有明显变异对鉴定和利用变异的植株具有现实意义.     

木薯脆性胚性愈伤组织原生质体培养与植株再生

 【目的】建立有效的木薯原生质体再生体系,为原生质体融合以及原生质体转化等研究奠定技术基础。【方法】酶解木薯品种TMS60444 的脆性胚性愈伤组织（FEC）的悬浮系,分离原生质体的产量最高达3.5×106个/g,FDA检测其活性约90%。用TM2G培养基以液体浅层法分别在5×105个/mL和2×105个/mL密度下培养,培养过程中前30 d用0.3 mol•L-1 TM2G新鲜培养基每10 d更换1次,此后每10 d用0.25 mol•L-1 TM2G新鲜培养基更换。原生质体培养45 d后即可挑出1—2 mm大小的愈伤组织分别在MSN培养基上分化胚、CMM上促胚成熟、CEM上茎伸长、MS上生根。【结果】在5×105个/mL的原生质体培养密度下,长出的都是致密型愈伤组织（能分化胚状体）,而在2×105个/mL的密度下培养长出的有致密型愈伤组织,也有空泡型愈伤组织（不能分化胚状体）。本试验共挑出1 479个致密细胞团,分化获得757个子叶胚,已再生完整植株186棵。【结论】本研究分离的原生质体产量和活性有较大提高,对前人所指出的瓶颈问题有所改进,原生质体再生植株效率有较大提高。     

多花黑麦草胚性悬浮系的建立及原生质培养

以多花原麦草（Ｌｏｌｉｕｍ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ Ｌａｍ．）幼穗为外植诱导愈伤组织,经高有机态氮培养基改造得到易碎型胚性愈伤组织,在１／２ＡＡ培养＋１／２ＭＳＤＬ培养基中得到了生长迅速、分散的胚性悬浮系。分离原生质体经培养后得到了再生白化苗。     

橡胶树热研8—79原生质体培养再生植株

【目的】优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础。【方法】以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率。【结果】酶组合为纤维素酶1.50%＋果胶酶0.15%＋离析酶0.50%、酶解时间为12 h时,继代培养第5 d的胚性悬浮细胞达最高产量（3.6 ×107个/mL PCV）;用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5 ×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%。原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株。【结论】通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系。     

多花黑麦草原生质体培养和再生白化苗

本文报道从多花黑麦单(Lolium multiflorum Lam.)原生质体培养获得愈伤组织并再生白化苗的试验结果。利用多花黑麦草幼穗在MS 3mg/L2.4-D的培养基上诱导出愈伤组织,并在MS 2mg/L2.4-D的液体培养基中振荡培养,产生悬浮细胞系。从悬浮细胞制备原生质体,用看护培养,琼脂糖固体平板培养和液体浅层培养均获得了再生细胞团。这些细胞团在MS 1mg/L2.4-D 60g/L蔗糖的培养基上形成愈伤组织和胚状体,并在分化培养基上再生出白化苗。试验还对有关培养基进行了研究。     

荔枝转基因悬浮细胞再生松散性胚性愈伤组织的原生质体分离与初步培养

以荔枝优良品种下番枝转gus和hpt基因悬浮细胞再生的松散性胚性愈伤组织(TSFEC)为试材,进行原生质体分离研究及初步培养。结果表明:潮霉素会延长荔枝TSFEC原生质体分离的酶解时间,比一般的酶解时间多2 h,但对原生质体产量和存活率的影响不大;TSFEC培养时间对原生质体分离的影响很大,其中以培养15-20 d时的原生质体产量最大,为(10.1-10.5)×107个.g-1,此时原生质体的活力最高,存活率可以达到93.1%-93.4%;酶解方式对原生质体产量和活力影响都不大,常规的酶解方式酶解的最适宜时间为14 h。     

胡萝卜悬浮细胞系及高效再生系统的建立

以胡萝卜块根为材料诱导愈伤组织,并建立悬浮细胞系,然后将悬浮细胞和愈伤组织分别转入分化培养基进行分化培养。结果表明,胡萝卜块根形成层愈伤组织诱导率为100%,最佳激素种类和用量为2,4!D0.1mg/L;根据外观可将愈伤组织大致分为4种类型,I型是直接建立悬浮细胞系的良好来源,Ⅲ型经继代培养后可用于悬浮细胞系的建立;静止法是胡萝卜悬浮细胞系简单而有效的继代方法;胡萝卜愈伤组织分化的最佳培养基是MS或B5基本培养基,MS培养基上的再生苗可直接生根,而B5培养基上的再生苗在原培养基上很难生根,需要转移到MS培养基上才能生根。     

大蒜胚性细胞悬浮系的建立

以中牟 5号大蒜根尖为外植体 ,在 1 1种固体培养基上诱导愈伤组织 ,筛选出最佳培养基MS + 2 ,4-D 0 .5mg/L和MS + 2 ,4-D 2 .0mg/L +KT 0 .5mg/L。愈伤组织形成后在上述1 1种培养基上继代 3～ 4次 ,获得胚性愈伤组织后再转至液体培养基中 ,经强化培养 3个月后获得胚性细胞悬浮系。试验结果表明 :缩短换液时间 (每隔 3～ 4天换液 1次 ) ,可加快胚性细胞悬浮系的建立     

荔枝转基因胚性愈伤组织原生质体分离条件的优化

对荔枝品种下番枝转基因胚性愈伤组织原生质体分离条件进行了优化.结果表明:转基因胚性愈伤组织抗性细胞系Q811培养16-18 d后,转入含8 g.L-1纤维素酶Cellu lose R-10和4 g.L-1离析酶M acrease R-10的CPW+130 g.L-1甘露醇酶液中,在(25±2)℃、黑暗条件下,连续振荡(30-40 r.m in-1)10-11 h进行酶解,转基因原生质体产量达到18.2×106个.g-1,存活率达97.5%.