转基因水稻外源基因的遗传和表达初步研究

将天蚕抗菌肽B基因应用基因枪法导入水稻TN1发芽肿胚，获得转基因植株2株，转基因水稻T1－T5 5个世代不同株系，对bar基因、抗菌肽基因的遗传和表达进行初步研究。结果表明：转基因后代株系bar^R:bar^S在部分符合3：1分离比率。T1、T4转基因株系PCR、Southern印迹分析表明，T18株有抗菌肽B基因；T4仍有4个株系有抗菌肽基因，其他的株系基因丢失，T3 1个株系Northern印迹证明抗菌肽基因在RNA水平有表达；抗菌肽B转基因水委对白叶枯病的抗病性有提高，抗性能传递到高世代，在T3得到抗病性提高的株系。     

昆虫抗菌肽基因的合成及克隆

设计并合成了昆虫抗菌肽（ｃｅｃｒｏｐｉｎ）Ｂ 基因，合成的抗菌肽Ｂ 基因全长１３２个碱基对，克隆到ＰＵＣ１９ 载体上，经过ＤＮＡ 序列分析证实，合成的基因序列与设计的序列完全一致。     

双抗植物表达载体的构建

用限制性内切酶将抗虫的胰蛋白酶抑制剂基因从质粒ｐＢｉｎ２０上切下,插入带有抗细菌的抗菌肽Ｂ和抗菌肽Ｄ基因的植物表达载体ｐＤＢ３和ＸｂａＩ位点。通过点杂交和酶切鉴定,得到了带有３个抗性基因的双抗植物表达载体ｐＤＢＴ。     

双抗植物表达载体的构建

用限制性内切酶将抗虫的胰蛋白酶抑制剂（ＴＩ）基因从质粒ｐＢｉｎ２０上切下,插入带有抗细菌的抗菌肽Ｂ和抗菌肽Ｄ基因的植物表达载体ｐＤＢ３的ＸｂａⅠ位点。通过点杂交和酶切鉴定,得到了带有３个抗性基因的双抗植物表达载体ｐＤＢＴ．     

抗菌肽的应用及展望

抗菌肽（Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｐｅｐｔｉｄｅ）是昆虫体内经诱导而产生的一类具有抗菌活性的碱性多肽物质，它有Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ等多种结构。抗菌肽具有广谱的杀菌活性，它具有分子量小、热稳定、水溶性好，以及材料来源丰富等优点。更为重要的是抗菌肽对正常的真核细胞几乎没有作用，仅仅作用于原核细胞和发生病变的真核细胞，抗菌肽具有广谱的杀菌活性，不仅作用于革兰氏阳性细菌，而且也作用于真菌、昆虫、某些病毒和肿瘤细胞，同时还能加速免疫和伤口的愈合过程。１抗菌肽在基因工程上的应用抗菌肽基因的化学合成方面在国内…     

中国家蚕抗菌肽基因的PCR扩增,克隆和序列测定

本实验采用ＰＣＲ技术，扩增中国家蚕抗菌肽ｃｅｃｒｏｐｉｎＢ基因片段，并以ＰＵＣ１９质粒为载体，将该基因片段转化到大肠杆菌中。从筛选得到的阳性克隆中分离出ｃｅｃｒｏｐｉｎＢ基因，测定其序列，并由此推导出氨基酸序列。结果表明：（１）抗菌肽ｃｅｃｒｏｐｉｎＢ基因片段长为８６６ｂｐ，包括７３ｂｐ的ＥｘｏｎＩ，５５６ｂｐ的Ｉｎｔｒｏｎ，８７ｂｐ的ＥｘｏｎⅡ和１５０ｂｐ的３’端非编码区。其中，非内含子部分的碱基序列与已克隆的日本家蚕的两个ｃｅｒｏｐｉｎＢｃＤＮＡ序列比较，同源性分别为８７．５％和９５％；（２）推导出的成熟抗菌肽由３７个氨基酸残基组成，其氨基酸序列与日本家蚕和天蚕的氨基酸序列相比较，同源性为９１．９％和８０．６％。     

抗菌肽Shiva A基因导入杂交水稻恢复系明恢63的初步研究

利用农杆菌介导法将抗菌肽Ｓｈｉｖａ Ａ 基因导入杂交水稻恢复系明恢６３ 成熟胚诱导的愈伤组织中，并再生植株。经ＰＣＲ检测分析证明Ｓｈｉｖａ Ａ 基因已整合到再生植株的基因组中。     

转基因水稻目的性状稳定性的研究

本文根据分子杂交的证据,确认转基因水稻株以后,用人工接种白叶枯病病菌的办法,从转入抗菌肽 Ｂ（ Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｂ） 基因的水稻种子后代中筛选出抗性植株。连续３ 年,用人工接种病原菌的办法检测抗性植株有性后代的抗病性。结果表明,转基因水稻有性后代的目的性状（ 抗白叶枯病） 并不一致,出现敏感、中感、中抗等分离,而从有性后代中选出中抗植株后,中抗株的有性后代能保持目的性状的稳定性。     

转基因水稻目的性状稳定性的研究

本文根据分子杂交的证据,确认转基因水稻株以后,用人工接种白叶枯病菌的办法,从转入抗菌肽Ｂ基因的水稻种子后代中筛选出抗性植株。连续３年,用人工接种病原菌的办法检测抗性植株有性后代的抗病性。结果表明,转基因水稻有性后代的目的性状（抗白叶枯病）并不一致,出现敏感,中感中抗等分离,而从有性后代中选出中抗植株后,中抗株的有性后代能保持目的性状的稳定性。     

转Bar基因水稻的应用现状与前景

目前，科学家正在利用分子生物学和遗传学在杂草科学应用上的最新成果，通过生物技术将抗除草剂基因（Ｂａｒ）转入优良恢复系，与不育系配组选配抗除草剂强优超净杂交稻，以解决水稻杂种纯度和提高杂种优势的问题。一、转Ｂａｒ基因水稻的研究现状１草丁膦的毒害机理和Ｂａｒ基因的抗性机理草丁膦是低毒、广谱的有机磷类除草剂。它被植物吸收后，能强烈抑制谷酰胺合成酶（ｇｌｕｔａｍｉｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ，ＧＳ）的活性，导致细胞内氨的迅速积累。进而抑制光合反应，减少跨膜ｐＨ梯度，使光合磷酸化解偶联，随之叶绿体结构解体，最…