共查询到15条相似文献,搜索用时 109 毫秒
1.
2.
3.
4.
韧皮部特异性启动子的克隆及含绿色荧光蛋白报告基因新植物表达载体的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
用PCR方法扩增得到了长度为966bp的笋瓜韧皮部蛋白2基因启动子片段,克隆人pUCm—T载体后,获得了新的重组质粒pUCm—PSP.分别用限制性内切酶酶切重组质粒和pCAMBIA1302植物表达载体,经回收、连接、转化和鉴定后,构建了由PSP驱动绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的新型植物表达载体pHZ03.利用细胞感受态法将新植物表达载体分别导入根癌农杆菌EHA105、GV3101、LBA4404和发根农杆菌Ri15834中. 相似文献
5.
6.
7.
以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Esat-6基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,将globulin-1-Esat6联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中,构建植物双元表达质粒pCAMBIA1300GEsat-6,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中.通过对pC1300GEsat-6质粒酶切鉴定和测序分析表明克隆的Esat-6与预期相符,酶切从农杆菌中所提的质粒,条带大小与预期结果相符合. 相似文献
8.
利用RT—PCR方法克隆了山葡萄几丁质酶基因VCH3的全长cDNA片段,并将该基因构建到双元载体pBI121质粒35S启动子下游,形成重组质粒pBIVCH3。通过冻融法将该重组质粒转化到根癌农杆菌LBA4404中,获得了植物表达载体。 相似文献
9.
构建包含编码乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物表达载体,并转化根癌农杆菌,为进一步制备转基因植物口服乙肝疫苗奠定基础。通过聚合酶链反应(PCR),以质粒pVAX1-L为模板扩增出L基因片段,插入到含有玉米特异性启动子的pCR2.1载体上;再用PCR技术扩增globulin-1-L融合片段,定向克隆到经过加工修饰的含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,将重组质粒转化至农杆菌LBA4404中。HindⅢ和XbaⅠ双酶切证实,globulin-1-L融合片段已经插入到pCAMBIA1300上,测序结果说明克隆的靶基因序列与GenBank上公布的序列完全吻合。 相似文献
10.
玉米Ubiquitin启动子的克隆及功能鉴定 总被引:4,自引:0,他引:4
根据Cornejo发表的Ubiquitin启动子的序列,设计引物从玉米自交系18红中克隆出该启动子,测序证明与发表的序列具有98%的同源性,并构建了带有该启动子和GUS基因的植物表达载体,将重组质粒导入农杆菌LBA4404,用农杆菌介导法转入烟草和小麦愈伤中,通过GUS染色反应,证明克隆的启动子在单子叶和双子叶植物中均有活性。 相似文献
11.
以pBI121质粒为基本载体,分别构建了由35S启动子驱动的用于番茄HsfA3基因亚细胞定位(Subcellular location)和遗传转化的植物表达载体pBI-sl-A3、pBI-A3。将pBI121质粒上的35S启动子进行改造,分别构建了植物表达载体pBI-mini35S、pBI-HSE-mini35S,用于研究热激转录因子HsfA3与热激元件(Heat shockelements,HSEs)的互作。通过冻融法将以上4种重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404中,用于后续试验,为进一步研究HsfA3基因在耐热中的功能和分子生物学机制奠定了基础。 相似文献
12.
将含有人骨形成蛋白3(hBMP-3)全长基因的质粒pCAMBIA1300-hBMP-3通过电激法转化到根癌农杆菌LBA4404中,以烟草无菌苗叶盘为外植体,通过农杆菌介导法进行遗传转化,获得了抗潮霉素(Hy-gromycin,Hyg)的再生植株,通过潮霉素抗性鉴定及PCR检测,初步确定人骨形成蛋白-3(hBMP-3)全长基因已整合到烟草的基因组中。 相似文献
13.
Gui-rong YU Yan LIU Wen-ping DU Jun SONG Min LIN Li-yuan XU Fang-ming XIAO Yong-sheng LIU 《农业科学学报》2013,12(12):2134-2142
Since maize is one of the most important cereal crops in the world, establishment of an efficient genetic transformation system is critical for its improvement. In the current study, several elite corn lines were tested for suitability of Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation by using immature embryos as explants. Infection ability and efficiency of transformation of A. tumefaciens sp. strains EHA105 and LBA4404, different heat treatment times of immature embryos before infection, influence of L-cysteine addition in co-cultivation medium after transformation, and how different ways of selection and cultivation influence the efficiency of transformation were compared. Glyphosate-resistant gene 2mG2-EPSPS was transformed into several typical maize genotypes including 78599, Zong 31 and BA, under the optimum conditions. Results showed that the hypervirulent Agrobacterium tumefaciens sp. strain EHA105 was more infectious than LBA4404. Inclusion of L-cysteine (100 mg L?1) in co-cultivation medium, and heating of the immature embryos for 3 min prior to infection led to a significant increase in the transformation efficiency. Growth in resting medium for 4-10 d and delaying selection was beneficial to the survival of resistant calli. During induction of germination, adding a high concentration of 6-BA (5 mg L?1) and a low concentration of 2,4-D (0.2 mg L?1) to regeneration medium significantly enhanced germination percentage. Using the optimized transformation procedure, more than 800 transgenic plants were obtained from 78599, Zong 31 and BA. By spraying herbicide glyphosate on leaves of transgenic lines, we identified 66 primary glyphosate-resistant plants. The transformation efficiency was 8.2%. PCR and Southern-blot analyses confirmed the integration of the transgenes in the maize genome. 相似文献
14.
为了探索山葡萄CBF3基因(VaCBF3)对杨树的遗传转化的影响,及组成型启动子和诱导型启动子对转基因植株生长的影响,分别构建由2种类型启动子调控的植物表达载体.根据GenBank上公布的rd29A基因序列设计特异性引物,利用PCR方法从拟南芥基因组DNA中克隆rd29A基因启动子片段,利用限制性内切酶通过酶切、连接构建由组成型启动子35S和诱导型启动子rd29A基因启动子驱动的VaCBF3基因植物表达载体,利用冻融法完成重组质粒对根癌农杆菌LBA4404的转化.试验结果表明,所克隆的rd29A基因启动子片段序列分析表明该启动子片段长度为945bp,与GenBank中基因序列同源性达99%,具有DRE、ABRE、TATAbox和CAAT box4个完整的顺式作用元件,具有启动子功能.经过酶切、连接成功地将目的基因与载体质粒连接,并将重组质粒导入至根癌农杆菌LBA4404中,为下一步利用农杆菌介导法对杨树的遗传转化及研究2种启动子的启动效率奠定了一定的基础. 相似文献
15.
[目的]克隆颠茄(Atropa belladonna)H6H基因并构建高效植物表达载体。[方法]采用RT—PCR方法从颠茄中克隆莨菪碱-6β羟化酶和1,4丁二胺-氮-甲基转移酶基因编码区,插入经改造后获得双元三价植物高效表达载体P2301-gus,构建植物表达载体p2301-H6H,并将该表达栽体导入根癌农杆菌LBA4404和发根农杆菌C58C1。[结果]获得了可直接用于遗传改良的颠茄工程茵p2301-H6H-LBA4404和p2301-H6H-C58C1。[结论]为利用植物基因工程技术提高颠茄中生物碱含量奠定了基础。 相似文献