Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1 mRNA在绵羊卵母细胞复合体、裸卵及卵丘细胞中的表达

为了探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进绵羊卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理.本研究对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的绵羊卵母细胞进行了体外成熟培养试验,以不同方式处理卵丘细胞,应用Rael-time PCR技术,检测母源基因Gdf9(生长分化因子9),Zar1(合子阻滞因子1),Mater(胚胎必要的母体抗原),Dnmt1(DNA甲基化酶1)在不同卵母细胞和卵丘细胞中mRNA的含量.结果表明,4个基因的mRNA在GV期的表达量均高于24h成熟培养的卵母细胞(P＜0.05),除Dnmt1外其他3个基因在致密卵丘细胞包裹的卵母细胞的表达量均高于自然裸卵(DOs) (P ＜0.05),Zar1和Mater在24h卵丘-卵母细胞复合体的表达量低于24h裸卵(P＜0.05),除Dnmt1外其他3个基因在24h共成熟卵丘细胞中表达量均高于未培养的卵丘细胞(P＜0.05).结果提示,这4个母源基因对卵母细胞成熟有重要影响,且可能参与了卵丘细胞与卵母细胞间的相互作用,本研究结果为提高卵母细胞的体外成熟效率提供了依据及理论基础.     

金黄地鼠超排后未排卵泡卵母细胞的成熟度和受精能力的观察

为了证实金黄地鼠超排后卵巢中未排卵卵泡卵母细胞的成熟程度和受精能力,用促性腺激素PMSG和HCG进行4次超排处理,其中选择12只超排效率低下的金黄地鼠,回收输卵管和卵巢卵母细胞,观察卵母细胞的成熟程度、体外培养成熟能力及体外受精能力。结果显示,输卵管中回收超排卵数平均为22.6±7.8枚/只,从超排后卵巢中回收卵丘扩展卵数平均为23.2±3.9枚/只,卵丘未扩展卵数平均为13.4±3.7枚/只。卵丘扩展卵经0.1%透明质酸酶消化,裸卵占86.1%,带放射冠卵占11.5±2.4%。裸卵中排出极体的成熟卵占卵丘扩展卵的80.4±2.3%,无极体裸卵占5.7±0.8%。经体外培养2h,无极体裸卵的成熟率达100%,带放射冠卵的成熟率仅为6.3±9.4%,而卵丘未扩展卵未见有成熟卵。人精子穿透试验显示,卵巢回收成熟卵的受精率44.1±6.0%,同超排卵的受精率45.4±4.7%比较,无显著差异(P<0.05)。从低超排率的金黄地鼠卵巢中可获取与超排卵数相近的成熟卵母细胞,且具有可利用于去透明带金黄地鼠卵子穿透实验(HOP)及相关发育生物学研究的潜能。     

波尔山羊活体采卵与卵母细胞体外受精技术

对10只不孕不育波尔母山羊采用超数排卵、活体采卵、卵母细胞体外成熟培养以及体外受精等技术方法,探讨其是否能正常繁育后代。试验中6只供体经超数排卵处理,在发情前利用特制的采卵装置进行活体采卵,共采集到30枚形态学正常的卵母细胞。经过体外成熟培养,有21枚成熟卵母细胞进行了体外受精处理和培养,获得16枚2 细胞胚胎,移植到4只同期发情的当地山羊受体输卵管内,经妊娠检验,有两只受体受孕,其中1只受体产出正常羔羊2只。该技术经进一步改进完善后可望作为不孕不育波尔山羊繁殖后代的辅助生育技术。     

猪卵子的体外成熟与体外受精研究

从屠宰猪卵巢中取出卵子，在体外培养30小时后卵丘扩散率为70．48％，第一极体释放率15．39％。卵丘层扩散的卵子体外获能的猪精液授精，受精率平均9．56％。将受精卵培养24小时，有51．22％卵子发育到2－细胞期，7．32％发育至4－细胞期。从经超数排卵的猪卵巢中取下3枚A级卵，用体外获能猪精液授精，培养24小时，其中2枚达到2－细胞期，再继续培养48小时，均达到16－细胞期。     

猪卵丘卵母细胞复合体和裸卵中卵母细胞发育及基因表达差异的研究

 【目的】研究探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进猪卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理。【方法】对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的猪卵母细胞进行了体外成熟培养试验,应用mRNA差异显示（DDRT-PCR）和半定量反转录PCR技术(RT-PCR),对这2类猪卵母细胞中mRNA的差异表达进行研究,得到了14条差异表达条带,经过回收、克隆、测序后,再运用半定量（RT-PCR）进行检测。【结果】体外培养的裸卵细胞的各项成熟指标均低于卵丘-卵母细胞复合体。3个基因（PELP1,Myo5b and CAST）和一条新EST序列在有卵丘和无卵丘的猪卵母细胞中表现出差异表达。分离得到的差异表达基因在雌激素受体调节、细胞膜间的信息传导和细胞器物质运输等过程中发挥重要的作用。【结论】这些差异基因可能参与了卵丘细胞与卵母细胞间的相互作用,对卵母细胞的成熟具有重要作用。     

猪卵丘卵母细胞复合体和裸卯中卵母细胞发育及基因表达差异的研究

【目的】研究探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进猪卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理。【方法】对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的猪卵母细胞进行了体外成熟培养试验,应用mRNA差异显示（DDRT-PCR）和半定量反转录PCR技术（RT—PCR）,对这2类猪卵母细胞中mRNA的差异表达进行研究,得到了14条差异表达条带,经过回收、克隆、测序后,再运用半定量（RT-PCR）进行检测。【结果】体外培养的裸卵细胞的各项成熟指标均低于卵丘-卵母细胞复合体。3个基因（PELP1,Myo5b and CAST）和一条新EST序列在有卵丘和无卵丘的猪卵母细胞中表现出差异表达。分离得到的差异表达基因在雌激素受体调节、细胞膜间的信息传导和细胞器物质运输等过程中发挥重要的作用。【结论】这些差异基因可能参与了卵丘细胞与卵母细胞间的相互作用,对卵母细胞的成熟具有重要作用。     

卵丘细胞对活体取卵来源的裸卵在体外成熟中的作用

本文探讨了卵丘细胞对活体取卵(ovumpickup,OPU)来源的裸卵在体外成熟中的作用。实验分3组:自然裸卵组(NO),裸卵独自成熟培养;共成熟组(CM),自然裸卵与A级卵丘卵母细胞复合体(Cumulus oocyte complexes,COCs)共成熟培养;非裸卵组(NN),正常AB级COCs成熟后,去除卵丘再进行体外受精与体外培养。结果显示:NN组的成熟率最高,其卵裂率及囊胚率高于NO组,但与CM组相似;CM组的成熟率与NO组没有显著差异,但卵裂率和囊胚率均比NO组高。表明OPU来源的裸卵和A级COCs共成熟能显著改善裸卵的发育能力;卵丘细胞对卵母细胞的促成熟作用可直接作用于裸卵,促进裸卵的成熟及随后的发育。     

白细胞介素6及其受体在绵羊卵母细胞成熟过程中的表达

采用实时定量PCR技术检测了不同成熟培养时间绵羊卵母细胞和卵丘细胞白细胞介素6基因（interleukin-6 gene, IL-6）及其受体基因（interleukin-6 receptor gene, IL-6R）mRNA的相对表达量。结果显示,在体外成熟培养过程中,卵母细胞和卵丘细胞中持续表达IL-6及其受体IL-6R mRNA,培养4~8 h,其相对表达量呈现显著升高,随后则降低;在16~20 h时卵母细胞中IL-6 mRNA表达重新升高;相应的卵丘细胞在12~16h时IL-6R mRNA表达也升高。绵羊卵母细胞和卵丘细胞中IL-6和IL-6R mRNA的持续表达以及动力学变化提示了白细胞介素6在卵母细胞成熟过程中具有潜在调控作用。     

孕马血清促性腺激素对狗卵母细胞体外核成熟的影响

[目的]研究孕马血清促性腺激素(PMSG;eCG)对狗卵母细胞体外成熟效果的影响。[方法]采用切割法收集卵巢表面卵丘卵母细胞复合体(COCs),并且随机分为4组,在添加不同浓度的PMSG的基础培养液(含有10%胎牛血清的DMEM)中,5%CO2,38.5℃培养箱内培养48 h。在含有0.1%透明质酸酶的D-PBS中用细小玻璃管剥离卵丘细胞从而获得裸卵,为了鉴别核成熟期,用4%甲醛溶液固定裸卵15 min,然后用10μg/ml Hoechst33342染色、压片,荧光显微镜下观察核形态。[结果]体外培养48 h后,添加PMSG处理组卵丘扩散明显,但发育到MⅠ-MⅡ的比率都没有显著差异(P(0.05)。100 IU/ml PMSG处理组GVBD期率显著低于对照组。[结论]添加PMSG改善了卵丘扩散的效果,但是没有提高核成熟率,需进一步改进狗卵母细胞体外成熟率的培养体系。     

奶牛胚胎切割移植试验报告

以裸胚切割和透明带内切割两种方法,切割31枚奶牛早期胚胎,一分为二。将41枚半胚(其中38枚成对)分别移植给26头受体牛,6头移植怀孕,成功率为23.1%,移植有透明带的半胚和无透明带的裸半胚怀孕成功率都为25%。2半胚在同一透明带内(透明带内切割)的怀孕成功率为40%,而将裸半胚重新装入空透明带内的移植5头(受体全为黑白花奶牛),均未怀孕。桑椹胚分割成半胚移植怀孕成功率为21.1%,而早期囊胚则为28.6%。