魟鱼软骨多糖的免疫调节作用

[目的]观察魟鱼软骨多糖对小鼠免疫器官胸腺和脾脏重量的影响以及脾脏组织细胞IL-2、IL-6、IFN-γ细胞因子的表达水平。[方法]腹腔注射环磷酰胺（CY）造成小鼠免疫抑制模型,以香菇多糖为阳性对照,魟鱼软骨多糖（低、中、高剂量）,灌胃给药14 d,试验结束后称量胸腺和脾脏重量计算胸腺指数和脾指数,检测脾脏中细胞因子的表达情况：运用抗原对应抗体进行免疫组化SP法检测脾中IL-2、IL-6、IFN-γ细胞因子的表达水平。[结果]魟鱼软骨多糖能显著提高小鼠胸腺和脾脏重量,能拮抗环磷酰胺导致的免疫抑制,升高脾脏中细胞因子的表达水平从而提高机体的免疫功能。[结论]魟鱼软骨多糖对小鼠的免疫功能具有一定的调节作用,是一种良好的免疫调节剂。     

异叶败酱多糖的体内抗肿瘤活性研究

【目的】研究异叶败酱多糖抑制U14宫颈癌实体瘤小鼠肿瘤生长的作用机制。【方法】建立小鼠宫颈癌(U14)实体瘤模型,以灌胃生理盐水和皮下注射环磷酰胺(25mg/kg)分别作为阴性和阳性对照,观察异叶败酱多糖不同剂量(30,60,90mg/kg)灌胃给药14d后,对小鼠肿瘤生长抑制作用的影响;检测异叶败酱多糖对荷瘤小鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(AKP)活性的影响;用原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞的凋亡情况;利用免疫组织化学法分析与细胞凋亡密切相关蛋白(突变型p53、Bcl-2、Bax)的表达情况。【结果】与阴性对照组相比,异叶败酱多糖中、高剂量组瘤质量显著下降,荷瘤小鼠血清LDH活性显著降低,Bax蛋白表达量显著升高,突变型p53和Bcl-2蛋白表达量显著下降(P0.05);异叶败酱多糖各组肿瘤组织的细胞凋亡数较阴性对照组均显著提高(P0.05),荷瘤小鼠血清AKP活性有所升高,但与阴性对照差异不显著(P0.05)。与阳性对照组相比,异叶败酱多糖中、高剂量组抗U14宫颈癌效果接近于临床化疗药环磷酰胺。【结论】异叶败酱多糖具有抑制实体瘤U14生长的作用,揭示该多糖可能通过调节细胞凋亡相关基因的表达,进而促进肿瘤细胞的凋亡而发挥其抗肿瘤作用。     

芦荟多糖提高鸡免疫功能的研究

[目的]研究芦荟多糖对鸡免疫功能的作用。[方法]采用环磷酰胺复制雏鸡免疫抑制模型,通过多项免疫学指标检测,探讨芦荟多糖对正常、免疫抑制及新城疫疫苗免疫雏鸡免疫功能的影响。[结果]芦荟多糖可以增加健康雏鸡的增重,促进免疫器官胸腺、脾脏和法氏囊的发育,特别是胸腺的发育,对正常雏鸡血清IFN-γ和血清IL-2具有一定的诱生能力;芦荟多糖对于环磷酰胺引起的雏鸡免疫抑制试验显示,可以明显增加免疫抑制雏鸡的增重,能促进血清IL-2和IFN-γ的诱生,提高机体的抵抗力,特别是在高剂量对IL-2的诱生作用上差异显著（P〈0.05）;芦荟多糖能够提高ND抗体水平。[结论]芦荟多糖可以改善正常雏鸡的免疫状态、增重和细胞因子诱生水平。     

玉屏风复合多糖对免疫低下小鼠血清IL-2和IFN-γ含量的影响

[目的]探讨玉屏风复合多糖对免疫低下小鼠的调节和保护作用.[方法]以环磷酰胺80 mg/kg诱导的免疫低下小鼠为实验动物模型,研究不同剂量玉屏风复合多糖（100、200和400 mg/kg）对小鼠脾脏指数、血清IL-2和IFN-γ含量的影响.[结果]高剂量玉屏风多糖能提高免疫功能低下小鼠的脾脏指数（P＜0.05）.玉屏风多糖能提高免疫抑制的小鼠血清的IL-2和IFN-γ含量,尤其以中、低剂量组效果较好.玉屏风多糖能明显提高正常小鼠血清的IL-2含量（P＜0.01）,但对正常小鼠的IFN-γ含量无显著影响.[结论]该研究可为玉屏风复合多糖的临床应用提供试验依据.     

霍山石斛多糖对溃疡性结肠炎小鼠的抗炎作用

[目的]探究霍山石斛多糖对溃疡性结肠炎小鼠的抗炎作用。[方法]应用葡聚糖硫酸钠建立溃疡性结肠炎模型,灌胃给予模型小鼠不同剂量的霍山石斛多糖,观察霍山石斛多糖对模型小鼠DAI、血清细胞因子IL-1、TNF-α水平及结肠病理组织学的影响,分析霍山石斛对溃疡性结肠炎小鼠的抗炎作用。[结果]与模型组相比,霍山石斛多糖高、中剂量组显著降低DAI、血清细胞因子IL-1、 TNF-α水平(P0.05),改善结肠病理组织学。[结论]霍山石斛多糖通过抗炎治疗溃疡性结肠炎小鼠。     

鹅绒委陵菜多糖对荷瘤小鼠细胞因子的影响

[目的]研究鹅绒委陵菜多糖(PAP)对荷瘤小鼠外周血细胞因子白介素-2(TL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。[方法]建立肉瘤S180小鼠动物模型,灌胃给予50、100和200 mg/kg剂量的PAP,以抑瘤率为指标,考察鹅绒委陵菜多糖的体内抗肿瘤活性,测定其抑瘤率;ELISA法测定荷瘤小鼠血清中白细胞介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TN-α)的水平。[结果]低、中、高3个剂量的PAP对S180荷瘤小鼠的抑瘤率分别为46.41%、52.29%和59.48%;其中CY和低剂量的多糖组合抑瘤率与中、高剂量的多糖抑瘤率相当,并明显高于单用环磷酰胺组的抑瘤率;低、中、高3个剂量的PAP能明显提高荷瘤小鼠血清中IL-2、TNF-α的水平。[结论]鹅绒委陵菜多糖具有提高荷瘤小鼠细胞免疫的作用。     

青蒿多糖对小鼠血清中IL-1β,IL-2,IL-6,IFN-γ水平的影响

为观察青蒿多糖(Herba Artemisiae Annuae polysaccharides,HAAP)对小鼠免疫功能的影响,采用木瓜蛋白酶法提取青蒿多糖,将50只昆明种小鼠随机分成5组进行试验.第Ⅰ组为对照组,腹腔注射生理盐水;第Ⅱ组到第Ⅴ组为青蒿多糖组,分别按25,50,100,150mg/kg剂量腹腔注射青蒿多糖,连续给药7d.分离血清测定IL-1β,IL-2,IL-6,IFN-γ质量浓度.结果显示50 mg/kg青蒿多糖能提高血清中IL-1β,IL-2和IFN-γ质量浓度(p0.01);25mg/kg青蒿多糖也能提高血清中IL-6和IFN-γ质量浓度(p0.01);100mg/kg青蒿多糖对IL-2有升高作用,对IL-6和IFN-γ有降低作用(p0.01).结果表明青蒿多糖对小鼠血清中这4种细胞因子有调节作用.提示适当质量浓度的青蒿多糖可能对Th1/Th2的平衡有调节作用.     

不同工艺制备的白术多糖对小鼠血清中细胞因子的影响

研究白术在不同制备工艺条件下得到的白术多糖(PAM)对小鼠血清中细胞因子的影响,采用传统水提和超声法提取白术多糖(PAM),以苯酚硫酸比色法测定多糖含量.通过腹腔注射环磷酰胺,建立免疫抑制模型,将提取的PAM连续灌胃小白鼠14d,观察PAM对小白鼠血清中IL-2,IL-4和IFN-γ含量的影响.结果发现,两种方法提取的PAM对小鼠日增质量和免疫器官指数的影响不明显,但均能极显著提高免疫低下小鼠血清中IL-4的含量.结果表明,传统水提和超声法提取的PAM均能在不影响生长性能的基础上,促进小鼠血清中细胞因子IL-4的表达,缓解免疫应激,提高机体免疫功能,但水提法优于超声提取法.     

酵母多糖对小鼠免疫功能影响的体外实验研究

[目的]研究酵母多糖对小鼠免疫功能的影响，为酵母多糖相关产品的开发利用提供可靠的实验依据。[方法]分离提取小鼠的脾细胞，分为添加酵母多糖组和不加酵母多糖的对照组，检测小鼠脾细胞的增殖活性；留取细胞上清液，测定白细胞介素2（IL-2）、γ干扰素（IFN-γ）含量；用流式细胞术检测T淋巴细胞和B淋巴细胞的数量，观察酵母多糖对T、B细胞增殖的影响。[结果]酵母多糖组增殖活性明显高于对照组（P〈0．01）；在一定剂量范围内，该组IL-2、IFN-γ的含量与酵母多糖呈剂量依赖关系，另外酵母多糖对T、B细胞均有明显的增殖效果。[结论]酵母多糖可显著提高小鼠免疫系统的功能。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对断奶仔猪生长性能、血清细胞因子及肠道免疫水平的影响

[目的]本试验旨在通过脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)体内试验,根据仔猪血清细胞因子水平、肠黏膜sIgA水平及肠道免疫球蛋白mRNA相对表达量的变化,研究DON对断奶仔猪免疫机制的影响。[方法]选取30头21日龄"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪,随机分为对照组、DON低剂量组和DON高剂量组,对照组饲喂基础饲粮,低剂量组和高剂量组分别饲喂含1和2 mg·kg-1DON的基础饲粮。试验期60 d。在试验开始后的0、14、28、42和60 d,所有仔猪经前腔静脉采血,检测血清细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6水平;试验结束时,每组随机选取5头仔猪剖杀,取十二指肠、空肠和回肠,检测肠道黏膜sIgA水平及肠组织IgA、IgM、IgG mRNA相对表达量。[结果]DON能显著或极显著降低仔猪平均日采食量与平均日增重,增加料重比(P0.05,P0.01);显著降低血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6水平和小肠黏膜sIgA水平及小肠组织IgA、IgM、IgG mRNA相对表达量(P0.05),其中DON高剂量组的作用效果比低剂量组更加明显。[结论]DON可以降低仔猪的生长性能、血清细胞因子及肠道免疫水平,对断奶仔猪具有一定的免疫毒性作用。     

蒲黄醇提取物对C57BL／6荷瘤小鼠免疫功能的影响

[目的]研究蒲黄醇提物对C57BIM6荷瘤小鼠免疫功能影响。[方法]通过建立Lewis肺癌小鼠移植瘤动物模型，以抑瘤率为指标考察蒲黄醇提物的体内抗肿瘤活性，分别测定其抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数；四氮唑盐（MTY）法对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖活性进行测定；ELISA法测定荷瘤小鼠血清中白细胞介素一2（IL-2）、肿瘤坏死因子-a（TNF-a水平。[结果]蒲黄醇提取物100mg／kg·d组对肿瘤生长有明显的抑制作用（P〈0．01），其抑瘤率为48．3％，蒲黄醇提物三个剂量组均能提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾脏指数。同时100和200mg／kg·d组能显著提高荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖能力和荷瘤小鼠血清中IL-2、TNF—ol的水平。[结论]蒲黄醇提物具有提高荷瘤小鼠体液免疫和细胞免疫的作用。     

鬼针草90%醇提物对U14荷瘤小鼠的抑瘤效应

以U14细胞株接种小鼠制成荷瘤模型,研究鬼针草90%醇提物对荷瘤小鼠的抑瘤效应.结果表明,90%鬼针草醇提物通过提高机体免疫力抑制小鼠肿瘤生长.     

牛蒡子醇提物抑制小鼠宫颈癌U14生长的研究

通过建立小鼠宫颈癌U14实体瘤与腹水瘤2种动物模型,观察牛蒡子醇提物对实体瘤抑瘤率和腹水瘤生命延长率的影响。结果发现,以阴性对照组为基础,牛蒡子醇提物3个剂量组及环磷酰胺(CTX)阳性对照组实体瘤各组抑瘤率分别为31.7%、49.7%、57.4%和83.6%(P<0.01);腹水瘤各组生命延长率分别为39.8%、46.6%、62.5%和91.6%(P<0.01)。表明牛蒡子醇提物对小鼠宫颈癌U14的生长有一定的抑制作用。     

一株分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞的鉴定

[目的]应用杂交瘤技术获得稳定分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。[方法]先将原核表达产物His—PoIFN一γ免疫BALB／c小鼠4次，然后进行细胞融合，再以纯化的GST—PoIFN一1作为包被抗原，用间接ELISA筛选阳性杂交瘤无性系，最终获得能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，对其进行问接ELISA和Westernblot检测。[结果]试验获得l株能稳定分泌抗猪IFN一1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，被命名为B3株，经间接ELISA和Westernblot检测，该株分泌的抗体能与融合蛋白His—PoIFN一γ和GST—PoIFN一γ发生特异性反应，而与其他表达鸡γ-干扰素、His和GST蛋白等的重组质粒均不发生反应。B3株分泌的抗体小鼠腹水的ELISA效价达到1：160000，抗体亚型为IgG1型，且轻链为κ链。[结论]该研究为建立猪γ-干扰素检测方法，研究机体的免疫状态及免疫机制提供了技术基础。     

人α干扰素转基因小鼠模型的建立

[目的]建立人α干扰素（interferon-α,IFN-α）转基因小鼠,为研究IFN-α在抗病毒中的作用提供模型动物。[方法]将人IFN-α基因插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过原核显微注射法建立IFN-α转基因小鼠。[结果]通过特异性引物PCR法和South-ern杂交法检测出4只阳性转基因小鼠。分离4个转基因鼠系F1代PCR阳性小鼠血液中的淋巴细胞进行RT-PCR检测,其中3个鼠系为阳性。收集阳性小鼠血清,用ELISA方法和微量板染色测定法检测出3个转基因鼠系均有IFN-α表达。[结论]成功建立了CMV启动子启动的表达人IFN-α基因转基因小鼠,为研究干扰素抗病毒机制及对其他动物进行抗病毒感染基因工程育种研究奠定了基础。     

黄芪多糖和黄芪甲苷诱导RIMVECs分泌IFN-γ的研究

【目的】探明黄芪甲苷和黄芪多糖能否诱导RIMVECs分泌IFN-γ,为黄芪及有效成分的临床应用提供理论和参考依据。【方法】以体外培养的RIMVECs为模型,用ELISA法检测不同浓度的黄芪甲苷和黄芪多糖在不同时间诱导RIMVECs分泌IFN-γ的表达量。【结果】25μg/mL和50μg/mL黄芪甲苷能诱导RIMVECs表达IFN-γ,且随着时间延长表达逐渐升高,24h时达到峰值,具有明显的富集效应;25μg/mL和50μg/mL黄芪多糖也能诱导RIMVECs表达IFN-γ,随着时间延长RIMVECs细胞上清液中IFN-γ表达量逐渐增多,25μg/mL组IFN-γ表达量24h达到峰值;50μg/mL组IFN-γ表达量12h达到峰值,随后表达量降低。【结论】结果提示,黄芪甲苷和黄芪多糖的免疫调节作用可能是通过诱导RIMVECs分泌IFN-γ来实现,为黄芪的临床应用提供了试验依据。     

鸡IL-6、IL-17和IFN-γ实时荧光定量PCR检测方法的建立

[目的]建立针对鸡白介素6（IL-6）、白介素17（IL-17）和γ干扰素（IFN-γ）的实时荧光定量PCR检测方法,为细胞因子的定量检测及病毒致病机制的研究奠定基础.[方法]根据GenBank已发表的鸡IL-6、IL-17、IFN-γ和3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）基因保守序列,设计并合成4对相应的特异性引物,以鸡胚成纤维细胞的cDNA为模板构建重组质粒,对退火温度、引物浓度等SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应条件进行优化,建立各基因的标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性试验.[结果]GAPDH、IL-6、IL-17和IFN-γ的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR扩增效率分别是98.2％、99.2％、102.0％和100.8％,相应的标准误差为0.00666、0.00813、0.00365和0.00458.特异性试验结果显示各基因的溶解曲线均呈单一溶解峰,敏感性试验结果表明各基因的检测下限均为100拷贝,重复性试验结果表明组内变异系数均小于2.00％.[结论]建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR具有敏感性高、重复性好、特异性强等特点,为快速检测和定量鸡源IL-6、IL-17和IFN-γ的表达水平提供了技术平台.