云南烟草丛枝症病害研究Ⅲ细胞的超微病变

 超薄切片观察云南烟草丛枝症病害的病叶组织,并抽提试验材料的总核酸电泳检测,结果表明:病组织中检测到与烟草丛枝症病害相关的低分子量RNA,切片中未观察到病毒粒子,薄壁细胞中发现细胞膜系统的畸变:质膜体(plamalemmasome)和双层膜泡囊(double membranous vesicles).质膜体由细胞质膜或液泡膜伸入空泡形成,直径约1000～2000nm,结构类似于类病毒侵染寄主形成的旁壁体.双层膜泡囊是含纤维状物内含物的泡囊,直径约100～200nm,结构类似于某些病毒侵染寄主形成的细胞质泡囊(cytoplasmic vesicles)和植原体(phytoplasmas),但因其广泛分布于寄主细胞中,不能认为是植原体.文献显示这些病变是类病毒和某些病毒侵染的特征,初步认为云南烟草丛枝症病害可能是病毒病害,发病早期细胞内出现小分子核酸侵染的细胞病变特征,此与莫笑晗等发现病株体内含有大量低分子量RNA可能有密切关系.     

云南烟草丛枝症病害研究 II细胞的超微病变

超薄切片观察云南烟草丛枝症病害的病叶组织,并抽提试验材料的总核酸电泳检测,结果表明：病组织中检测到与烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ,切片中未观察到病毒粒子,薄壁细胞中发现细胞膜系统的畸变：质膜体（ｐｌａｍａｌｅｍｍａｓｏｍｅ）和双层膜泡囊（ｄｏｕｂｌｅｍｅｍｂｒａｎｏｕｓｖｅｓｉｃｌｅｓ）．质膜体由细胞质膜或液泡膜伸入空泡形成,直径约１０００～２０００ｎｍ,结构类似于类病毒侵染寄主形成的旁壁体．双层膜泡囊是含纤维状物内含物的泡囊,直径约１００～２００ｎｍ,结构类似于某些病毒侵染寄主形成的细胞质泡囊（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｖｅｓｉｃｌｅｓ）和植原体（ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａｓ）,但因其广泛分布于寄主细胞中,不能认为是植原体．文献显示这些病变是类病毒和某些病毒侵染的特征,初步认为云南烟草丛枝症病害可能是病毒病害,发病早期细胞内出现小分子核酸侵染的细胞病变特征,此与莫笑晗等发现病株体内含有大量低分子量ＲＮＡ可能有密切关系．     

云南烟草丛枝症病害研究 I病害的症状学及其病程

以云南烟草丛枝症病株为毒源,通过蚜虫传染接种大十字期、猫耳朵期、摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期的烟株,观察症状反应并检测与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ．研究表明：云南烟草丛枝症病害的病程可分为４个阶段：潜育期、过敏反应期、缩顶期和丛枝期,烟株从感染到表现丛枝要经过约１个月;蚜虫接种后约１周,在蚜虫口针刺吸部位开始出现褪绿斑,继而产生强烈的过敏反应,即从褪绿斑中心开始坏死出现蚀点斑,叶片上布满坏死斑纹,有典型的环纹和蚀纹,严重的烟株叶片破裂,细脉坏死;随后进入缩顶期,烟株生长缓慢,叶间距明显缩短,顶部几乎成为一个平面,叶色稍黄,大十字期和猫耳朵期接种烟株缩顶后生长极其缓慢,萎缩成为僵苗,不表现丛枝症状,也不会开花结实;感染约４周后,摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期接种的烟株开始腋芽丛生,生长速度加快,几天后便表现为典型的黄化丛枝症状,叶黄化且变圆,能够开花结实．其症状和文献记载的所有烟草丛枝、丛顶和丛蔟类病害有明显区别,初步认为是１种未见记载的新病害,建议称之为“烟草簇矮病（Ｔｏｂａｃｏｂｕｓｈｙｄｗａｒｆ）”．文中附病程症状图２版．     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅰ病害的症状学及其病程

 以云南烟草丛枝症病株为毒源,通过蚜虫传染接种大十字期、猫耳朵期、摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期的烟株,观察症状反应并检测与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量RNA.研究表明:云南烟草丛枝症病害的病程可分为4个阶段:潜育期、过敏反应期、缩顶期和丛枝期,烟株从感染到表现丛枝要经过约1个月;蚜虫接种后约1周,在蚜虫口针刺吸部位开始出现褪绿斑,继而产生强烈的过敏反应,即从褪绿斑中心开始坏死出现蚀点斑,叶片上布满坏死斑纹,有典型的环纹和蚀纹,严重的烟株叶片破裂,细脉坏死;随后进入缩顶期,烟株生长缓慢,叶间距明显缩短,顶部几乎成为一个平面,叶色稍黄,大十字期和猫耳朵期接种烟株缩顶后生长极其缓慢,萎缩成为僵苗,不表现丛枝症状,也不会开花结实;感染约4周后,摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期接种的烟株开始腋芽丛生,生长速度加快,几天后便表现为典型的黄化丛枝症状,叶黄化且变圆,能够开花结实.其症状和文献记载的所有烟草丛枝、丛顶和丛蔟类病害有明显区别,初步认为是1种未见记载的新病害,建议称之为“烟草簇矮病(Tobaco bushy dwarf)”.文中附病程症状图2版.     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅱ田间发病规律

 系统地调查云南烟草丛枝症病害的田间自然发病情况和介体发生情况,并实验测定烟草品种的抗病性,结果表明:烟草丛枝症病害在病区常年均有发生,最早发病时间在4月下旬,保山市1994,1995和1997年属一般年份,1993,1996和1998年属流行年份,导致病害流行的主要因素是苗期和移栽初期的两次蚜虫迁飞期高峰,以网罩隔离培育无毒烟苗、避开蚜虫迁飞高峰期移栽并同时施药是最有效的防治方法.目前生产上审定推广的品种全为高感品种,测定31个烤烟和145个晒晾烟品种未发现抗病品种.     

云南烟草丛枝症病害研究I田间发病规律

系统地调查云南烟草丛枝症病害的田间自然发病情况和介体发生情况,并实验测定烟草品种的抗病性,结果表明：烟草丛枝症病害在病区常年均有发生,最早发病时间在４月下旬,保山市１９９４,１９９５和１９９７年属一般年份,１９９３,１９９６和１９９８年属流行年份,导致病害流行的主要因素是苗期和移栽初期的两次蚜虫迁飞期高峰,以网罩隔离培育无毒烟苗、避开蚜虫迁飞高峰期移栽并同时施药是最有效的防治方法．目前生产上审定推广的品种全为高感品种,测定３１个烤烟和１４５个晒晾烟品种未发现抗病品种．     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅹ病原研究：植原体问题

 云南烟草丛枝症病害四环素治疗无效,可经汁液摩擦和蚜虫传染,病程表现为潜伏期、过敏反应期、缩顶期和丛枝期等4个阶段,细胞内产生质膜体和细胞质泡囊等膜系统畸形病变,病株总核酸中存在特殊的超稳定低分子量RNA,Nested-PCR在病株总核酸中(引物:R16mR1/R16mF2,R16R2/R16F2)未检测到植原体16sRNA基因。说明云南烟草丛枝症病害和烟草丛枝病是不同的病害,病原不是植原体,该病表现出病毒侵染的特征,可能由病毒或类似于病毒的病原引起。依据病害的症状和侵染特征,建议将"云南烟草丛枝症病害"称呼为"烟草簇矮病(Tobacco bushy dwarf)"。     

白背飞虱传播云南烟草丛枝症研究

 我们在烟草丛枝症病害（Tobacco witches’ broom symptom diseases ）的媒介昆虫研究中首次发现白背飞虱（Sogatella furcifera Horvath）成虫（长翅型）能传播该病,并对其传毒特性进行研究发现：3头带毒白背飞虱成虫便可传毒,每烟株上超过15头带毒白背飞虱传毒率达最大,最短获毒时间为5 min,当获毒时间为24 h传毒率达最大,当接种时间达48 h传毒率达最大。由于云南省多数烟区烟田与稻田混杂,在烟田中存在相当数量的白背飞虱。因此,白背飞虱是烟草丛枝症病害的重要传毒介体之一。     

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅷ 验证与烟草丛枝症病害相关的稳定RNA

来自云南省２２个县市的烟草丛枝症标本均检测到与云南烟草丛枝症病害相关的稳定ＲＮＡ,大小相当于８００ｂｐ左右的ＤＮＡ;病株的根、茎、叶、花和枯叶中含有此ＲＮＡ,种子中未检测到此ＲＮＡ;此ＲＮＡ的最大吸收峰为２６９ｎｍ;能被蛇毒磷酸二酯酶Ｉ消化,不具有类病毒结构特征,推测可能是病毒的基因组分;支持莫笑晗等对此ＲＮＡ的结构推测,即可能是有广泛内部配对、具有类似发叉结构的线性长度为１６１ｋｂ的单链ＲＮＡ．与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ目前发现的超稳定ＲＮＡ．     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅷ验证与烟草丛枝症病害相关的稳定RNA

 来自云南省22个县市的烟草丛枝症标本均检测到与云南烟草丛枝症病害相关的稳定RNA,大小相当于800bp左右的DNA;病株的根、茎、叶、花和枯叶中含有此RNA,种子中未检测到此RNA;此RNA的最大吸收峰为269nm;能被蛇毒磷酸二酯酶I消化,不具有类病毒结构特征,推测可能是病毒的基因组分;支持莫笑晗等对此RNA的结构推测,即可能是有广泛内部配对、具有类似发叉结构的线性长度为1.61kb的单链RNA。与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量RNA目前发现的超稳定RNA。     

湖南省烟草侵染性病害的调查研究

本文报道了湖南省烟草侵染性病害种类、分布及为害情况;分析了病害发生种类因地域,耕作制度、烟草类型而不同;研究了主要病害发生发展规律及防治方法,预测了今后烟草病害发展趋势,提出了防治研究的建议.     

83增抗剂防治烟草病毒病研究进展

1987～1989年在我国8个主产烟省23万亩烟田上应用83增抗剂,小区对比、大田示范试验证实,防治花叶病毒病效果为44.4%～54.8%;促进植株生长,单叶重增加12.18%,平均每亩增产9.14%～11.01%;提高烟碱含量,上等烟比率提高12.11%～13.12%,斤烟均价提高0.22～0.24元。防病、增产、优质的效果创造了每亩增收60.60～123.11元的经济效益。83增抗剂诱导植物抗、耐病性提高,加强了植物病毒生态体系中自然控制因素——品种抗病性的作用。以此为主,兼具控制病原病毒和传播介体的多种功能:体外钝化病毒,抑制病毒初侵染,降低植物体内病毒的扩散速度,影响蚜虫的探食行为,降低蚜传发病率。     

烟稻轮作与烟草病害关系的研究

经４年研究表明：烟稻轮作能有效地控制烟草青枯病的发生，并减轻烟草赤星病和烟草野火病的危害。烟草花叶病、黄瓜花叶病、烟草蚀纹病与烟稻轮作的关系有不明显。     

棉胚珠表皮细胞分化期的超微结构研究

棉胚珠表皮细胞在开花前后的超微结构变化明显。开花前2天,表皮细胞无突起,却可见亮、暗两种类型;开花当天,较暗的亮细胞分化突起,细胞核及核仁随之增大;在开花后第2天,分化的细胞高度液泡化,胞质中的内质网结构趋于复杂,出现环状内质网。     

食用动物肝脏的病理学研究

对取自当前广州市肉品市场供食用的２００例猪肝和１００例牛肝的卫生品质进行了病理学分析，发现所研究的６８５猪肝和７７％牛肝存在着各种各样的病变。病变的种类多达２７种。病变不仅有肝细胞的萎缩和各种变性，水肿，囊肿，出血，坏死和钙化肝组织细菌性污染和寄生虫虫卵附着等，还发现恶性肿瘤以及见于癌前期或癌症的肝细胞病理性核有丝分裂像。     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅳ建立标准毒株

 以蚜虫传染发生云南烟草丛枝症病害的烟株为材料进行组织培养,连续培育3代,以第3代组培烟苗为毒源经蚜虫传染健康烟株,提取毒源和各实验烟株的总核酸进行琼脂糖凝胶电泳.结果表明:第3代组培烟苗为毒源经蚜虫传染的烟株发病表现丛枝症,并检测到与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量RNA.说明与云南烟草丛枝症病害相关的病原能在寄主离体培养组织中长期保存,成功建立云南烟草丛枝症病害的标准毒株.     

烟叶超氧物歧化酶的研究

从烟叶中提取的超氧物歧化酶（ＳＯＤ），经ＰＡＧＥ垂直板电泳后，用氮蓝四唑（ＮＢＴ）法活性染色，并经凝胶薄层扫描（λ＝５９５ｎｍ），结果显示粗酶液有６条同工酶谱带，经纯化后的酶只有一条谱带。此纯酶液置冰箱３６ｈ后，可获得长方形结晶。结晶酶液用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析（１．５ｃｍ×１００ｃｍ）和ＳＤＳ－和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其分子量分别为２４８３０和２８９００。用等电聚焦电泳测得该酶等电点为６．８０。该酶在ｐＨ５～９范围内活性较稳定，在７５℃保温１５ｍｉｎ活性尚保留５４％。此酶对ＫＣＮ、氯仿－乙醇不敏感，但受到ＥＤＴＡ，Ｈ_２Ｏ_２的强烈抑制，表明烟叶中分离纯化得到的ＳＯＤ为酶分子中结合Ｆｅ的Ｆｅ－ＳＯＤ。