基质蛋白第51位氨基酸缺失的水泡性口炎病毒疫苗载体的研究

水泡性口炎由水泡性口炎病毒(VSV)引起,可在全世界范围内对畜牧业造成危害。试验对基质蛋白第51位甲硫氨酸敲除后的重组VSV病毒(VSVAM51)进行了研究,包括病毒致病性及其所激发的体液免疫应答规律。结果表明:相比野生型VSV,VSV△M51对猪的致病性降低,接种野生型VSV的试验猪临床症状评分最高可达4分,而接种VSV△M51病毒动物临床评分不高于2分。VSV△M51可有效地激发抗病毒体液免疫应答,有希望成为理想的疫苗载体。     

水泡性口炎的发病机理与防制

水泡性口炎(VS)是由水泡性口炎病毒(VSV)引起马、牛和猪等动物的一种重要传染病。临床表现为口腔黏膜、乳房和蹄部冠状带皮肤出现水泡和溃疡。水泡性口炎不但能感染动物,而且能够感染人,被国际兽医局(OIE)列为A类传染病。因此,对VSV致病机理的研究有着重要的社会经济和公共卫生意义。从病原、流行病学、病理变化、临床症状等方面对水泡性口炎进行综述。     

动物水泡性口炎病毒的抗原性

动物水泡性口炎病毒(VSV)引起动物水泡性疾病.VSV有两个主要抗原群是核酸蛋白和G蛋白抗原.G蛋白因为能产生中和性抗体被认为是在发动抑制病毒感染方面起主要作用.已经证实VSV 的New Jersey 株中产生独立的中和性单克隆抗体的抗原决定蔟分布在G 蛋白的193～289氨基酸之间.     

水泡性口炎的研究进展

水泡性口炎(Vesicular Stomatitis，VS)是由水泡性口炎病毒(Vesicular Stomatitis virus，VSV)引起马、牛和猪的一种重要的传染病。临床表现为口腔粘膜、乳房和蹄冠部皮肤出现水泡和溃疡。VSV感染牛和猪时。在临床症状上极易与口蹄疫(FMD)、猪水泡病(SVD)、猪水泡疹(VES)混淆。且能够感染人。被国际兽医局(OIE)列为A类传染病。因此．对VSV致病机理和预防的研究有着重要的社会经济和公共卫生意义。从水泡性口炎的病原、流行病学、病理变化、临床症状等对水泡性口炎进行综述。     

鸡突变型和未突变型Mx蛋白体外抗病毒活性研究

【目的】研究鸡Mx蛋白第631位氨基酸变异与抗病性的相关性。【方法】用已经构建成功的中国狼山鸡Mx蛋白基因突变型pcDNA3.0-MMx和未突变型pcDNA3.0-Mx真核表达载体分别转染鸡成纤维（CEF）细胞和鼠成纤维（NIH-3T3）细胞;利用RT-PCR检测突变型MMx基因和未突变型Mx基因的表达,微量细胞病变抑制法测定重组蛋白抗新城疫病毒（NDV）和水泡性口炎病毒（VSV）的效果。【结果】诱变鸡Mx基因的表达重组蛋白可保护CEF细胞在孵育48 h内免受NDV的感染;转染突变型pcDNA3.0-MMx真核表达载体的NIH-3T3细胞在孵育60 h内亦未受到VSV的浸染;而转染未突变型pcDNA3.0-Mx真核表达载体的CEF和NIH-3T3细胞在24 h内均发生了病变。【结论】体外重组突变的Mx蛋白在单细胞水平上具有延缓NDV和VSV感染的能力。     

牛水疱性口炎的流行、诊断和防控措施

正水疱性口炎(VS)又名鼻疮、"烂舌症"、口疮、伪口疮等,是牛、马、猪的一种水疱性疾病,许多野生动物也可感染。牛水疱性口炎是牛的一种病毒性疾病。其重要临床特征为口腔黏膜、乳头皮肤及蹄冠部皮肤出现水泡及糜烂,但很少发生死亡。1病原介绍水疱性口炎病毒属于弹状病毒科水疱病毒属。VS病毒(VSV)有2个血清型:新泽西型(NJ)和印第安纳型(IND)。IND型又可进一步分为印第安纳Ⅰ型(印第安纳株)和印第     

水泡性口炎病毒核蛋白基因在大肠杆菌中的表达和鉴定

根据已经发表的IN型水泡性口炎病毒(VSV)核蛋白(N)基因的序列设计1对特异引物,应用RT-PCR技术扩增编码IN VSV的N基因,将PCR产物按相应的阅读框架克隆到表达载体pET-32a。并将重组质粒转化入大肠杆菌 BL21株,以1．0 mmol·L-1 IPTG在37℃的条件下诱导,N基因得到了高效表达。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳以及用 VSV阳性血清进行Western blotting试验,结果表明所表达的融合蛋白产物分子质量与预期的65．3 ku相符。     

猪α干扰素表达蛋白ab的抗病毒效果研究

[目的]探索猪α干扰素表达蛋白ab的抗病毒效果。[方法]通过测定猪α干扰素(PoIFN-α)表达的融合蛋白ab对接种水泡性口炎病毒(VSV)的牛肾细胞(MDBK)保护作用的效价,来研究其抗病毒效果。通过中和试验,测定保护50%细胞不产生病变所需PoIFN-α表达的融合蛋白ab的稀释度。[结果]PoIFN-α表达的融合蛋白ab具有显著的抗病毒作用,稀释度1∶4.9的2.0μg/ml ab蛋白溶液即可保护50%细胞不产生细胞病变。[结论]猪重组α干扰素具有高活性、纯度高、无毒副作用、无药物残留等特点,其研制与开发对猪生产实践和疾病防治具有重要意义。     

鹅α干扰素基因在COS-7细胞中的瞬时表达及抗病毒功能初探

为了研究鹅α干扰素( goIFN-α)基因的特性和功能,将天府肉鹅的α干扰素基因克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体上,构建重组质粒pcDNA3.1-goIFN-α,脂质体介导将其转入COS-7细胞中;应用间接免疫荧光、酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和免疫印迹(Western-blot)法检测goIFN-α基因在COS-7细胞中的转录和表达情况,并对COS-7细胞表达上清液进行抗病毒活性检测.结果表明:目的蛋白在转染12 h后就可以被检测出,36 h前目的蛋白在上清液中快速增加,之后增加速度变慢;重组质粒能够在COS-7细胞内得到高效表达,表达的蛋白分子质量为38ku,比预测的分子质量(约21 ku)大;间接免疫荧光显示,细胞内出现黄绿色荧光,胞核附近最亮;表达产物经细胞病变抑制法测定,显示出具有明显的抗猪水泡性口炎病毒(VSV)及小鹅瘟病毒(GPV)的活性.     

4个种属Mx蛋白抑制水疱性口炎病毒的研究

[目的]本试验旨在研究4个种属(猪、人、小鼠、牛)Mx蛋白抗水疱性口炎病毒(VSV)的活性,以揭示胞质定位Mx蛋白抗VSV活性的保守性。[方法]设计特异性引物,PCR扩增4个种属Mx蛋白的全长基因,构建真核表达质粒;PK-15细胞过表达重组质粒,Western blot或间接免疫荧光试验(IFA)检测4个种属Mx蛋白在PK-15细胞内的表达及分布;过表达Mx蛋白的PK-15细胞感染VSV,8或16 h后收样,分别用RT-q PCR、Western blot、IFA和噬斑减少试验来分析VSV的复制。[结果]成功克隆并表达了4个种属Mx蛋白的全长基因,且Mx蛋白大小正确;虽然猪Mx1蛋白和小鼠Mx2蛋白以棒状形式分布于细胞质中,而猪Mx2蛋白、人Mx A蛋白和牛Mx1蛋白以颗粒形式弥散分布于细胞质中,但4个种属Mx蛋白均能通过抑制VSV-G mRNA的转录、减少VSV-G蛋白的合成及降低子代病毒的滴度来显著抑制VSV的增殖。[结论]4个种属Mx蛋白都能显著抑制VSV在PK-15细胞中的增殖。     

新城疫病毒HN蛋白的抑瘤机制及其研究进展

新城疫病毒囊膜上较大的纤突样糖蛋白由新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶(HN)基因编码。HN蛋白即血凝素-神经氨酸酶蛋白,它不仅介导病毒吸附于肿瘤细胞,而且与融合蛋白一起帮助病毒侵入肿瘤细胞,其神经氨酸酶活性能水解宿主细胞表面的唾液酸,暴露宿主细胞的生物识别位点。它还能够水解病毒粒子表面糖链末端的唾液酸,防止病毒粒子在宿主表面簇集,并且能够引入新的粘附因子和免疫原性分子,诱导机体免疫系统识别。     

出血性大肠杆菌O157：H7的Tir与stx1／2B融合基因的构建和表达

为了更好防治由出血性大肠杆菌O157：H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗．其中亚单位疫苗具有很大优势。方法：构建表达tir和stxb的融合基因。将tir基因中间295个氨基酸残基（Tir295）与stxB亚基基因72个氨基酸串联。构建pET28a—stx2b—Tir295-stx1b重组质粒,将其转化于BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达,经SDS--PAGE电沫检测,该融合蛋白获得了高效表达。结果：薄层扫描分析表明,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30％左右。结论：由于该融合蛋白由Tir、stx1b和stx2b三部分抗原组成．可刺激机体产生针时转位紧密素受体（Tir）和志贺毒素（stx）的抗体,在EHEC0157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。     

黄鳝nanos3基因克隆鉴定及其组织表达分析

【目的】明确nanos3基因在黄鳝卵巢发育和维持过程中的重要作用,为黄鳝PGCs可视化分子标记、生殖细胞移植及性腺发育分化机制研究打下基础。【方法】通过RACE克隆黄鳝nanos3基因cDNA序列,运用ProtParam、 SOMPA、 SWISS-MODEL、 SignalP、 TMHMM及NetPhos等在线软件进行nanos3蛋白生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR检测nanos3基因在黄鳝不同组织中的表达情况,并以冰冻切片荧光原位杂交进行性腺组织定位。【结果】黄鳝nanos3基因cDNA序列全长1289 bp,包括147 bp的5'非编码区 （5'-UTR）、 531 bp的开放阅读框 （ORF）及611 bp的3'非编码区（3'-UTR）,共编码176个氨基酸残基。黄鳝nanos3蛋白分子量为19.61 kD,理论等电点（pI）为9.07,为碱性蛋白;在黄鳝nanos3氨基酸序列第108~162位处存在2个锌指基序 “CCHC”结构域,无信号肽和跨膜结构域;蛋白二级结构以无规则卷曲的占比最高 （64.20%）,其次是α-螺旋 （占24.43%）,延伸链、 β-转角的占比分别为6.82%和4.55%。黄鳝与大刺鳅、射水鱼、斑马鱼等鱼类的nanos3氨基酸序列相似性分别为67.5%、 57.2%和50.3%,与中国林蛙、粗皮蛙等两栖类动物的相似性分别为39.3%和30.3%,与人类、小鼠等哺乳类动物的相似性分别为33.3%和30.9%。nanos3基因在黄鳝肌肉中不表达,在精巢、肾脏、脾脏、脑、肝脏、肠道、心脏和血液中的相对表达量较低,在卵巢中的相对表达量最高,极显著高于在其他组织中的相对表达量（P<0.01）,呈明显的组织特异性表达模式;冰冻切片荧光原位杂交分析结果显示,黄鳝nanos3基因仅在生殖细胞中表达,支持细胞中未见表达。【结论】黄鳝nanos3基因进化相对保守,主要在卵巢的生殖细胞中表达,且以细胞质中的表达为主,与核遗传信息的传递相关,是黄鳝性腺发育及分化相关的功能基因。     

不同抗性水稻品种幼苗接种稻瘟病菌弱毒菌株后的生化反应

本研究依据寄主—病原物相互关系,对黑龙江主栽水稻品种空育131（含有pi-15（t）和pi-b基因）和对照品种丽江新团黑谷（不合抗性基因）接种弱毒力菌株LBDM-2后进行生化指标的测定,检测过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、多酚氧化酶（PPO）、苯丙氨酸解胺酶（PAL）等保护酶活性和丙二醛（MDA）含量的变化差异,确定出SOD、POD、CAT、PPO和PAL活性可以作为可靠的鉴定其抗性的辅助指标。     

云南省松墨天牛地理分布及危害程度调查

松墨天牛是松材线虫的主要传播媒介昆虫,为了预防松材线虫病,采用路线调查法、查迹调查法和样地调查法调查云南省松墨天牛的地理分布与危害程度。在云南省129个县市区中,尚未发现松墨天牛的县市区13个,占10．1％;有松墨天牛分布的县市区116个,占89．9％。其中轻度危害的县市区85个（65．9％）,中度危害的县市区16个（12．4％）,重度危害的县市区15个（11．6％）;松墨天牛的垂直分布范围为649～3255m,海拔高差2606m;危害的寄主树种有云南松、思茅松、高山松、马尾松和华山松。     

食蟹猴-猪异种体细胞核移植胚胎的构建

[目的]探索食蟹猴—猪异种核移植胚胎的发育能力,为食蟹猴异种核移植胚胎干细胞的构建奠定基础.[方法]以食蟹猴和猪胎儿的耳部成纤维细胞为供体,猪MⅡ期去核卵母细胞为受体,构建异种核移植重构胚,并从核移植融合/激活方式、培养液两个方面进行优化.[结果]70枚食蟹猴—猪异种核移植胚胎中,有49枚分裂（70.0％）,与猪同种核移植胚胎的分裂率（76.6％）无显著差异;使用微卫星引物D15S823对食蟹猴—猪异种核移植胚胎进行遗传学鉴定,均能扩增获得D15S823条带（350 bp）;食蟹猴—猪异种核移植胚胎融合后1h的染色体早熟凝集率（24.2％）显著低于猪同种核移植胚胎（44.7％）和猪孤雌激活胚胎（100.0％）,通过使用无Ca2＋融合液能够显著提高染色体早熟凝集率（48.2％）;在PZM-3、HECM-10和HECM-10＋10％ FBS 3种培养液中,食蟹猴—猪异种核移植胚胎的分裂率无显著差异.[结论]食蟹猴体细胞核能够在猪MⅡ期去核卵母细胞胞质中发生核重塑,并发育到8-细胞阶段.     

44例多发性骨髓瘤实验室指标及Ig类型改变的分析

目的探讨骨髓细胞形态学检查结合血清蛋白电泳、免疫固定电泳、免疫球蛋白定量检查诊断多发性骨髓瘤,并探讨Ig类型改变的原因．方法对44例多发性骨髓瘤患者的骨髓细胞形态学检查、血清蛋白电泳、免疫固定电泳及免疫球蛋白的数据进行统计分析．结果44例MM患者中,骨髓瘤细胞〈10％的有40例（90．9％）,且浆细胞具有较高的异质性;血清蛋白电泳检出M蛋白带的比例为88．6％;免疫固定电泳检出率为100％,免疫分型IgG占50％,IgA占20．5％,IgM占2．2％,轻链型占27．3％;免疫球蛋白定量显示同型的免疫球蛋白含量显著升高,但轻链型的各免疫球蛋白含量却正常或降低．其中1例MM患者骨髓移植后出现Ig类型转换．结论综合各实验室指标,可以最大程度减少多发性骨髓瘤的漏诊、误诊,Ig类型的改变对多发性骨髓瘤的临床诊断及治疗有再要意义．     

豆粕替代鱼粉对日本黄姑鱼生长、饲料利用及体成分影响的研究

开展了为期63d的饲养试验以评价豆粕替代鱼粉对日本黄姑鱼生长、体组成和饲料利用率的影响。配制了3种等氮饲料,以豆粕蛋白分别替代0％、20％和40％的鱼粉蛋白,饲养初始重大约5．67～5．77g／尾的幼鱼。结果显示,各组间的增重率和特定生长率值没有显著差异性存在（P〉0．05）。然而添加豆粕的D2和D3组的摄食率和FCR值显著地高于鱼粉组,PER的值显著地低于鱼粉组（P〈0．05）。日本黄姑鱼的内脏比、肠脂比和丰满度的值在各组之间无显著性差异存在（P〉0．05）,但高水平豆粕添加组（D3）的肝体比最低,且显著地低于D2组（P〈0．05）。不同饲料处理对日本黄姑鱼体成分和背肌组织成分组成没有显著性影响（P〉0．05）。总之,在本实验条件下,豆粕可以替代40％的饲料鱼粉蛋白而没有引起日本黄姑鱼生长的下降。