改良CTAB法提取濒危药用植物绶草基因组DNA

以绶草的根、茎、叶和花为材料,采用改良CTAB法提取绶草基因组DNA,经紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳对所提DNA的质量和纯度进行比较.结果表明,改良CTAB法(2.5 mmol/L NaCI、30 mmol/L EDTA、100 mmo/LTris-HC1、2%CTAB、2%β-巯基乙醇、2%PVP-40)适合绶草根的基因组DNA提取,几乎没有蛋白质、酚及色素等杂质的污染,紫外吸收检测DNA的OD260nm/OD280nm为1.83,DNA浓度为8.819 μg/μl,产率为1102.4μg/g;提取的茎、叶DNA有少量杂质;花DNA的提取效果最差,含有较多的蛋白质、酚及色素等杂质.加入2%PVP-40的CTAB提取液对绶草DNA的提取效果最好.     

四倍体菘蓝基因组DNA提取方法的比较

[目的]探讨四倍体菘蓝组培苗高质量DNA的提取方法。[方法]分别采用CTAB法1、CTAB法2、SDS法1、SDS法2和碱裂解法对四倍体菘蓝组培苗DNA进行提取试验,通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳,比较了5种DNA提取方法对四倍体菘蓝组培苗的提取效果。[结果]CTAB法2提取DNA的OD260/OD230值为2.311,OD260/OD280值为1.774,DNA纯度最大,浓度最大,提取率最高,PCR扩增条带清晰,重复性好,所得DNA的质量最好。[结论]CTAB法2是提取四倍体菘蓝组培苗基因组DNA最有效的方法。     

适合山杏AFLP分析的DNA提取方法研究

以山杏幼叶为材料,比较了4种DNA提取方法。结果表明,处理为100mmol/LTris2HCl（pH8.0）、20mmol/LEDTA（pH8.0）、1.4mmol/LNaCl、2%CTA、10mmol/LNa2S2O5、2%β-巯基乙醇、1%PVP-40、1%Vc的CTAB4方法提取的基因组总DNA质量较高,DNA溶液无色透明,紫外分光光度计测得OD260/OD280为1.8～2.0,无降解现象,RNA去除干净,经AFLP分析条带清晰,多态性好,说明此法提取的DNA能够适应AFLP分析的要求。     

风信子DNA不同提取方法的效果比较

采用简易CTAB法、改良CTAB法、SDS-CTAB法、高盐法和CTAB-硅珠法等5种方法对风信子花蕾、叶片和鳞片基因组DNA进行提取.比较DNA纯度、电泳、得率等指标,结果表明:CTAB-硅珠法没有获得DNA,其他方法均可提出DNA;在纯度方面,简易CTAB法＞SDS-CTAB法＞改良CTAB法＞高盐法;在得率方面,简易CTAB法＞改良CTAB法＞高盐法＞SDS-CTAB法.简易CTAB法提取的DNA纯度较高,OD260/OD280为2.01,OD260/OD230为2.33,浓度为406.8ng·μL-1,得率为175.95ng· μL-1.花蕾、叶片适合风信子基因组DNA的提取.     

北冬虫夏草DNA提取方法的比较

运用CTAB法、CTAB改良法1、CTAB改良法2、氯化苄法、裂解法、改良SDS法、改良尿素法等7种方法提取北冬虫夏草基因组DNA,发现CTAB改良法2(提纯时加入低浓度乙醇)提取的DNA的OD260/OD280都在1.9以上,能获得清晰的PCR扩增图谱,能被HindⅢ酶切消化.     

雷公藤叶片基因组DNA不同提取方法比较

[目的]比较雷公藤叶片中基因组DNA的提取方法。[方法]采用常规CTAB法、改良CTAB法、常规SDS法、高盐低pH值法和一步法分别提取雷公藤叶片基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法测定样品OD260与OD280的比值以及RAPD扩增结果,判断所得DNA样品的纯度,并根据OD260值计算不同提取方法的DNA得率。[结果]改良CTAB法提取效果最佳,所提DNA的平均得率为219.3μg/g,OD260/OD280比值在1.869～1.903,用于RAPD-PCR均有较好的扩增结果。[结论]改良CTAB法是雷公藤叶片基因组DNA提取的最佳方法。     

北冬虫夏草DNA提取方法的比较

运用CTAB法、CTAB改良法1、CTAB改良法2、氯化苄法、裂解法、改良SDS法、改良尿素法等7种方法提取北冬虫夏草基因组DNA,发现CTAB改良法2(提纯时加入低浓度乙醇)提取的DNA的OD260/OD280都在1.9以上,能获得清晰的PCR扩增图谱,能被HindⅢ酶切消化.     

菠萝DNA提取方法的研究

采用石英沙代替液氮,用SDS法和CTAB法提取菠萝的DNA。结果表明,SDS法所提取DNA的平均OD值为1.704,提取率为2.098μg/g;CTAB法所提取DNA的平均OD值为1.498,提取率为1.412μg/g。SDS法和CTAB法所提取的DNA都可用作RAPD分析。     

核桃芽总RNA提取及RT-PCR

为了从核桃芽体内提取高质量的RNA,以便进行核桃成花基因克隆研究,针对核桃芽体内富含多酚等次生代谢物的特点,在总结他人研究基础上对SDS法和CTAB法及试剂盒提取法进行了改良和比较。凝胶电泳检测表明,Spectrum Plant Total RNA试剂盒提取法及以pH 9.0硼砂为缓冲液的改良CTAB法和改良SDS法所提取RNA的28SrRNA和18SrRNA条带清晰,且28SrRNA的亮度约是18SrRNA的2倍,说明所提RNA完整性较好;紫外光谱分析显示,3种方法的OD260/OD280分别为1.99、1.96、1.77,OD260/OD230均大于2.0,RNA产率依次为360、180和75 μg/(g?FW)。综合检测结果认为,改良CTAB法和改良SDS法所提RNA的完整性和纯度均能满足基因克隆等的研究,是一种适合核桃芽体内RNA提取的经济而有效的方法。     

甜菜总DNA不同提取方法的研究

采用CTAB法、SDS法、改进CTAB法和改进SDS法提取甜菜总DNA,并对提取得到的DNA进行质量鉴定和PCR扩增效果检测.结果表明：用改进的CTAB法提取的甜菜总DNA OD260/OD280在1.8左右,DNA纯度好,产率高,CTAB法和改进的SDS法产率次之,SDS法最低.同时对改进的CTAB法的提取条件进行优化,即用5.0 mL细胞提取液,0.8 mL无水乙醇, 0.6倍体积的异丙醇,可从1.0 g甜菜叶片中提取到高质量高纯度的DNA 764 μg/g.     

适于AFLP分析的柿树DNA提取方法研究

对柿基因组DNA的提取方法进行了研究,结果表明,采用提取液中含100mmol/LTris-HCl(pH8 0),20mmol/LEDTA,1 4mol/LNaCl,2%CTAB,1%PVP-40,10mmol/LNa2S2O5及100mmol/Lβ—巯基乙醇(用前加入)的改良CTAB法,可有效去除单宁、酚类、色素等,提取的柿叶片DNA质量和纯度较高,可用于AFLP分析。     

成熟石榴叶片DNA提取方法研究

[目的]为了从成熟石榴叶片中提取高质量、高产量的基因组DNA。[方法]针对成熟石榴叶片含多糖、多酚的特性,用改良CTABI及改良CTABⅡ法分别提取2个品种（墨石榴和青皮软籽石榴）的成熟石榴鲜叶、冻叶、干叶基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、酶切鉴定。【结果]改良CrABⅡ法提取的基因组DNA电泳时点样孔干净,无拖带,OD260nm／OD280nm为1．7—1．9,酶切完全,其质量、产量都高于改良CTABI法。[结论]改良CTABⅡ法是提取成熟石榴叶片中高质量、高产量基因组DNA的有效方法。     

火棘基因组DNA的提取和RAPD稳定的反应体系的建立

[目的]研究提取火棘基因组DNA的最佳方法,并研究适合火棘的稳定的RAPD反应体系,为以后开展火棘的遗传多样性研究、物种资源研究和亲缘关系鉴定等提供重要的参考。[方法]采用改进的CTAB法,成功地提取了火棘基因组DNA,并对RAPD反应体系中的Taxi酶、MgCl2、dNTPs和引物4个因素进行4因素4水平的正交试验设计,从中筛选出最佳的优化条件。[结果]电泳结果显示,DNA无降解,杂质少。DNA浓度较高约为500ng／μl。并以此DNA为模板,成功地建立了RAPD稳定的反应体系：总体积25山,包括25ng的DNA,1×buffer,2．3mmol／LMgCl2,1．0μmol／L引物,O．15mmol／LdNTPs和2．0U的TaqDNA聚合酶。RAPD扩增程序为：先在94℃下变性4min,然后在94℃下变性40s,36．8℃下复性50s,72℃下延伸70s,反应40个循环,最后72℃延伸4min。[结论]改进的CTAB法能成功地提取火棘基因组DNA,利用正交试验设计所建立的RAPD反应体系,可以获得较为稳定、可靠的扩增产物。该体系可应用于火棘遗传多样性、亲缘关系等方面的研究中,为进一步开展火棘分子生物学研究奠定了基础。     

一种适于甜菜RAPD分析的DNA快速提取方法

实验用CTAB法、SDS法Ⅰ及SDS法Ⅱ提取甜菜叶片DNA.利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测所得DNA的浓度和纯度.实验表明,CTAB法所提取甜菜总DNA的纯度高,能满足RAPD扩增,条带清晰、稳定.CTAB法是作为甜菜RAPD分子标记研究的最佳DNA提取方案.     

葡萄基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化

[目的]建立适合该地区部分葡萄品种RAPD扩增反应体系.[方法]采用阿克苏地区部分葡萄品种(系)为试材,采用改良的CTAB法提取葡萄基因组DNA,对影响葡萄RAPD反应的Mg2+、Taq酶、dNTPs、引物、模板DNA浓度进行优化.[结果]其最佳反应体系为:模板DNA 100 ng,dNTPs 0.1 mmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,引物0.3 μmol/L,Taq酶1.5 U,反应体系总体积为20 μL.[结论]改良的CTAB法具有步骤少、费用低、效率高等特点,比较适用于葡萄基因组 DNA的提取.优化后的体系,扩增产物稳定,条带清晰,重复性好.     

兜兰属植物ISSR-PCR反应体系的优化

以兜兰为试材,用改进的CTAB法提取总DNA,采用正交试验设计,分析Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度和Taq DNA聚合酶用量对ISSR-PCR扩增的影响,并通过梯度PCR确定最佳退火温度,最终建立兜兰ISSR扩增反应体系。最佳反应体系为:25μL体系中,含10×PCR buffer 2.5μL、1.5mmol/L Mg2+、0.15mmol/L dNTP、0.6μmol/L引物、1.0 UTaq酶和40 ng模板DNA。反应程序为:94℃5 min,94℃30 s,56.2℃45 s,72℃1 min,共40个循环;72℃延伸7 min。     

吴茱萸ISSR-PCR反应体系优化

[目的]建立吴茱萸ISSR-PCR最佳反应体系。[方法]采用改良的CTAB法提取吴茱萸基因组DNA,研究模板DNA、dNTPs、Mg^2＋、引物（U834）、Taq DNA聚合酶的浓度对ISSR-PCR扩增结果的影响。[结果]20μl反应体系中含2μl 10×PCR buffer,0.15 mmol/LdNTPs,1.6 mmol/L Mg^2＋,0.4 mmol/L引物,20 ng模板DNA,1.2 U Taq DNA聚合酶。[结论]为研究吴茱萸种质资源遗传多样性和分子鉴定奠定了技术基础。     

甘蔗鞭黑粉菌ISSR-PCR反应体系的优化

以甘蔗鞭黑粉菌交配型分离物为试验材料,采用CTAB法提取基因组DNA,并对影响甘蔗鞭黑粉菌ISSR-PCR反应体系中的一些重要参数进行摸索和优化试验,建立起适合甘蔗鞭黑粉菌基因组DNA的ISSR-PCR反应体系。优化的反应体系为:在25μL体系中,rTaq DNA聚合酶1.5 U、Mg2+浓度为2.0 mmol/L、dNTP浓度为0.2 mmol/L、引物浓度为0.2μmol/L、DNA模板10～20 ng、10×PCR buffer 1μL、用重蒸水补足25μL。     

珙桐基因组DNA的提取及ISSR-PCR体系的优化

采用改良的CTAB法提取珙桐基因组DNA,并采用正交试验设计方法优化其ISSR-PCR反应体系。结果表明：改良CTAB法提取基因组DNA的质量符合ISSR-PCR扩增反应的要求。最佳反应体系为：20μL反应液中含有2.0μL10×buffer、2.75 mmol/L Mg^2＋、0.125 mmol/L dNTPs、0.7μmol/L引物、0.75 UTaq酶和40 ng模板;PCR反应参数为：94℃5 min;94℃30 s,53.2℃45 s,72℃1 min,共40个循环;72℃7 min。     

适用于川芎的ISSR-PCR反应体系的建立及优化

[目的]建立和优化适合川芎的ISSR-PCR反应体系。[方法]以川芎叶片为材料,利用改良CTAB法提取了叶片基因组DNA,利用单因素试验分析了DNA模板、Mg2＋、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶的浓度对ISSR-PCR反应的影响,对适合川芎的ISSR-PCR反应条件进行了优化。[结果]适合川芎的ISSR-PCR反应体系为25.0μl,其中含2.5μl 10×TaqDNA聚合酶缓冲液、2.1 mmol/LMgC l2、300μmol/L dNTP、0.4μmol/L引物、1.0 UTaqDNA聚合酶和20～40 ng模板DNA。[结论]为进一步对全国17个不同分布区的川芎资源进行遗传多样性研究奠定了基础。