小菊悬浮细胞辐射育种初步研究Ⅰ.基因型、外植体和诱导愈伤组织培养基的选择

以小菊七月红、金莲、七月蜂黄、矮红、盏黄5个品种的叶片为外植体,用MS+2.0 mg@L-1 2,4-D+0.2 mg@L-1 6-BA诱导愈伤组织培养基和MS+2.0 mg@L-1 6-BA+0.1 mg@L-1 NAA分化培养基,选出分化能力较强的品种七月红.再以七月红的叶片上部、叶片下部、叶柄、茎段为外植体,在不同培养基(B5、MS)上诱导胚性愈伤组织,发现茎段最易诱导出胚性愈伤组织,培养基以B5添加0.5 mg@L-1 2,4-D+0.2 mg@L-1 6-BA,MS添加1.0 mg@L-1 2,4-D+0.2 mg@L-1 6-BA效果较好;在添加2.0 mg@L-1 6-BA和0.1 mg@L-1 NAA的分化培养基(B5、MS)上,茎段再生能力较理想.     

高秆野生稻(Oryza alta L.)叶片组织培养中通过胚状体获得再生植株

高秆野生稻叶片可诱导出胚性和非胚性2种愈伤组织。胚性愈伤组织在合适的分化培养基上可不断形成胚状体,进而大量获得再生植株,再生植株以绿苗为主,未见绿白嵌合苗。源于不同脱分化培养基的胚性愈伤组织具有相似的胚状体形成和植株再生能力。诱导胚性愈伤组织以N6培养基添加NAA1 mg/L、2,4-D2 mg/L和ZT0.5 mg/L效果最好,形成胚状体并分化植株以MS培养基添加NAA2 mg/L和IAA0.5 mg/L为佳。     

扎米叶叶片愈伤组织与胚状体诱导及其分化研究

以扎米叶叶片为外植体,进行愈伤组织及胚状体诱导,并探索扎米叶离体培养分化途径。愈伤组织诱导培养基为MS+NAA0.2mg/L+6-BA0.4mg/L,胚状体诱导培养基为MS+2,4-D0.5mg/L+6-BA0.5mg/L。试验结果表明,离体培养中3种分化途径,即先芽后根、先根后芽、根芽同时发生均在扎米叶的组织培养中发现。     

川芎的组织培养技术研究

探索川芎的不同组培条件,优化其诱导和分化培养基。以川芎根、茎段和叶片作外植体进行组织培养,获得了大量的组培苗,建立了相应的植株再生系统。川芎根诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 1.2 mg/L;茎段及叶片诱导愈伤组织的最佳培养基均为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L;根愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+6-BA 2.2 mg/L+IAA 0.3 mg/L;茎段及叶片愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+KT 2.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L。根外植体在愈伤组织、分化不定芽和生根方面的诱导率分别为84%、86%和87%;茎段和叶片愈伤组织的诱导率达到92%和96%,其不定芽分化率为98%,生根率为93%。经炼苗后,获得的组培苗的移栽成活率达98%。提出了优化激素搭配的培养基,得到了高效的诱导率、分化率和生根率。     

钙果愈伤组织诱导和植株再生的研究

对钙果愈伤组织的诱导及植株再生的研究结果表明,在MS KT0.3 mg/L NAA0.5 mg/L的培养基中,叶片愈伤组织诱导率达到98.7%;叶片比茎段更适宜作为诱导愈伤组织的外植体,其诱导率比茎段为外植体时高12.7%,而且形成的愈伤组织致密、色泽正常、表面突起均一;愈伤组织分化为芽时,MS 6-BA0.1 mg/L IAA1.5 mg/L培养基的效果最好,分化率达到96%,平均芽数为3.38;不定芽在生根培养基1/2MS IAA0.5 mg/L上,生根率达到70%,平均根长为4.03 cm,平均根数达到5.90。移栽时选用腐殖土为基质,小苗成活率达88%。     

雪菊的组织培养研究

以雪菊带芽茎段、茎尖、叶片为外植体以MS为培养基添加不同浓度6BA和NAA进行组织培养实验,结果表明适合带芽茎段愈伤组织诱导的培养基为MS＋6BA1.0mg/L＋XAA0.3mg/L;适合茎尖愈伤组织诱导的培养基为MS＋6BA1.0mg/L＋XAA0.1mg/L;适合叶片愈伤组织诱导的培养基为MS＋6BA3.0mg/L＋NAA0.3mg/L,适合雪菊愈伤组织增殖和不定芽诱导的培养基为MS＋6BA2.0mg/L＋NAA0.3mg/L;适合雪菊试管苗生根的培养基为1/2MS＋6BA0.3mg/L＋XAA0.03mg/L,蔗糖减半,以雪菊无菌苗的带芽茎段、茎尖和叶片为外植体成功地诱导出了愈伤组织,其中带芽茎段愈伤组织诱导率最高时间最短效果最好茎尖次之叶片最差.     

绿萝组织培养与快繁技术

[目的]研究绿萝组培快繁技术要点,为绿萝再生体系建立和工厂化生产提供技术支持.[方法]以绿萝叶片和无节茎段为外植体,以MS为基本培养基,探讨不同浓度的激素组合(1.0~3.0 mg/L 6-BA、0.1~0.3 mg/L NAA、0.1~0.3mg/L IBA)对愈伤组织诱导及其分化、不定芽诱导、生根培养等的影响.[结果]两种外植体均能产生愈伤组织,但茎段产生愈伤组织较快,产生不定芽也快.叶片诱导愈伤组织的最适培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L,愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L.茎段诱导愈伤组织及其分化的最适培养基均为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2 mg/L,最适生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L.[结论]绿萝叶片和茎段可作为愈伤组织培养的较好外植体,茎段培养效果优于叶片.     

绿玉菊离体培养与快速繁殖

用绿玉菊叶片、不带腋芽茎段、带腋芽茎段和茎尖为外植体进行离体培养研究,分析了影响愈伤组织形成的因素及分化困难的原因.研究结果表明:在愈伤组织诱导时,不带腋芽茎段较嫩叶易产生愈伤组织,是首选外植体;6-BA1. 0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1的激素配比对茎段愈伤组织诱导有利,诱导率高达100%;在MS基本培养基中,pH值为5.4较适宜愈伤组织的分化,且6-BA3.0mg·L-1+NAA0.01mg·L-1对愈伤组织分化不定芽的效果较好,分化不定芽均数达11.10个.茎尖及带腋芽茎段在MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.01mg·L-1的培养基上,能直接诱导出大量生长健壮的丛生芽,生根在MS+NAA0.05mg·L-1的培养基上进行,生根率高达100%,根多而壮,植株长势好.     

攸县油茶胚状体发生及其组织学观察

[目的]研究以攸县油茶(Camellia yuhsienensis Hu)成熟子叶为外植体的胚状体发生情况。[方法]以子叶为外植体,接种于MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT培养基上,诱导胚性愈伤组织。胚性愈伤组织块转接至以MS为基本培养基,添加不同浓度6-BA和NAA的激素组合的培养基上诱导产生胚状体。取不同发育阶段的组织块制作石蜡切片,进行组织学观察。[结果]成熟子叶块接种于诱导培养基MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT,15d左右开始出现胚性愈伤组织。胚性愈伤组织转接至培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA时胚状体诱导率最高,为87.78%;无激素培养基也能诱导胚性愈伤组织产生胚状体,但诱导率极低,仅为6.67%。组织学观察表明,胚性细胞由愈伤组织表面及其内部邻近的若干细胞分化而来,经过球形胚、心形胚、子叶形胚等不同发育阶段直至成熟胚状体。[结论]诱导胚性愈伤组织分化为胚状体的最佳培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA。     

菊花叶片离体高效再生体系的建立

本文报道了以菊花叶片为外植体，诱导植株再生，建立高效植株再生体系。获得诱导愈伤组织、芽和根的最佳培养基。在有6-BA、NAA的MS培养基上获得较高的愈伤组织诱导率，在有2，4-D的培养基上其愈伤组织诱导率很低。带有愈伤组织的外植体转移到有6-BA、NAA的MS培养基上催化芽的产生，并筛选出能直接诱导芽再生的培养基(MS 6-BA(3mg／L) NAA(1mg／L))。AgNO3可明显提高芽的再生率。茎段在1／2MS和有IBA或NAA的1／2MS培养基上诱导生根。生根的小苗在温室里生长良好。     

朝鲜蓟外植体诱导研究

[目的]筛选诱导朝鲜蓟愈伤组织的最佳培养基和培养条件。[方法]用朝鲜蓟的种子、根、叶柄、第三展开叶、第二展开叶、第一展开叶、心叶为外植体,以MS培养基为基本培养基,研究不同激素种类、不同浓度组合的4种培养基对朝鲜蓟愈伤组织的诱导及分化的影响以及不同外植体形成愈伤组织的能力。[结果]按朝鲜蓟愈伤组织诱导率大小,4种培养基组合的排序为:MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L>MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L>MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L>MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 2.5mg/L;外植体的排序为:第一展开叶>心叶>第二展开叶>叶柄>第三展开叶>根>种子。综合分析表明,诱导朝鲜蓟愈伤组织的最佳条件为:以第一展开叶和心叶为外植体,在MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L培养基上,诱导率可达90.5%。[结论]该研究为朝鲜蓟的组织培养和快速繁殖提供技术依据。     

高山红景天叶片愈伤组织诱导与植株再生

以高山红景天叶片作为外植体,研究了影响愈伤组织诱导、芽增殖、生根的主要因素。结果表明:高山红景天叶片切块诱导愈伤组织的最佳培养基为MS 6-BA 2mg/L NAA0.5mg/L,诱导率达88.33%;高山红景天叶片切块经诱导可产生3种色泽的愈伤组织,其中只有绿色愈伤组织诱芽容易,绿色愈伤组织在附加1mg/L6-BA 0.1mg/LNAA的MS培养基中有利于芽的分化和增殖,培养7周左右,平均每个外植体分化形成的再生小植株数达到21.33个;增殖苗转入1/2MS培养基中生根率高达100%。     

青钱柳愈伤组织培养条件研究的优化

本试验研究了青钱柳愈伤组织培养中0．1％升汞溶液的最佳消毒时间、最佳外植体选择和最适基本培养基。结果表明：以叶片做为外植体,0．1％升汞溶液的消毒时间应掌握在3～4min之内,以茎段做外植体,消毒时间应掌握在14min左右。从愈伤组织诱导率上看,以当年生幼嫩茎段做外植体诱导效果更佳。MS和改良后的MS在特定的激素配比下均可诱导出健康的愈伤组织,以改良MS培养基＋2．0mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA愈伤组织诱导率最高达83．33％,更适合青钱柳茎段的培养。     

红树莓海尔特兹初代培养中防止外植体褐化的研究

以红树莓海尔特兹(Heritage)的健壮新梢为材料,研究了不同外植体类型、0.1%HgCl2溶液消毒时间、6-BA浓度、防褐化剂、暗培养时间对组织培养中外植体褐化的影响,探讨防止初代培养中外植体褐化的最佳方法。结果表明:以带芽茎段为外植体,用0.1%HgCl2灭菌处理300 s,在MS+6-BA 0.50～0.75 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA 0.2 mg/L培养基中,添加1.5 g/L VC,暗处理5 d,对防止外植体褐化效果最佳。     

不同激素配比对茶树苗组织培养的影响

利用茶树苗的叶片、茎段、茎尖等外植体为材料,探讨不同激素配比对叶片、茎段产生愈伤组织,以及对茎尖产生丛生芽的影响。结果表明:叶片、茎段都能产生愈伤组织,但茎段的愈伤组织诱导率较高,叶片的愈伤组织诱导率较低。叶片、茎段愈伤组织培养的最适培养基是MS+2,4-D(2mg/L)+6-BA(0.4mg/L)。     

西南桦组织培养研究

对西南桦组培外植体和培养基的选取、组培方法的筛选进行了研究,并培育出了西南桦的组培植株。在此基础上,分析了西南桦组织培养过程中愈伤组织的诱导和胚状体形成过程,并对其影响因子进行了分析：认为春、秋两季的材料最易产生愈伤组织;6BA／NAA的比值越大,分化出的不定芽就越多;黑暗和光照条件下均可从胚性愈伤组织中诱导出胚状体;含5mg/LABA和20g／L蔗糖的MS培养基最适于诱导西南桦体细胞胚分化。     

地黄愈伤组织诱导条件的研究

为寻求诱导地黄愈伤组织的最佳培养条件和激素配比,研究了地黄不同外植体、激素浓度及其组合、培养基种类等条件下暗培养对地黄愈伤组织诱导的影响。结果表明:以地黄叶片、叶柄、茎段作为外植体在MS+1.0~1.5 mg/LNAA条件下诱导率均能达到100%,其中叶片诱导的愈伤生长势较好;单独使用NAA和2,4-D均能高频率诱导出愈伤,加入0.5 mg/L6-BA后明显提高生长速度;MS、LS培养基诱导率高,但B5培养基中愈伤生长势较好。     

银杏的药用价值及组织培养研究

从银杏的果实、叶、种皮、种仁及木材等方面论述了其药用价值,并概述了银杏茎段培养、配子体培养、胚培养、愈伤组织诱导以及银杏组织培养中抑制褐化问题等方面的进展。愈伤组织培养的基本培养基为SH基本培养基中加2,4-D2mg/L,6-BA1mg/L和NAA0.5mg/L以及苹果汁10%以及在1.0kV/cm强度的高压静电和Cu2 条件下有利于愈伤组织生长。改良MS培养基和多效唑可以促进腋芽萌动和分化;MS BA2mg/L NAA0.5mg/L的培养基、蜂王浆和椰子乳汁对诱导银杏胚状体有很大促进作用。0.1%植酸(肌醇六磷酸酯)、5.0mg/L抗坏血酸或2000mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP有明显抑制褐变的作用。