利用RAPD-PCR与ISSR-PCR标记技术分析长江口刀鲚的群体遗传结构

利用RAPD-PCR及ISSR-PCR两种分子标记技术对长江出海口两年3个群体的52条刀鲚（Goiliaectenes）进行群体遗传结构的分析。在3个群体中，利用RAPD-PCR标记技术，15个10bp随机引物共检测到110条带，多态性为0．490～0．657，Shannon多样性指数为18．63～22．38，Nei平均遗传距离为0．1195～0．1454；而利用11个ISSR引物所获得的相应结果分别为67、0．576～0．682、11．56～13．66以及0．117～0．147。相关性分析表明这两种技术所获得的上述数据呈正相关（r=0．95，P〈0．05）。AMOVA结果显示，3个群体按采集时间划分成的两年之间的遗传变异不超过总变异的1．1％，同一年内群体间的遗传变异也分别只占总变异的6．99％（RAPD）和2．75％（ISSR-PCR），群体内各个体之间的遗传变异占总变异的96％（P〈0．0001），说明两年内所采集的3个群体之间基本上没有产生遗传分化。基于样品之间的Nei遗传距离所构建的Neighborjohing聚类图也清楚地显示出没有按采样的时间产生群体的遗传分化。对各样品之间的Nei遗传距离及Neighbor-joining聚类图分别经Mantel检测及支序分析，发现ISSR-PCR技术所获得的结果与RAPD-PCR技术的结果不存在明显的正相关，但ISSR-PCR标记技术具有在待测样品中能检测到高多态性等优点。     

长江口日本鳗鲡群体遗传多样性RAPD初步分析

对2005年采集自长江口地区4个采样点、5批、共10尾性成熟前成鳗、82尾玻璃鳗的日本鳗鲡样本的遗传多样性进行了RAPD分析。在51条随机引物中筛选出具有稳定扩增、条带清晰的多态性引物16条，16条引物共检测到132个位点，其中多态位点114个（86．36％）。五个采样群体各自的平均杂合度（Hc）在0．2053～0．3150之间，平均基因多样性指数（Ho）在0．2974～0.4526之间；采样群体两两间的遗传分化指数几，在0．0508～0．1524之间。群体内遗传变异和群体间遗传变异对群体总遗传变异的贡献率分别为79．18％和20．82％；Nei的遗传距离在0．0593～0．1425之间；在玻璃鳗采样群体间未发现遗传差异同采样地点及月份有何显著关系，显示它们可能同属一个大混合群体。而遗传距离、遗传分化指数及NJ树分析结果一致表明：成鳗和玻璃鳗之间可能存在相当的遗传距离和遗传分化。     

长江口日本鳗鲡群体遗传多样性RAPD初步分析

对2005年采集自长江口地区4个采样点、5批、共10尾性成熟前成鳗、82尾玻璃鳗的日本鳗鲡样本的遗传多样性进行了RAPD分析。在51条随机引物中筛选出具有稳定扩增、条带清晰的多态性引物16条，16条引物共检测到132个位点，其中多态位点114个（86．36％）。五个采样群体各自的平均杂合度（Hc）在0．2053～0．3150之间，平均基因多样性指数（Ho）在0．2974～0.4526之间；采样群体两两间的遗传分化指数几，在0．0508～0．1524之间。群体内遗传变异和群体间遗传变异对群体总遗传变异的贡献率分别为79．18％和20．82％；Nei的遗传距离在0．0593～0．1425之间；在玻璃鳗采样群体间未发现遗传差异同采样地点及月份有何显著关系，显示它们可能同属一个大混合群体。而遗传距离、遗传分化指数及NJ树分析结果一致表明：成鳗和玻璃鳗之间可能存在相当的遗传距离和遗传分化。     

太湖日本沼虾的遗传多样性分析

利用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对太湖湖区不同水域（无锡、宜兴、苏州及湖州水域）野生日本沼虾群体进行基因组DNA的遗传多样性分析。在事先优化的条件下，试验从选用的50个随机引物中筛选出16个有效引物，共检测到117个清晰稳定的位点，大小为200bp～2000bp，其中92个位点具有多态性。四个群体的多态位点比例分别为49．57％、60．68％、53．85％、57．26％，杂合度为0．2077～0．2163，Shannon信息指数为0．2967-0．3053，群体间遗传分化指数Gst值为0．1644-0．2002。AMOVA分析结果显示，群体的遗传变异有16．67％是由群体间遗传变异引起的，显著性检验表明群体间遗传变异对总遗传变异影响显著。遗传距离显示四个群体有一定遗传分化，其中苏州和宜兴群体间遗传距离最大（0．1481），无锡与宜兴群体间遗传距离最小（0．1141）。利用UPGMA进行聚类分析表明，无锡与宜兴群体首先聚在一起，湖州与苏州群体随后聚在一起，再与无锡、宜兴群体聚在一起。     

太湖日本沼虾的遗传多样性分析

利用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对太湖湖区不同水域（无锡、宜兴、苏州及湖州水域）野生日本沼虾群体进行基因组DNA的遗传多样性分析。在事先优化的条件下，试验从选用的50个随机引物中筛选出16个有效引物，共检测到117个清晰稳定的位点，大小为200bp～2000bp，其中92个位点具有多态性。四个群体的多态位点比例分别为49．57％、60．68％、53．85％、57．26％，杂合度为0．2077～0．2163，Shannon信息指数为0．2967-0．3053，群体间遗传分化指数Gst值为0．1644-0．2002。AMOVA分析结果显示，群体的遗传变异有16．67％是由群体间遗传变异引起的，显著性检验表明群体间遗传变异对总遗传变异影响显著。遗传距离显示四个群体有一定遗传分化，其中苏州和宜兴群体间遗传距离最大（0．1481），无锡与宜兴群体间遗传距离最小（0．1141）。利用UPGMA进行聚类分析表明，无锡与宜兴群体首先聚在一起，湖州与苏州群体随后聚在一起，再与无锡、宜兴群体聚在一起。     

山核桃天然群体遗传结构的RAPD分析

利用随机扩增多态性DNA（RAPD）分子标记技术，分析了山核桃5个天然居群150个个体的遗传多样性和遗传结构，20条10bp的随机引物共扩增出252个位点，其中，多态性位点168个，多态位点百分率（PPB）为66．7％。居群水平Shannon’S多态性信息指数（I）在0．1992～0．2800间变化，物种水平，为0．4102；居群水平Nei’s基因多样性指数（H）介于0．1297～0．2051之间，物种水平H为0．2671。遗传变异计算显示，山核桃居群间基因分化系数（Gst）为0．3845。分子方差分析（AMOVA）表明，居群间基因分化系数为0．3413，大部分变异存在于居群内。居群间基因流（Nm）为0．9671，说明居群间基因交流相对较少。这一结果符合山核桃风媒、异交的繁育系统特点，但其居群间基因分化系数比异交植物的平均水平高。提示：地理隔离、居群内近交及居群间有限的基因流可能是形成目前山核桃天然群体遗传结构的主要因素。     

不同倍性团头鲂群体遗传变异的初步分析

从鲤的微卫星DNA标记中筛选4对有效引物，进行不同倍性团头鲂遗传变异的微卫星DNA分析。结果表明：（1）4对引物中有2对能在不同倍性团头鲂五群体中探测到多态性，其等位基因数为4～6个，大小在131～307bp之间。发现两个等位基因（MFW19—175和MFW19—256）可作为异源3n特异的微卫星DNA标记。（2）不同倍性团头鲂五群体内的Shannon多样性指数为0．0562～0．2887，Nei’s基因多样性指数为0．0315～0．1969，平均遗传距离为0．0395～0．1542，不同倍性团头鲂群体存在较大的遗传变异。（3）反交3n、异源3n、正交3n和同源4n—F1群体的Shannon多样性指数和Nei’s基因多样性指数均显著地高于2n群体（P〈0．05）。（4）分子方差分析和聚类分析的结果表明：五群体分子系统树分成明显的两支，同源4n—F1、正交3n、反交3n和异源3n为一支，2n为另一支。     

不同倍性团头鲂群体遗传变异的初步分析

从鲤的微卫星DNA标记中筛选4对有效引物，进行不同倍性团头鲂遗传变异的微卫星DNA分析。结果表明：（1）4对引物中有2对能在不同倍性团头鲂五群体中探测到多态性，其等位基因数为4～6个，大小在131～307bp之间。发现两个等位基因（MFW19—175和MFW19—256）可作为异源3n特异的微卫星DNA标记。（2）不同倍性团头鲂五群体内的Shannon多样性指数为0．0562～0．2887，Nei’s基因多样性指数为0．0315～0．1969，平均遗传距离为0．0395～0．1542，不同倍性团头鲂群体存在较大的遗传变异。（3）反交3n、异源3n、正交3n和同源4n—F1群体的Shannon多样性指数和Nei’s基因多样性指数均显著地高于2n群体（P〈0．05）。（4）分子方差分析和聚类分析的结果表明：五群体分子系统树分成明显的两支，同源4n—F1、正交3n、反交3n和异源3n为一支，2n为另一支。     

濒危植物珙桐种群遗传多样性分析

采用ISSR分子标记技术,对珙桐6个种群和光叶珙桐1个种群共117份样品进行遗传多样性分析.结果表明:用12条引物对117份样品进行扩增,共检测扩增位点199个,其中多态性位点177个.在物种水平上,多态性位点百分率(PPL)为88.94%,Neis基因多样性(H)为0.278 4,shannon信息指数(I)为0.418 7.种群水平的多态性相对较低,多态百分率在35.18%~48.74%之间,Neis基因多样性(H)为0.126 0~0.179 5,shannon信息指数(I)为0.188 1~0.265 1.基于Neis遗传多样性分析得出的种群间遗传分化系数(Gst)为0.474 5,表明有47.45%的遗传变异存在于种群间,而种群内的遗传变异占总变异的52.55%,种群间基因流(Nm)为0.553 7.Mantel检测显示,种群间的遗传距离和地理距离之间不存在显著的相关性.     

河川沙塘鳢的ISSR分析河川沙塘鳢的ISSR分析

[目的]分析江苏常熟河川沙塘鳢个体大小不一的2个群体之间的遗传差异性。[方法]采用ISSR分子标记技术对2个群体进行遗传分析。[结果]从77个ISSR引物中筛选出3个引物，对2个群体共24个样品进行扩增，获得27个清晰的扩增位点，其中多态性位点19个，多态位点百分率为70．37％。结果表明，大沙塘鳢的遗传多样性水平略高于小沙塘鳢。大小沙塘鳢群体间的遗传距离为0．2194，群体间的Nei’s遗传分化系数为0．1904。利用MEGA3．0软件构建沙塘鳢24个个体的UPGMA系统树，显示出较明显的分支。[结论]江苏常熟河川沙塘鳢种群的遗传多样性水平较低，2个群体的遗传分化已经达到种群分化水平。     

木荷种群遗传多样性的ISSR分析

利用ISSR分子标记技术,对木荷种群的遗传多样性和遗传分化进行分析.用12个引物对9个木荷种群共180个个体的样品进行扩增,共测到245个位点,其中多态位点221个,多态位点百分率(P)为90.20%.9个种群的P平均为53.02%.木荷种水平的Shannon信息指数(Ⅰ)为0.4548,Nei指数(h)为0.3016.各种群Ⅰ平均为0.2914,h平均为0.1974.表明木荷物种以及种群水平均具有较高的遗传多样性.AMOVA分子差异分析表明木荷种群的遗传变异34.37%存在于种群间,65.63%存在于种群内,种群间的基因分化系数(Gst)为0.3454.木荷种群间的基因流(Nm)为0.9476.木荷9个种群间的遗传距离平均为0.1547.利用算术加权平均数法(UPGMA)对木荷9个种群进行聚类,结果可分为3大类群.     

甘草野生种群遗传多样性的AFLP分析

 【目的】甘草具有重要的药用、工业和生态价值，目前处于濒危状态，进行遗传多样性研究可以为甘草资源的保护和利用奠定基础。【方法】利用AFLP分子标记对来自中国甘草主产区的16个野生种群共320个单株进行遗传多样性研究。【结果】（1）利用15对AFLP引物共扩增出759条谱带，其中多态性谱带527条，多态性条带百分率为69.43％;（2）Nei’基因多样性指数为0.13～0.19，种群总体多样性指数为0.25;Shannon多态性信息指数的变异范围在0.19～0.28，总体为0.39;宁夏地区甘草种群遗传多样性水平最高，甘肃酒泉种群的遗传多样性水平最低。（3）AMOVA分析表明甘草种群间的遗传变异占总变异的18.64％，种群内变异占67.16％。利用UPGMA聚类可将供试16个群体划分为3类，聚类结果表现出明显的地域性。【结论】该研究明确了中国野生甘草遗传多样性处于中等偏下水平，种群内广泛的变异能够为野生资源保护和良种选育提供理论依据。     

野生银杏资源群体遗传多样性的RAPD分析

用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对浙江西天目山、贵州务川、湖北大洪山区、重庆金佛山区和福建武夷山区等5个群体150个银杏Ginkgo biloba个体进行了遗传多样性分析。12个寡核苷酸引物共检测到194个位点，多态位点130个，多态位点百分率66．67％。用PopGen 32软件对数据进行了分析，结果显示：Nei’s基因多样性指数（h）的群体水平是0．4317，Shannon信息指数（I）的群体水平是0．6211，基因分化系数（Gst）是0．2882。Shannon信息指数（I）分析揭示的银杏群体遗传分化水平[（Isp-Ipop）／Isp]=0．1903，AMOVA分析结果得出银杏群体间的分化占36．7％。RAPD数据显示．5个银杏群体遗传多样性较高，其中浙江西天目山、贵州务川和湖北大洪山区有可能是野生银杏冰川期避难所。图4表5参22     

3个尖塘鳢引进群体繁育后代的遗传多样性分析

【目的】分析3个尖塘鳢引进群体繁育后代的遗传多样性和遗传结构,为尖塘鳢亲本管理和资源可持续利用提供基础资料,同时为尖塘鳢的遗传改良及新品种培育打下基础。【方法】采用微卫星分子标记分析2000年引进的线纹尖塘鳢群体繁育后代（AZ1）、2005年引进的线纹尖塘鳢群体繁育后代（AZ2）及1986年引进的云斑尖塘鳢群体繁育后代（TG）的遗传多样性,运用PopGene32、CERVUS 3.0、Arlequin 3.1计算3个尖塘鳢群体的等位基因数（Na）、期望杂合度（He）、多态信息含量（PIC）及遗传分化系数（F_st）等遗传参数,基于Nei氏遗传距离利用MEGA 7.0中的非加权组平均法（UPGMA）构建系统发育进化树,并以Structure 2.3分析群体间的遗传结构。【结果】12个微卫星分子标记在3个尖塘鳢群体中扩增得到32个等位基因。AZ1群体、AZ2群体和TG群体的平均Na分别为1.33、1.92和2.33,平均He分别为0.034、0.180和0.214,平均PIC分别为0.031、0.155和0.191。3个尖塘鳢群体间的F_st为0.077～0.384、遗传相似度为0.926～0.950、遗传距离为0.052～0.077。3个尖塘鳢群体有22.54%的变异来自于群体间,77.46%的遗传变异来自群体内。基于Nei氏遗传距离构建的UPGM系统发育进化树显示,AZ1群体和AZ2群体先聚类为一支,然后与TG群体聚类在一起。【结论】3个尖塘鳢引进群体繁殖后代遗传多样性水平较低,尤其是AZ1群体近交程度较高,因此相关引种单位或繁殖场需尽快采取相应的选育手段提高现有杂交鳢群体遗传多样性,避免近交衰退带来的风险,也可通过引进新的种质资源提高杂交鳢遗传多样性。此外,3个杂交鳢群体尚未出现种质混杂和杂交情况,仍可作为杂交鳢遗传育种奠基种群。     

山蜡梅复合体的遗传多样性和居群遗传分化研究

将山蜡梅、浙江蜡梅、突托蜡梅统称为山蜡梅复合体,应用RAPD和ISSR标记分别对来自7个不同居群共201个山蜡梅复合体单株进行DNA多样性检验。结果显示:从38个ISSR引物中筛选出12个条带清晰、重现性好、多态性高的引物,扩增出总条带数142条,大小在300～2800bp,多态率达94.37%,PIC0.31,MI3.33。在80个RAPD引物中,选出了12条合适的引物,扩增出条带数226条,大小在150～2200bp,多态率达95.13%,PIC0.37,MI4.91。两种分子标记计算出山蜡梅复合体居群的Nei’s基因多样性指数为0.2952,Shannon信息指数为0.4884,反映出山蜡梅复合体丰富的遗传多样性。进一步的AMOVA分析显示,山蜡梅复合体遗传变异大部分来自居群内变异,并且都达到极显著水平,这表明7个地理居群间存在着比较明显的遗传分化。UPMGA聚类分析发现,7个山蜡梅复合体居群被归为明显的3大支,且地理距离相邻的居群遗传距离也近,说明居群的聚类和地理距离有关。同时分析结果还为解决存在争议的新种的分类工作提供分子水平的有力证据。     

徐州、平山两地中华稻蝗和日本稻蝗的群体遗传关系分析

 应用RAPD技术分析了江苏徐州和河北平山两地混生的中华稻蝗（Oxya chinensis）和日本稻蝗(O.japonica) 的群体遗传关系。用10条随机引物从43头个体中产生125条清晰、稳定的谱带， 其多态性条带占99%。 Shannon信息指数表明，中华稻蝗遗传多样性高于日本稻蝗，分别为0.3432和0.2781。Nei's遗传距离显示：种群间遗传距离明显小于种间遗传距离；同一采集地点混居的中华稻蝗与日本稻蝗之间的遗传距离小于地理上存在较大跨度的两物种间的遗传距离，如：江苏徐州中华稻蝗和日本稻蝗之间的遗传距离为0.2411，河北平山中华稻蝗和日本稻蝗的遗传距离为0.2578，而江苏徐州中华稻蝗和河北平山日本稻蝗之间的遗传距离为0.2749，江苏徐州日本稻蝗和河北平山中华稻蝗之间的遗传距离为0.2982。基于Nei's遗传距离，分别用UPGMA和NJ法构建分子系统树，结果供试的43个个体分为两大聚类簇，江苏徐州和河北平山两地的中华稻蝗聚为一支，日本稻蝗聚为另一支。上述结果表明，RAPD分析方法可显示个体间的多态性，反映个体或物种间的细微差异，是区分近缘物种的有效分子标记。     

非洲桃花心木不同地理群体遗传多样性分析

应用SRAP 分子标记技术,对来自非洲的5 个不同地理群体非洲桃花心木的遗传多样性和遗传分化进行了分 析。结果表明:筛选出28 对SRAP 引物组合用于群体遗传分析,共扩增出条带77 条,其中多态性条带59 条,多态 性水平为76.62%;5 个群体遗传距离在0.036 1 ~ 0.131 7 之间,总的Nei爷s 基因多样性指数为0.209 3,总的 Shannon爷s 信息指数分别为0.330 0,遗传变异主要来自群体内个体间(70.04%),群体基因流(Nm)为1.185 8。      

基于EST-SSR的广东与广西茶树资源遗传结构和遗传分化比较分析

 【目的】通过揭示茶树资源遗传多样性、遗传结构和遗传分化关系，为资源的有效保护和充分利用提供理论依据。【方法】利用109对核心EST-SSR标记对广东、广西的105份茶树核心资源进行遗传多样性和遗传分化比较分析；同时对广东和广西资源组群间、组群内白毛茶和茶种群间、种群内进行AMOVA分子方差分析，进一步剖析遗传结构，并绘制群体遗传结构图。【结果】109对核心EST-SSR标记共检测到435个等位基因，平均等位基因（NA）3.99个，平均有效等位基因（NE）为2.12，平均Nei's基因多样性（H）为0.59，平均观测杂合度（Ho）为0.32，平均期望杂合度（He）为0.46，平均多态性信息含量（PIC）为0.56。广东茶树资源遗传多样性的上述6个参数均小于广西茶树资源。广东白毛茶NA和H低于广东茶，NE、He、Ho和PIC与茶较为接近；广西白毛茶NA大于广西茶，但是NE、He和H低于茶。F-统计量分析表明白毛茶与茶种群内近交系数（Fis）、种群间近交系数（Fit）和种群遗传分化（Fst）都较低，基因流（Nm）都较高。广东白毛茶与广西白毛茶Fst为0.04，基因交流相对较低为6.26。AMOVA分析显示组群间遗传变异为3.09%，组群内种群间遗传变异为2.22%，种群内遗传变异为94.69%。群体遗传结构显示105份茶树资源可分为3个类群，类群Ⅰ由6份选育品种组成；类群Ⅱ由43份广东资源和16份广西资源组成；类群Ⅲ包括广西36份和广东4份资源。【结论】广东茶树资源遗传多样性程度低于广西。广东白毛茶遗传多样性比广东茶丰富，种群遗传分化低，存在较频繁的基因交流。广东白毛茶遗传多样性低于广西白毛茶，遗传分化相对较高，基因流较低。AMOVA分析显示遗传变异主要分布于广东、广西茶树资源群体内。     

Genetic diversity of Ustilago hordei in Tibetan areas as revealed by RAPD and SSR

Covered smut, which is caused by Ustilago hordei(Pers.) Lagerh., is one of the most damaging diseases of highland barley(Hordeum vulgare Linn. var. nudum Hook. f) in Tibetan areas of China. To understand the molecular diversity of U. hordei, a total of 27 isolates, which were collected from highland barley plants from Tibet, Sichuan, Qinghai, and Gansu provinces/autonomous region, were analyzed using random amplified polymorphic DNA(RAPD) and simple sequence repeat(SSR) markers. Among the 100 RAPD primers used, 24 primers exhibited polymorphism. A total of 111 fragments were amplified, of which 103 were polymorphic with a polymorphic rate of 92.79%. The average observed number of alleles(Na), effective number of alleles(Ne), Nei's genetic diversity(H), Shannon's information index(I) and polymorphism information content(PIC) value in the RAPD markers were 1.9279, 1.5016, 0.2974, 0.4503 and 0.6428, respectively. For the SSR markers, 40 of the 111 primer pairs exhibited polymorphism and provided a total of 119 bands, of which 109 were polymorphic and accounted for 91.60% of the total bands. The Na, Ne, H, I and PIC values of the SSR markers were 1.9160, 1.4639, 0.2757, 0.4211 and 0.4340, respectively. The similarity coefficients ranged from 0.4957 to 0.9261 with an average of 0.7028 among all the 27 isolates used. The dendrogram, which was developed based on the RAPD and SSR combined marker dataset showed that the 27 U. hordei isolates were divided into 3 clusters at similarity coefficient of 0.7314. We determined that RAPD and SSR markers can be successfully used to assess the genetic variation among U. hordei isolates. The RAPD markers revealed higher levels of genetic polymorphism than did the SSR markers in this study. There existed a moderate genetic difference among isolates. The molecular variation and differentiation was somewhat associated with geographical origin but not for all of the isolates.