一株抗猕猴桃溃疡病的芽孢杆菌分离和筛选研究初报

从猕猴桃根际土壤中分离到的115株芽孢杆菌中,经过皿内拮抗活性试验筛选到12株对猕猴 桃细菌性溃疡病有较好抑制效果菌株。进一步单胞分离纯化后,拮抗活性明显增强,尤以B17-4、B56-1 和B56-3效果显著。田间药效试验表明:B56-3菌株发酵滤液稀释500倍时,采用刮除病斑涂抹法防治 效果达到88％。     

枯草芽孢杆菌ZM12菌株抗菌物质初步研究

对生防菌株ZM12发酵滤液的抑菌作用机理进行初步探索。盆栽试验结果表明该菌株的发酵滤液对猕猴桃细菌性叶枯病菌具有较强的保护作用;田间试验结果表明发酵滤液稀释100倍喷施时,其防效可达85.2%,显著高于95%CT杀菌剂的防效(64.8%)。同时,施药后植株SOD和POD酶活性都有明显趋势变化,先迅速增强,保持一段时间的高活性后缓慢下降。此外还对该菌株的发酵滤液稳定性和作用机理进行初步探索,试验结果表明菌株的发酵滤液具有耐热、耐酸、耐储藏性,但在强碱性条件下其抑菌活性降低较多。     

柑橘绿霉病拮抗细菌的筛选及其抑制效果

从根际土壤中筛选出1株对柑橘绿霉病菌Penicillium digitatum Sacc.具有较强拮抗活性的菌株HA-01。采用平板对峙法,测定了该菌株对柑橘绿霉病菌、柑橘青霉病菌Penicillium italicum、柑橘酸腐病菌Geotri-chum candidum等12种果蔬病原菌的拮抗活性。结果表明,菌株HA-01对12种供试病原菌均有不同程度的拮抗作用,表现出广谱抗菌活性。菌落形态观察、生理生化特性分析、16S rDNA序列同源性比对以及特异性PCR检测结果表明,该菌株为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。对马水橘的活体接种试验表明,菌株HA-01的发酵液、菌悬液和发酵滤液处理3 d后柑橘绿霉病的发病率均低于20%,病斑直径均在2.00 cm以下,而对照发病率为94.44%,病斑直径为3.60 cm。     

内生细菌对黄瓜灰霉病的防治研究

［目的］为黄瓜灰霉病的生物防治提供参考依据。［方法］以黄瓜叶片内生细菌B12、B13为供试菌株，通过孢子萌发试验研究了菌株发酵液及发酵滤液对灰霉菌分生孢子萌发的影响。［结果］菌株B12、B13的发酵原液对孢子萌发的抑制率分别为94.4%和91.3%，对芽管生长的抑制率分别为84.2%和79.7%，稀释10倍后其孢子萌发抑制率分别为87.2%和78.2%。菌株B12、B13的发酵滤液对孢子萌发的抑制率分别为90.0%和84.4%，对芽管生长的抑制率分别为82.6%和76.7%。50℃下，菌株B12、B13的发酵滤液的抑制率分别为84.7%和83.1%，经100℃沸水浴处理后其抑制率分别为78.9%和73.9%，经121℃高温处理后其抑制率分别为35.7%和27.2%。pH值为3时，B12和B13的发酵滤液的抑制率分别为11.3%和9.3%；pH值为12时，其抑制率分别为31.4%和25.4%。［结论］内生细菌B12、B13可用于防治黄瓜灰霉病。     

苹果树皮内生菌对苹果树腐烂病的防治效果

从苹果树皮中分离出1株对苹果腐烂病病菌具有较好拮抗作用的内生细菌——B5014。该菌株对腐烂病病菌的抑菌率达55.59%,显著高于其他菌株;通过对菌株B5014发酵滤液进行不同浓度稀释后发现,随着浓度的不断降低,菌株B5014发酵滤液对腐烂病病菌菌丝生长、孢子萌发的抑制率不断下降;田间试验表明,在接种时间较短(10 d)时,B5014细菌悬浮液原液处理可以与生产中常规使用的80%代森锰锌800倍液防效基本持平,但到接种20 d时,防效低于常规化学防治方法。     

黄瓜靶斑病菌拮抗菌的筛选及发酵条件优化

目的拟从张家口地区黄瓜根际土壤中筛选黄瓜靶斑病菌的生防菌株,并优化生防菌株的发酵条件,从而为黄瓜靶斑病的生物防治提供理论依据。方法采用稀释涂布法从土壤中分离细菌,采用对峙培养法和生长速率法筛选黄瓜靶斑病菌的拮抗菌株,并单因素优化其发酵条件。结果从黄瓜根际土中分离到对黄瓜靶斑病菌有较强抑菌作用的拮抗细菌5株,其中ZL-7菌株对黄瓜靶斑病菌抑菌率最高,可达60.0%;复筛ZL-7菌株无菌发酵液对黄瓜靶斑病菌抑菌率可达67.1%;并对ZL-7菌株的发酵条件进行了优化,结果表明:最佳发酵条件温度为37℃,pH值为7,培养时间为3d。结论从黄瓜根际土中分离得到对黄瓜靶斑病菌最强抑菌作用的拮抗菌株ZL-7菌株,并优化了ZL-7菌株最佳发酵条件。     

枯草芽孢杆菌B03对植物病原真菌的抑制作用

通过室内离体测定和温室植株测定研究了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B03对植物病原真菌的抑制作用。平板对峙培养结果表明,菌株B03对供试的15种真菌病害的病原菌均具较强的抑菌活性,其发酵滤液对甘蓝枯萎病菌、西瓜枯萎病菌和黄瓜枯萎病菌的菌丝生长都有抑制作用,抑制强度与发酵滤液浓度呈显著正相关。发酵液的施用时期不同对甘蓝枯萎病的温室防效影响显著,以发酵液灌根后3 d再接种病原菌的效果最好,可明显降低植株发病率和病情指数,防治效果高达96.25%。     

芽孢杆菌B15及其代谢产物对棉花枯萎病菌的抑菌效果

考察了芽孢杆菌B15菌株及其代谢产物对棉花枯萎病菌的抑菌效果及作用方式.结果表明,芽孢哌杆菌B15对棉花枯萎病菌有较强的抑菌作用,抑菌圈达30mm,尤其对病原菌孢子抑制作用较强.无菌发酵滤液对孢子萌发的抑制率为46%,处理孢子悬液6h可使54%的孢子致死.     

拮抗菌株的筛选及其发酵滤液的抑菌活性

为了获得高效饲用益生菌,采用体外筛选培养法,从土壤中筛选出三株具有抑菌活性的菌株,初步鉴定为地衣芽孢杆菌。其中1#菌株对动物肠道中有害菌如金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌均有较强抑制作用,对其性质进行考察结果表明,在30℃,pH7.0,150 r/min的条件下,恒温振荡培养24 h,测其发酵滤液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌效价分别为2 000 IU/mL1、500 IU/mL、1 500 IU/mL。在以金黄色葡萄球菌作为指示菌的条件下,该菌株发酵滤液具有较强的热稳定性,60℃放置1 h,抑菌活性下降了29%;100℃放置30 min,抑菌活性下降了45%,放置1 h,抑菌活性下降了48%;121℃放置1 h,抑菌活性仍能保持40%;该发酵滤液抑菌作用的最适pH值为7.0,在pH3.0时能保持71%的抑菌活性,在pH11.0时,仍能维持67%的抑菌活性,此发酵滤液对蛋白酶K不敏感,并且蛋白酶K对该发酵滤液的抑菌活性也起一定的促进作用。     

芽孢杆菌B_1对“银帝”甜瓜主要采后病害的抑制

研究了芽孢杆菌B1原液、滤液、灭菌液和悬浮液对“银帝”甜瓜主要采后病害的抑制效果。结果表明,B1原液能显著的抑制损伤接种甜瓜果实的白霉病、粉霉病、软腐病和黑斑病,其抑制率分别为75.9 %、78.7 %、100 % 和99 %。B1滤液仅对白霉病病斑面积的扩展有所抑制,但对该病发病率及粉霉病的抑制效果不显著。B1杀菌液可有效降低黑斑病的发病率与病斑面积,减轻白霉病和粉霉病病斑面积的扩展,但对这两种病害的发病率影响不大。B1悬浮液仅能抑制粉霉病及白霉病病斑面积。     

P. syringae pv. glycinea M-18生产冠菌素补料发酵工艺优化研究

【目的】提高丁香假单胞菌大豆致病变种高产突变株P. syringae pv. glycinea M-18,发酵生产冠菌素的产量。【方法】研究补料分批发酵过程中初始葡萄糖浓度、葡萄糖补加浓度、补加时间、补加次数、补加三氯化铁的浓度及pH对发酵产生的影响,并在5 L发酵罐中进行放大试验。【结果】在5 L发酵罐中,自发酵后84 h起,保持葡萄糖浓度在5—2 g.L-1,初始葡萄糖浓度为10 g.L-1,发酵后84 h每升发酵液补加0.005 mmol三氯化铁,发酵过程中用40 g.L-1的MgCO3来调控pH在6.7左右,与对照相比冠菌素的产量显著提高,最高达31%。【结论】在发酵过程中将葡萄糖控制在一个较合适的范围内可以显著提高P. syringae pv. glycinea M-18发酵生产冠菌素的产量。     

小檗内生放线菌H21的鉴定及抑菌活性成分分析

【目的】从药用植物小檗(Berberis thunbergii)中筛选抗菌活性内生放线菌,对活性菌株的分类地位及抑菌活性进行研究,分离并鉴定候选菌株发酵液中活性成分的化学结构及其抑菌活性,为农用杀菌剂的创制提供依据。【方法】采用选择性培养基从小檗叶片分离内生放线菌,16S r DNA法进行菌株鉴定;采用管碟法测定发酵液对烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)等7种供试菌的抗细菌活性,采用抑制菌丝生长速率法测定发酵液对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)等7种植物致病菌的抗真菌活性;依次采用大孔树脂吸附、硅胶柱层析及反相高效液相色谱(HPLC)等技术分离纯化活性组分;采用核磁共振波谱(NMR)和质谱(MS)技术对分离到的活性成分进行结构鉴定;采用微量肉汤稀释法测定化合物对烟草青枯病菌等7种细菌的最低抑菌浓度,抑制孢子萌发法和菌丝生长速率法测定化合物对番茄灰霉病菌的抗菌活性。【结果】分离到一株活性菌株H21,该菌株经16S r DNA序列分析鉴定为链霉菌(Streptomyces sp.);除铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)外,H21菌株发酵液对烟草青枯病菌、猕猴桃溃疡病菌(Pseudomonas syringae pv.actinidiae)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠埃希氏菌(Escherichia coli)等多种病原细菌有明显的抑菌活性;H21发酵液对番茄灰霉病菌表现出较强的抑制菌丝生长作用,对其他供试病原真菌无明显的抑菌活性;从H21菌株发酵液中分离鉴定了3个化合物,分别为N-乙酰基-2-(4-羟苯基)乙胺、环-(L-亮氨酸-L-精氨酸)和二硫吡咯类抗生素—全霉素;全霉素为广谱抗生素,其对烟草青枯病菌、猕猴桃溃疡病菌、蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为0.156、0.313、0.078、0.313、0.156和0.313μg·m L-1;对番茄灰霉病菌菌丝生长和孢子萌发的抑菌中浓度(IC50)分别为13.56和7.89μg·m L-1。【结论】小檗内生菌放线菌H21可能是一种新的全霉素产生菌,其对植物致病细菌烟草青枯病菌和猕猴桃溃疡病菌有抗菌活性,全霉素对于开发针对致病细菌的农用杀菌剂具有重要的参考价值。     

拮抗放线菌F1发酵液抑菌谱及稳定性分析

对拮抗放线菌菌株F1发酵液的抑菌谱及稳定性做了研究。抑菌活性实验表明:菌株F1发酵液对供试17种植物病原真菌和7种病原细菌都有较强的抑制活性,在供试的植物病原真菌中,对番茄灰霉病菌和李干腐病菌的抑制作用最强,抑菌圈直径分别为41.04mm和40.12mm;病原细菌中,对丁香假单胞菌流泪致病变种的抑制作用最强,抑菌圈直径可达22.15mm;稳定性实验结果表明:菌株F1发酵液对紫外线、热和酸碱较稳定,在pH为6～10条件下,均能保持较强的抑菌活性,但不耐强酸、强碱;当温度低于60℃时,处理30min和60min,抑菌活性几乎没变化,仍能保持较强的抑菌效果,但高于80℃时,抑菌活性明显降低。表明该菌株发酵液具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定开发价值。     

绿色木霉B3菌株发酵液杀线活性分析及其稳定性测定

为了明确绿色木霉(Trichoderma viride)B3菌株对禾谷孢囊线虫毒杀活性及其稳定性。通过室内毒力测定,分析不同因素对绿色木霉B3菌株毒杀禾谷孢囊线虫2龄幼虫活性及其稳定性的影响。结果表明,绿色木霉B3菌株发酵液在自然光处理0～96 h后,对其杀线活性无显著影响,2龄幼虫死亡率为71.4%～86.2%;在不同氧化剂、还原剂和酸碱处理下,其抗氧化性、还原性和耐强酸强碱较强。同时,绿色木霉B3菌株发酵液耐贮藏性较好,储存60 d后杀线活性无显著差异。     

Species of Ice Nucleation Active Bacteria on the Apricot and the Relationship Between Their Activity and Flower Frost

During 1996- 1997, sixty samples were collected from apricot in Hebei Province, from which nineteen ice nucleation active bacterial strains were isolated. Nine stains were identified as Pseudomonas syringae pv. syringae by bacteriological determination, while the others were Erwinia uredovora. Assay of ice nucleation activity (INA) showed the activity of the Pseudomonas strains was higher than that of the Erwinia.According to the number of bacterial cells required to produce one ice nucleus active at - 3℃, four stains was classified as strong ones, three as medium-strong, the remainder as weak. In general, the INA of these strains were regarded as medium-strong. Under stress of Iow temperatures, treatment of INA bacteria can greatly raised relative electric conductivity of petals and permeability of cell membrane. The treated petals showed symptoms of serious frost at - 3 - - 4℃ and had supercooling points of 2 - 3℃ higher than controls. Our results demon strated that INA bacteria are one major factor to incite frost damage to apricot flowers. We may reduce frost injury to apricot during flowering phage through control of INA bacteria.     

猕猴桃品种叶片组织结构与抗溃疡病的关系

对9个猕猴桃品种(金魁、79-3、79-1、79-5、秦美、华美2号、海沃德、美味硬、中华软)的一年生成叶气孔及其显微结构进行解剖构造的观察和测定.结果表明:不同品种间叶片的气孔密度和长度差异显著,并且与品种抗病性成正相关,其相关系数分别为0.825 7、0.835 5.不同品种间叶片的显微细胞结构特征差异不显著 , 与品种抗病性相关性不大,品种间变化规律性不强.发病缓止期,各品种叶片气孔相比病害盛发期均有在数目及大小上减低的现象,但降幅不明显,品种间降幅存在差异.可以把叶片气孔的密度及大小作为抗溃疡病的形态结构的鉴定指标.     

Pear Blossom Blast Caused by Pseudomonas syringae pv.syringae in China

This study was done to determine the causal organism of the pear blossom and bud blast in China. It was identified by a bacteriological test, electro-microscopic observation, Koch＇s postulate test, Biolog, fatty acid methyl esters （FAMEs）, and a polymerase chain reaction （PCR） test, and compared with the standard reference strains. Six representative strains out of 20 pathogenic bacterial isolates from 16 diseased samples showed characteristics similar to three standard strains of Pseudomonas syringae pv. syringae from Belgium. They were identified as P. syringae pv. syringae with a Biolog similarity of 0.57-0.86 and FAMEs similarity of 0.58-0.81. The bacterium was reisolated from the symptomatic plants and blossoms. Identification as P. syringae pv. syringae was confirmed by using PCR primers and sequence tests, and compared with the above-mentioned results. The data supported the fact that the pear blossom and bud blast in China could be caused by P. syringae pv. syringae.     

大豆细菌性斑点病抗性品种和种质资源筛选

近年我国东北大豆产区细菌性斑点病发生严重,影响大豆品质和产量。采用室内高压喷雾接种法,利用分离的假单胞杆菌Psgneau001菌株接种黑龙江省主栽品种211份和东北大豆核心种质192份材料,进行抗性鉴定。结果表明,黑龙江省主栽品种抗性材料占34%,感病材料占51%,中间材料占15%;东北大豆核心种质抗性材料占57%,感病材料占26%,中间材料占17%。试验所获抗病种质资源可为大豆抗病育种提供优质候选材料。     

鉴别丁香假单胞菌丁香致病变种和豌豆致病变种的 DNA 探针的制备

把引起豌豆枯萎病的丁香假单胞菌丁香致病变种 Pseudomonas syringae pv.syringae 菌株3319和丁香假单胞菌豌豆致病变种 P.syringae pv.pisi 的模式菌株2452的染色体 DNA 分别用限制性核酸内切酶 HindⅢ完全消化,再用 T_4DNA 连接酶把消化好的 DNA 片段连接到用HindⅢ内切酶消化的质粒载体 pUC19上,然后把重组的质粒载体转化到大肠杆菌(E.coli RR1)中去克隆.把菌株3319和2452的 DNA 用 p~(32)标记做成探针,分别与克隆菌落杂交,筛选出只对菌株3319的 DNA 有特异性的1个重组 DNA 的克隆和对菌株2452的 DNA 有特异性的2个重组 DNA 克隆.再把这3个重组质粒 DNA 分别用 P~(32)标记做成探针,与菌株3319和2452的 DNA 杂交,也显示只对各自 DNA 来源的菌株具有特异性.这3个重组质粒中,有2个携带有菌株2452的 DNA 片段,1个为0.82 kb。另1个略小于0.58 kb,还有1个质粒携带有菌株3319的 DNA 片段,为0.85 kb.