宁波地区贝类产品中副溶血弧菌的分离与鉴定

从2007年3月至6月,在宁波市5个不同的农贸市场共采集贝类样品360份,分离菌株71株,其中5株代表菌株革兰氏染色阴性、弧状、具极生单鞭毛,利用葡萄糖、甘露醇产酸,不利用乳糖、蔗糖,精氨酸双水解酶阴性,VP试验为阴性,赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶为阳性,靛基质、甲基红试验阳性,不产生H2S,初步判断为副溶血弧菌;进一步进行了基于16S rRNA和toxR序列的PCR检测,序列测定结果验证了该5株细菌确实为副溶血弧菌.以16S rRNA序列为基础,分析了分离株与相关细菌菌株的同源性,构建了系统发育树.     

噪鹛嗜水气单胞菌的分离与鉴定

从上海野生动物园百鸟园饲养的病死噪鹛中分离到一株革兰氏阴性、有运动力的短杆菌。其生化特性为氧化酶阳性;发酵葡萄糖产酸产气;发酵甘露醇、七叶苷、阿拉伯糖和蔗糖;不发酵肌醇;鸟氨酸脱羧酶阳性，对新生霉素不敏感，VP试验阳性。用致病性嗜水气单胞菌，检测试剂盒试验呈阳性结果。毒力试验显示，分离株对小鼠的LD50为5×103CFU,具有很强的致病性。经鉴定该病原菌为嗜水气单胞菌（Aeromonashydrophila）。     

克氏原螯虾暴发病细菌性病原的研究

从患暴发病的克氏原螯虾(Procambarus clarkii)的肝胰腺中分离到3株细菌.人工注射感染显示,KSAX-3分离菌在浓度1010cfu/mL时可使95%以上健康克氏原螯虾死亡;在106cfu/mL浓度时可导致70%的健康克氏原螯虾死亡,并使克氏原螯虾出现明显的与自然条件下相似的疾病症状,试验结果表明该分离菌为克氏原螯虾致病菌.KSAX-3菌的主要生理生化特性为:革兰氏阴性,单鞭毛,发酵葡萄糖,甘露醇、氧化酶、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶阳性,精氨酸脱羧酶、水杨酸、枸橼酸盐(西蒙氏)阴性,在含0%、10%NaCl的普通培养基中不生长,在含2%、4%、6%、8%NaCl的普通培养基中生长,在30℃、35℃、40℃、42℃条件下生长良好.鉴定该菌为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus).药敏试验结果表明,该菌对盐酸土霉素、盐酸四环素、环丙沙星、诺氟沙星、金霉素、硫酸卡那霉素、交沙霉素、烟酸诺氟沙星等8种药物敏感.     

烟草鸟氨酸脱羧酶的生物信息学分析

烟草鸟氨酸脱羧酶对烟草根系中尼古丁的形成以及烟草在逆境胁迫条件下生存发挥一定作用,为进一步研究烟草鸟氨酸脱羧酶特性,对其进行生物信息学分析。利用Protparam、Smar、Cdd和NetPhos工具对烟草鸟氨酸脱羧酶的理化特性、家族性和磷酸化进行分析。结果显示:烟草鸟氨酸脱羧酶各成员均为酸性,NtODC_1和NtODC_2属于稳定性蛋白,NtODC_3、NtODC_4和NtODC_5属于不稳定性蛋白,且NtODC_5的热稳定性较强;烟草鸟氨酸脱羧酶各成员均属于IV族脱羧酶家族;在催化过程中,烟草鸟氨酸脱羧酶各成员以NtODC_1较为活跃。     

中华鳖的嗜水气单胞菌分离与鉴定

1996年4月份南京某水产养殖场发生了鳖的暴发性流行病。从死亡鳖实质脏器分离到1种细菌，该菌为革兰氏阴性短杆菌，有运动力，细胞色素氧化酶阳性，V—P试验阳性，发酵葡萄糖产酸产气，发酵甘露醇、七叶苷和阿拉伯糖；不发酵乳糖、肌醇。鸟氨酸脱羧酶阴性。对氯霉素、四环素高度敏感；对青霉素不敏感。经鉴定为嗜水气单胞菌。     

大黄鱼假单胞菌病病原的分离鉴定及药物敏感试验

于2009、2010年分别从浙江温州南麂岛网箱养殖的患病大黄鱼体内分离出优势菌株ZSH和DHY10051103K,人工感染试验证实其为大黄鱼的病原菌,其半数致死量(LD50)分别为2.5×106、3.2× 106 CFU/mL.对分离菌株进行了形态、生理生化特性的测定及16S rRNA分子鉴定,结果显示:分离菌株为革兰氏阴性短杆菌,氧化酶阳性；利用柠檬酸盐和麦芽糖,降解硝酸盐,精氨酸双水解酶阳性,甲基红试验阴性,明胶酶阴性,鸟氨酸脱羧酶阴性；在16S rRNA系统发育树中,分离菌株与恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)聚为一支,GenBank中序列登录号分别为HQ007288、GQ449379.由此可知,分离菌株属于恶臭假单胞菌(P.putida).药物敏感性试验结果表明,分离菌株对强力霉素、卡那霉素、庆大霉素、妥布霉素、左旋氧氟沙星、氧氟沙星、阿米卡星、诺氟沙星、恩诺沙星、四环素等10种药物敏感;五倍子和石榴皮对其抑菌效果最好,MIC值分别为1.57、3.13 mg/mL,其次为黄连和黄芩,而大黄、白头翁、苦参、黄柏对其抑菌效果较弱.药物敏感性试验结果可以为大黄鱼假单胞菌病的防治提供参考.     

沙门氏菌草酰乙酸脱羧酶在大肠杆菌中的表达、纯化及其生化鉴定

为深入了解沙门氏菌草酰乙酸脱羧酶的生化特性及功能,将该酶基因克隆到表达载体中,转入大肠杆菌中诱导表达,表达产物经monomeric avidin-Sepharose亲和层析分离纯化,获得了纯的沙门氏菌草酰乙酸脱羧酶.结果表明:纯化后的草酰乙酸脱羧酶经SDS-PAGE检测,呈现3条蛋白谱带,相对分子质量分别为65×103、46×103、8.8×103左右;该酶不耐高温,50 ℃温浴1 h后活力几乎完全丧失;其最适pH为6.0左右;1 mmol·L-1Zn2+、0.5 mmol·L-1草酸和20 mmol·L-1丙酮酸几乎完全抑制该酶的活力,10～20 mmol·L-1NaCl对该酶有明显激活作用,但200～500 mmol·L-1的NaCl对该酶却有明显抑制作用.     

11株中度嗜盐菌的分离及生理生化特性研究

[目的]了解海产品、盐渍类食品中的中度嗜盐菌资源,探究其生理生化特性。[方法]对海产品、盐渍品样品进行分离纯化,获得11株中度嗜盐菌,对各菌株的形态进行观察,进行生理生化特征测试。[结果]11株中度嗜盐菌中7株为杆菌,其中JD6、HYD2、NY80和NY11革兰氏阳性,其他革兰氏阴性,JD6和JD910产生芽孢;4株为球菌,其中NY3和NY12革兰氏阳性,XH1和JH3革兰氏阴性。11株细菌在0~20%NaCl条件下生长,均分解葡萄糖产酸,产生过氧化氢酶、赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶,不产生H2S;菌株XBD1、XH1、NY3J、H3和NY12在TCBS与SS琼脂上均能生长,NY11和JD910在SS琼脂上生长。11株细菌对氨苄青霉素和青霉素不敏感,对利福平敏感。11株细菌对小鼠无致死性。[结论]该研究为合理开发利用嗜盐微生物资源提供了参考。     

烟草精氨酸脱羧酶的蛋白质特性分析

为了研究参与烟草多胺合成的精氨酸脱羧酶的蛋白特性,运用生物信息学的方法分析了烟草精氨酸脱羧酶的理化特性、系统进化、氨基酸序列、保守区域和二级结构。结果表明:烟草精氨酸脱羧酶的等电点为4.99~6.78,氨基酸数为558~733,疏水性为-0.050~0.079,脂肪指数为88.04~92.08,不稳定指数为39.54~44.14;经进化树分析,烟草精氨酸脱羧酶分为2组,组1为Nt CAD1、Nt CAD2和Nt CAD5,组2为Nt CAD3和Nt CAD4;经序列比对分析,Nt CAD1、Nt CAD2和Nt CAD5的同源性较高,Nt CAD3和Nt CAD4的同源性较高,且组2均具有1个精氨酸脱羧酶保守序列和2个丙氨酸消旋酶/Ⅳ组脱羧酶保守序列;烟草精氨酸脱氢酶各成员的二级结构所占比例均为α-螺旋无规则卷曲β-折叠β-转角。     

家养鲤科鱼暴发性传染病的病原研究

从不同地区、不同鱼种的濒死病鱼的实质性脏器中分离到一种革兰氏阴性、有运动力的短杆菌,具有如下特点:氧化酶和V-P反应均呈阳性,发酵葡萄糖产酸、产气,发酵甘露醇、水杨素和阿拉伯糖,不发酵肌醇,鸟氨酸脱羧酶阴性,对新生霉素不敏感。用API-20E系统试剂盒检测,证实其为嗜水气单胞菌。用该菌人工感染健康鱼,可引致与自然发病鱼类似的病症,其半数致死量(LD_(50))为5×10~3个菌。在该菌的培养上清中存在着一种具有溶血活性的毒素。研究证明,家养鲤科鱼暴发性传染病的病原为产毒素的嗜水气单胞菌,该病的准确名称应为嗜水气单胞菌败血症。