番茄基因组DNA提取探讨

以番茄幼嫩叶片为材料,通过CTAB和SDS 2种方法对番茄基因组DNA提取进行了比较研究。结果表明：2种方法均能提取完整且纯度较高的DNA,所得DNA用于PCR反应可得到清晰的扩增条带。     

一种适于PCR检测病毒诱导基因沉默番茄植株的微量DNA提取方法

【研究目的】为了寻找一种适用于病毒诱导的基因沉默番茄叶片PCR检测的快速、简单、成本低的DNA提取方法。【方法】笔者根据PCR反应的要求,用改良的CTAB法,实现了微量番茄叶片基因组DNA的快速提取。【结果】提取基因组DNA所用的组织量虽少,所得的DNA经过电泳检测虽有降解,但足以用于PCR检测,以其作模板扩增中国番茄黄化曲叶病毒诱导的硫黄素酶(Su)基因沉默植株中病毒组分中的DNAmβ和1.7A,片段大小分别为500bp、1300bp。测序结果证明是相应基因的部分片段。【结论】该方法的材料不需要使用液氮,可以单人大批量提取,并在基因沉默的番茄植株中能稳定而准确的规模化PCR检测。     

碱裂解法快速提取番茄DNA的研究

以转基因番茄MM-R3a的嫩叶、子叶、下胚轴和根为试验材料,用碱裂解法快速提取番茄总DNA并用于PCR扩增.结果表明,以番茄子叶和幼嫩叶片为材料,使用该方法提取的DNA纯度和质量浓度相对较高,以稀释10倍～30倍的DNA为模板的PCR结果相对稳定.     

高质量加工番茄基因组DNA提取方法的改进

加工番茄在生长过程中会富积大量的多糖、蛋白质和其他次生代谢物质,采用文献报道的方法不易提取(高质量的)DNA或提取的DNA溶液容易降解.采用改进的CTAB法,提取加工番茄幼嫩叶片和老叶片的基因组DNA,经紫外分光光度计和凝胶电泳检验,提取到的DNA纯度高、完整性好,PCR扩增能得到明显的多态性谱带,可直接用于后续相关试...     

番茄基因组DNA不同微量提取方法的比较及适用性分析

为了探究不同基因组DNA提取方法在生物学试验中适用性问题，采用5种方法提取番茄基因组DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳、微量紫外分光光度计、聚合酶链式反应（PCR）比较提取的DNA浓度、质量及适用性。结果显示，碱裂解煮沸法成本低、操作简便，但所提取的DNA浓度最低，质量最差，只适合一般PCR检测试验；SDS冰浴法和改良的CTAB法操作步骤多、程序复杂，提取的DNA浓度和质量好，通用性最强，但所用试剂具有毒性；高盐低pH法和PVP-40法操作简单，提取的DNA浓度和质量较好，具有一定的通用性，且所用试剂无毒，建议一般性的生物学试验可优先考虑这两种方法。     

以PCR鉴定转基因番茄植株的微量DNA提取方法

微量DNA提取法是目前以PCR法鉴定转基因番茄植株T1代单株幼苗的一种简便、快速、有效的方法.该方法需约1 h即可完成植物DNA的提取,样品用量仅为30-100mg,产量可达30-80μg/g,粗提DNA(溶于10μlTE缓冲液)不必经过纯化,用TE缓冲液稀释5-10倍即可直接用于PCR分析.     

雌根结线虫DNA的提取方法

从番茄的根结中挑取雌根结线虫,通过WLB法提取其DNA.结果显示,用该方法提取的雌根结线虫DNA条带整齐单一,可用于后续PCR反应.     

以PCR鉴定转基因番茄植株的微量DNA提取方法

微量DNA提取法是目前以PCR法鉴定转基因番茄植株T1代单株幼苗的一种简便、快速、有效的方法。该方法需约1h即可完成植物DNA的提取，样品用量仅为30-100mg，产量可达30-80μg／g，粗提DNA(溶于10μlTE缓冲液)不必经过纯化，用TE缓冲液稀释5-10倍即可直接用于PCR分析。     

罗非鱼幼鱼肠道微生物基因组DNA的提取

以提取幼鱼肠道微生物总DNA的浓度、OD260/280、及对ERIC—PCR和PCR—DGGE指纹图谱的影响作为判断依据,比较了3种不同幼鱼肠道微生物总DNA的提取方法。结果表明方法2提取的总DNA的浓度明显高于方法1和方法3;3种方法获得总DNA的纯度相似,OD260/280在1．8～1．9间;对ERIC—PCR和PCR—DGGE指纹图谱分析表明,3种方法中方法2提取的DNA最能反映出幼鱼肠道微生物的多样性。     

柑橘黄龙病病原DNA提取方法比较

【目的】筛选出一种快速高效获取柑橘黄龙病病原DNA的提取方法,为黄龙病亚洲种病原的检测奠定基础。【方法】选取5份疑似黄龙病症状柑橘叶片样品,分别采用4种试剂盒（快捷型基因组DNA提取系统、新型植物基因组DNA提取试剂盒、植物基因组DNA提取试剂盒、快速DNA提取扩增套装）及CTAB法提取柑橘叶脉基因组DNA,并用柑橘黄龙病亚洲种的16S rDNA特异引物fD1/fD2和OI1/OI2c进行PCR扩增,DNA提取产物及PCR扩增产物在1%琼脂糖凝胶电泳上检测。【结果】快捷型基因组DNA提取系统获得的DNA质量最好,植物基因组DNA提取试剂盒和CTAB法提取DNA方法提取得到的DNA质量较好,新型植物基因组DNA提取试剂盒所获得的DNA质量较差,快速DNA提取扩增套装所获得的DNA质量最差。除快速DNA提取扩增套装外,其余4种DNA提取方法均扩增出黄龙病亚洲种病原。【结论】快捷型植物基因组DNA提取系统试剂盒操作简单快捷,耗时短,提取的DNA效果较好,能够满足黄龙病病原PCR检测的要求。     

快速提取玉米DNA方法的研究

[目的]为了探索一种快速、简便,能够用于SSR分析的玉米DNA提取法。[方法]采用改进的常规DNA提取法和DNA快速提取法提取玉米种子胚和黄化苗叶片中的DNA,进行SSR分析,通过琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳对SSR产物进行检测。[结果]用常规法提取时,用氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提1次就可获得质量好和浓度高的DNA;无须抽提,直接吸取上清液,可得到高浓度的DNA,也能满足SSR分析的需要;同样的提取法,SDS的提取效果比CTAB好。对快速提取法进行分析表明,相同的提取液和提取方法,采用种子胚提取的DNA浓度和质量明显高于叶片DNA。[结论]该研究为SSR在玉米种质及纯度鉴定上的应用提供了技术上的保证,有利于该项技术的普及和推广。     

4种高粱基因组DNA快速提取方法的比较

[目的]寻找快速、简单、成本低的高粱基因组DNA提取方法。[方法]首先,分别使用液氮研磨法、缓冲液研磨法、烘干研磨法和直接研磨法这4种方法从高粱叶片中提取基因组DNA,然后,通过凝胶电泳、SSR分析和SRAP分析检测所提DNA的浓度和纯度。[结果]采用4种方法提取高粱基因组DNA时的产量相差不大;采用前2种方法提取的DNA降解少,纯度高,可进行有效的SRAP-PCR和SSR-PCR,但缓冲液研磨法的SRAP-PCR结果稍差;而采用后两种方法提取的DNA降解严重,纯度低,但可进行有效的SSR-PCR。[结论]采用4种方法均可在短时间内提取到足够几十次PCR反应的高粱基因组DNA,液氮研磨法和缓冲液研磨法所提取的DNA应用范围更大,而烘干研磨法和直接研磨法所提取的DNA只能用于对片段较小的目的DNA进行特异性PCR。     

4种高梁基因组DNA快速提取方法的比较

[目的]寻找快速、简单、成本低的高粱基因组DNA提取方法。[方法]首先,分别使用液氮研磨法、缓冲液研磨法、烘干研磨法和直接研磨法这4种方法从高粱叶片中提取基因组DNA,然后,通过凝胶电泳、SSR分析和SRAP分析检测所提DNA的浓度和纯度。[结果]采用4种方法提取高粱基因组DNA时的产量相差不大;采用前2种方法提取的DNA降解少、纯度高,可进行有效的SRAP-PCR和SSR-PCR,但缓冲液研磨法的SRAP-PCR结果稍差;而采用后2种方法提取的DNA降解严重、纯度低,但可进行有效的SSR-PCR。[结论]采用4种方法均可在短时间内提取到足够几十次PCR反应的高粱基因组DNA,液氮研磨法和缓冲液研磨法所提取的DNA应用范围更大,而烘干研磨法和直接研磨法所提取的DNA只能用于对片段较小的目的DNA进行特异性PCR。     

上海牡丹根际土壤DNA提取方法研究

采用玻璃珠-溶菌酶法、蛋白酶K-SDS-热处理法、PVPP-溶菌酶-SDS法等3种土壤DNA提取方法,分别提取上海地区牡丹根际土壤DNA。玻璃珠-溶菌酶法、蛋白酶K-SDS-热处理法提取的DNA,含有大量的杂质,抑制PCR扩增反应,但分别用DNA溶液过柱纯化后不同倍数稀释和凝胶电泳回收纯化,都能扩增出相应的目的条带。PVPP-溶菌酶-SDS法提取的DNA杂质较少,直接用于PCR扩增反应,可以扩增出与预期一致的条带。PVPP-溶菌酶-SDS法不需要纯化,时间较短,可以有效地扩增出预期条带,适合上海地区牡丹根际土壤DNA的提取。     

羌活基因组DNA提取方法

[目的]探索一种用于RAPD分析的羌活基因组DNA提取方法。[方法]分别采取CTAB法S、DS法和改良的CTAB法提取羌活基因组DNA,通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和RAPD分析对提取的DNA进行检测。[结果]3种方法均能有效地从羌活中获得较高产量的DNA,以改良的CTAB法所得的DNA纯度最高,此法提取的羌活基因组DNAOD260/OD280为1.8~2.0,DNA干重得率约为0.235μg/mg。[结论]改良的CTAB法更适于羌活基因组DNA的提取,可以完全满足RAPD扩增的需要。     

一种快速提取野生稻总DNA的方法

在常规CTAB的基础上建立一种快速提取纯化野生稻总DNA的方法，这种快速提取法能在短时间内处理大批量的材料，具有简便、快速、经济、稳定等优点。用这种方法提取的DNA作为模板进行PCR扩增，和用常规的CTAB法提取的DNA作为模板结果一致。因此，用这种方法提取的DNA质量完全可以满足植物分子标记分析的需要。     

TRIS饱和酚一步法提取食用菌DNA

[目的]为探索食用菌子实体DNA的快速提取方法。[方法]以4种广泛栽培的食用菌子实体为材料,采用改进的TRIS饱和酚法提取食用菌基因组DNA,并用琼脂糖凝胶电泳和PCR技术检测提取DNA样品的质量。[结果]获得的食用菌DNA质量较好,能够满足PCR等后续分子生物学试验。[结论]TRIS饱和酚法是一种简单、快速提取食用菌DNA的方法。     

西南桦硅胶干燥叶DNA提取方法比较

采用常规CTAB法、CTAB硅珠法、核分离法、二次抽提法、改良CTAB法对富含多糖的西南桦干叶进行DNA提取,并将DNA进行电泳检测及RAPD分析,结果表明：不同提取方法结果差异较大,CTAB硅珠法得率最低,为0.4～11.6μg/g;核分离法和二次抽提法较常规法去除多糖效果好,得率高;改良CTAB法得率最高,为171.2～364.8μg/g,电泳条带最清晰,RAPD扩增结果最好,适合干叶西南桦基因组DNA提取。     

一种少量提取植物组织DNA的快速方法

为了从植物组织中快速提取核酸,从多种DNA提取方法中遴选出2种基本方法。通过优化基本方法的操作步骤、试剂用量与作用时间,建立了一种改良的DNA快速提取方法。在此方法中,用氯仿代替液氮或提取液进行植物组织研磨,之后加入提取液抽提DNA,并用氯仿-异戊醇反复抽提,可显著降低蛋白质含量;通过应用RNA酶可获得纯度较高的DNA。该方法的特点是在室温下即可进行简便操作,快速(提取核酸的过程仅需30min),污染器皿少,实用性强,提取物产量高,纯度好。     

冷季型草坪草基因组DNA的提取方法比较

采用SDS法、热CTAB法、高盐低pH法和改进CTAB法分别提取高羊茅(Festuca arundinoceaSchreb.)、草地早熟禾(Poa pratensis L.)和多年生黑麦草(Lolium perenne L.)3种冷季型草坪草基因组DNA.结果表明,改进CTAB法为最佳的提取方法,分离的DNA产率高、纯度高、质量高,经纯化后电泳检测带型清晰.RAPD扩增显示,用该快速、简便、有效的方法提取的基因组DNA能扩增出清晰易辨的带型.