春兰根内生细菌分离培养方法的初步研究

探讨了春兰根表面灭菌的最佳条件,以及改良察氏琼脂、淀粉铵营养琼脂、YG、R2A、LB、金氏、TSA和根系分泌物8种培养基对春兰根内生细菌的分离效果。结果表明:春兰根的最佳表面灭菌条件为:75%乙醇浸泡3 min,3%次氯酸钠溶液处理2 min,75%乙醇浸泡30 s,最后用无菌水冲洗。不同培养基对内生细菌的分离存在一定差异,R2A培养基和根系分泌物培养基分离出的内生细菌数量较多,而YG培养基和R2A培养基分离出的内生细菌种类总数最多。此8种培养基对春兰根内生细菌的优势菌群的分离效果是相同的。研究结果可为选择合适的表面灭菌条件及培养基分离兰花内生细菌提供参考。     

毛竹内生细菌分离培养基的选择

采用稀释涂布法分离毛竹内生细菌,选用的基础培养基有LB培养基、TSA培养基、金氏培养基、淀粉铵培养基、改良察氏培养基;寡营养培养基有0.1×LB培养基、YG培养基、R2A培养基,以确定用于分离毛竹内生细菌的适宜培养基。在8种培养基中,YG培养基、金氏培养基和R2A培养基分离得到的细菌数量较高,分别为1.31×106、8.03×105和6.45×105CFU/gfw;依据菌落形态种类,R2A培养基分离到的内生细菌种类最多8种,其次YG培养基和金氏培养基均为7种。对分离得到的优势菌株进行16SrDNA序列测定,LB培养基、TSA培养基、YG培养基、R2A培养基、金氏培养基、淀粉铵培养基和改良察氏培养基分离得到的优势菌株与Mycoplana ramosa相似性最高,均为91%;而0.1×LB培养基分离得到的优势菌株与Leifsonia poae相似性最高,为99%。由此可知,0.1×LB培养基分离得到的优势菌株为Leifsonia poae,其他7种培养基分离得到的优势菌株为Mycoplana sp.。结果表明,采用R2A培养基,YG培养基和0.1×LB培养基分离毛竹内生细菌,可以达到较为理想的分离效果。     

罗非鱼海豚链球菌的分离鉴定及药敏试验

为明确广东佛山某罗非鱼鱼场暴发疑似链球菌病的病原情况,应用脑心浸液培养基、胰蛋白大豆琼脂 培养基对患病罗非鱼的肝、胆组织进行细菌分离,对获得的革兰氏阳性链球菌应用16S rDNA 引物进行基因序列鉴 定,并对被确定的链球菌进行基因进化分析,同时进行阿奇霉素、链霉素、阿米卡星等10 种抗生素的药敏试验。结果 表明,分离获得革兰氏阳性链球菌1 株,经16S rDNA 基因扩增鉴定为海豚链球菌;基因进化分析显示,该菌与海豚 链球菌和禽的副乳链球菌亲缘关系最近;药敏试验结果显示,该菌对阿奇霉素和头孢噻肟中度敏感,对其他抗生素 不敏感。     

水葫芦内生细菌的分离与鉴定

采用20种不同培养基分离水葫芦内生细菌,利用细菌脂肪酸鉴定技术对水葫芦的内生细菌进行鉴定,研究了水葫芦内生细菌的种类及群落结构.结果表明,共得到32个属56株内生细菌,种类最多的是微杆菌属(Microbacterium),共有9种细菌.其次为假单胞菌属(Pseudomorms),共有7种细菌.芽孢杆菌属(Bacillus)有 5种细菌.其余23个属均有1种.利用优势度指数分析各培养基分离到内生细菌的多样性,10号葡萄糖、酵母、淀粉琼脂培养基优势度指数为0.160 7,分离得到内生细菌种类最多为9种;其次是4号根瘤菌培养基和11号NA培养基的优势度指数为0.125 0,分离得到的内生菌种类均为7种;16号黄豆芽汁培养基(pH7.2～7.4)和20号醋酸菌培养基,优势度指数为0.089 3,分离获得内生细菌均为5种.     

招财鱼红斑病病原——诺卡氏菌的分离与鉴定

用胰胨大豆琼脂培养基和罗氏培养基从招财鱼的肝脏、肾脏上分离到一种的细菌,通过细菌的生化鉴定来鉴定分离的细菌是本病的病原菌为星状诺卡氏菌,为淡水鱼类诺卡氏茵病原的分离鉴定研究打下了基础。     

食用菌最佳母种培养基的筛选

对大球盖菇、金福菇和鲍鱼菇3种珍稀食用菌进行了母种培养基筛选试验.结果表明:大球盖菇的最适母种培养基为马铃薯-黄豆-葡萄糖-琼脂培养基和小麦-葡萄糖-琼脂培养基,金福菇的最适母种培养基是燕麦粉-麦芽糖-酵母-琼脂培养基,鲍鱼菇的最适母种培养基是麦芽糖-琼脂培养基.     

利用芦笋老茎栽培鲍鱼菇和秀珍菇研究

分别比较了在马铃薯葡萄糖琼脂培养基、马铃薯葡萄糖蛋白胨琼脂培养基、马铃薯葡萄糖蛋白胨维生素琼脂培养基、马铃薯葡萄糖玉米琼脂培养基和马铃薯葡萄糖蛋白胨综合培养基上鲍鱼菇和秀珍菇母种的生长情况,从菌落边缘、菌丝密度、颜色以及菌丝的生长速度等方面进行综合评价;同时,分别设计了以芦笋老茎为主料,棉籽壳、麸皮、豆饼为辅料的不同配方培养料,进行了鲍鱼菇和秀珍菇的袋栽试验。结果表明,马铃薯葡萄糖蛋白胨综合培养基是培养鲍鱼菇和秀珍菇母种的最适培养基;添加不同的辅料对鲍鱼菇和秀珍菇的产量有明显的影响;以芦笋老茎为主料、添加棉籽壳和麸皮的培养料能使鲍鱼菇BH,BS菌株和秀珍菇C,D菌株获得较高的产量。     

鸭疫默里氏杆菌的分离鉴定及其部分生物学特性研究

从采自湖北省不同地区规模化鸭场的鸭传染性浆膜炎疑似病例肝脏中分离到12株细菌,进行了细菌形态观察、培养特性和生化特性鉴定。结果显示,分离到的细菌均为两极着色的革兰氏阴性短小杆菌;在普通培养基和麦康凯培养基上不能生长,胰蛋白大豆琼脂培养基上生长旺盛;生化鉴定结果显示,分离的菌株不能发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、乳糖、甘露醇和山梨醇,靛基质、VP试验、硝酸盐还原试验、硫化氢产生、甲基红试验均为阴性,触酶、氧化酶试验为阳性。结果表明分离的12株细菌均为鸭疫默里氏杆菌（Riemerella anatipestifer）。耐药谱试验显示,分离的菌株对头孢噻呋钠、阿米卡星高度敏感,其次为环丙沙星、强力霉素、诺氟沙星、氟苯尼考、庆大霉素,对四环素、青霉素、红霉素、卡那霉素不敏感。     

大丽轮枝菌Nit突变体产生及其营养亲和性测定

从DNA限制性酶切多态性(RFLPs)的A组和B组中选用了具代表性的7个大丽轮枝菌菌系作营养亲和性测定.病菌分别接种在含氯酸钾15～25g/l的基本培养基(MM)、梅干培养基(PLA)、玉米粉琼脂培养基(CMA)和马铃薯葡萄糖培养基(PDA)上,从中获得了41个不能还原利用硝酸钠作为唯一氮源正常生长的突变体(Nit).Nit突变体以PDA和PLA含氯酸钾20～25g/l的两种培养基上发生频率较高.根据对不同氮源利用生长情况,获得了Nit突变体5种生理表现型.以Nit1居多(50%～100%),其次为NitM(0～50%).表现型互补的Nit1与NitM突变体营养亲和性测定结果表明,测试菌系可划分为VCG01和VCG02两个营养亲和群,分别含RFLPsA组的4个菌系和B组的3个菌系.     

香菇高产栽培技术

一、菌种配制适宜 香菇一级种的培养基配方是：马铃薯250克、葡萄糖25克、琼脂20克、清水1000毫升，或者是黄豆粉40克、葡萄糖20克、琼脂20克、清水1000毫升。     

花生黑腐病菌的生物学特性

在实验室条件下观察了花生黑腐病菌(Cylindrocladium parasiticum)的菌丝生长和产孢等生物学特性.结果表明:花生黑腐病菌在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)、V-8汁(v8)、酵母蛋白胨葡萄糖(YPDA)、燕麦琼脂(OMA)和合成真菌(SF)等培养基上均能生长,其中以燕麦琼脂培养基最适宜菌丝生长,而V8汁...     

茶树内生真菌的分离条件

从茶树里分离出内生真菌,对分离条件进行初步的研究,确定了3%的次氯酸钠作为其主要的表面消毒剂,成熟叶片表面消毒的最佳时间为5 min;采用PDA为一般培养的最适培养基.对所获得的菌株进行纯化,根据描述的菌种特征,索引分析相关文献,鉴别出优势内生真菌分别属于球座菌属(Guignnatdia sp.)、拟盘多毛孢属(Pes...     

一种降解秸秆的丝状真菌的分离和定性方法

建立了一种新的简单的分离秸秆降解丝状真菌的方法,用此方法从东北寒地黑土中分离出真菌56株,其中丝状真菌46株.这种分离方法简述为:先用土壤或者堆肥浸渍秸秆至接近腐烂,再用酒精对接近腐烂秸秆进行表面灭菌,最后用土豆葡萄糖琼脂培养基培养并分离秸秆中微生物,这样分离的微生物大多为产丝真菌.用添加或者不添加硝酸铵、酵母粉和黑土浸液等辅助物的秸秆粉制成不同培养基,这些培养基用来比较其对分离的微生物的生长的影响.结果表明,同一微生物在不同培养基中生长区别很小,同一培养基不同微生物生长区别较大.选择了只含秸秆粉而不添加辅助物的培养基作为微生物是否降解秸秆的定性培养基,对分离的56株真菌以水稻、大豆和玉米3种秸秆进行降解定性鉴定,结果显示:该方法筛选的46株丝状真菌都能降解3种供试秸秆.     

松萝地衣体共生菌的分离纯化及抗细菌活性的初步筛选

[目的]分离筛选具有抗菌活性的松萝地衣体共生菌[方法]在确定松萝地衣体共生菌分离最佳步骤的基础上,采用2种培养基进行分离和纯化。采用滤纸片法测定分离物3种不同培养基的发酵液对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌的抑制效果。[结果]经5%次氯酸钠浸泡90 s对松萝地衣体表面消毒后,采用PDA培养基分离出的松萝地衣体分离物多样性比MEA培养基分离出的好;分离得到的6株分离物均对供试菌具有一定抑制作用,但不同成分的发酵培养基对同一株菌的发酵产物活性有一定影响。[结论]分离得到的松萝地衣体分离物具有良好的抗菌活性,从松萝地衣体分离物中寻找杀菌活性物质是很有研究价值的。     

蛇足石杉体内抑制乙酰胆碱酯酶活性物质的内生真菌的分离

[目的]从蛇足石杉体内分离筛选出具有体外抑制乙酰胆碱酯酶活性的内生真菌。[方法]取野外采集的蛇足石杉的叶、茎和根进行表面消毒后接种于PDA培养基,分离出内生真菌后进行摇瓶发酵,超声提取其发酵产物,以DTNB法检测其发酵产物在体外抑制乙酰胆碱酯酶的活性。[结果]从根、茎、叶中分离得到194株内生真菌,在马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)中发酵后,对内生真菌发酵提取液进行体外AChE抑制活性检测;共有31株内生真菌显示出体外AChE抑制活性,抑制活性较强的有13株,抑制率在50.2%～80.5%。其中从蛇足石杉茎部位分离得到9株,叶部位分离得到4株。[结论]从蛇足石杉体内可分离出内生真菌,该内生真菌的发酵产物在体外有较强的抑制乙酰胆碱酯酶活性,这可能是寻找乙酰胆碱酯酶抑制药物的有效途径之一。     

灰树花的培养特性与液体菌种栽培技术

将从河北省迁西县购入的灰树花菌株迁西二号,分别在PDA培养基、马铃薯半组合培养基和MEA平板培养基上研究灰树花菌丝体的培养特性,并在哈尔滨地区对其进行了用液体菌种代替固体原种的栽培技术研究,包括一级种培养基的筛选、液体菌种培养基的筛选、栽培种制作与培养及出菇管理技术。培养特性的研究结果表明,灰树花在不同的培养基上宏观和微观培养特性各有不同:菌体在PDA和马铃薯半组合培养基上都能够产生细胞外酚氧化酶,说明灰树花是一种白腐菌;菌丝在PDA和马铃薯半组合培养基上生长旺盛,浓密,白色,绒毛状至絮状,菌落厚;在MEA培养基上生长较弱,气生菌丝体较稀疏。菌体在3种培养基上产生的微观特征包括多数为简单分隔、少数为节状分隔的薄壁菌丝、厚壁的纤维菌丝、圆形至椭圆形的厚垣孢子以及八面体形的晶体等结构。灰树花液体菌种栽培的结果表明:一级试管斜面菌种,灰树花在马铃薯综合培养基上生长良好,菌丝粗壮;二级液体菌种在马铃薯-葡萄糖-蛋白胨液体培养基上生长较好,10d时菌丝长满培养液,菌丝量也较多。由于采用了液体菌种的栽培模式,从制种到采收的整个过程共需要75~80d,生产周期比二级种为固体原种的常规方法缩短了40~50d,能显著地提高经济效益。     

丰林自然保护区腐殖质层真菌组成和分布

对小兴安岭丰林自然保护区白桦红松林、椴树红松林、枫桦红松林、云冷杉红松林、红松纯林5种林型的腐殖质层真菌进行取样调查.采用稀释平板法,选用马铃薯琼脂(PDA)和孟加拉红(RBC)培养基分别进行真菌的分离,并用马铃薯琼脂培养基进行纯化培养,共得到926个真菌菌落,进一步分离、纯化后得67个真菌菌株.分别采用麦芽汁琼脂(M...     

不同地区小麦纹枯病菌的生物学特性及种类鉴定研究

为明确江苏、安徽、河南等省小麦纹枯病菌的种类及生物学特性,2008年从江苏省扬州市、高邮市、仪征市、安徽省六安市及河南省临颖县、温县采集并分离纯化得到30株小麦纹枯病病原菌,从中选择6个代表性病原菌进行了生物学特性及种类鉴定研究。结果表明:所有病原菌在pH在4～9内均可以生长,以pH为5时生长速度最快;生长温度为20～25℃,其中以22.5℃最适;在不同培养基上的生长速度由大到小依次为:PSA培养基、PDA培养基、改良PDA培养基、查彼培养基、玉米粉培养基。高邮纹枯病菌生长最快,菌丝较粗;扬州、仪征、临颖和温县纹枯病菌生长相对较慢,菌丝较细、稀疏;六安纹枯病菌生长最慢,菌丝较粗,稍密。番红O-KOH染色结果表明,扬州、仪征、临颖和温县纹枯病菌为双核丝核菌,高邮和六安纹枯病菌为多核丝核菌。丝核菌专化性PCR检测结果表明扬州、仪征、临颖和温县菌株为禾谷丝核菌。