嗜水气单胞菌β-hemA重组菌表达产物ISCOMs的研制

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌PCB的培养上清液经硫酸铵梯度沉淀粗提毒素蛋白质,并在pH 2.5的柠檬酸缓冲液里酸化处理以暴露其疏水区,经Mega-10裂解后与Quil A结合制备ISCOMs,电镜下可观察到30～40 nm的多面体的笼格状颗粒结构.经鳗鱼的免疫保护试验证实,ISCOMs组(每尾40～80 μg)保护率高达100%,同剂量的溶血素+弗氏佐剂组可达62.5%,未加佐剂的溶血素只有50%.     

中华鳖细菌疫苗免疫佐剂的筛选及其初步应用

将分离自中华鳖Trionyx sinensis主要细菌性疾病—肠道出血性败血症、鳖穿孔病（疖疮病）、红脖子红底板病、鳖腐皮病的4株病原菌，在体积分数为3．5％的福尔马林溶液中灭活24h。在灭活的4株菌中添加不同佐剂，充分混匀后分别制备成总含菌量为6×10^9个／mL的4价菌苗，分别免疫8只ICR小鼠，并设不加佐剂免疫组及空白组作为对照。经3次免疫后，随机选3只小鼠抽血制备血清，用间接ELISA方法测定抗体效价，除空白对照组外，其它4组小鼠的免疫血清效价为1：1．6×10^4-1：2．56×10^5，各免疫组的效价依次为弗氏佐剂〉白油佐剂〉蜂胶佐剂〉不加佐剂。另外5只小鼠用于免疫保护性试验。结果表明：3种佐剂的免疫保护率均为100％，而不加佐剂组免疫保护率为80％，空白对照组死亡率为100％。考虑到弗氏佐剂的成本较高且白油佐剂有副作用，故选择蜂胶作为免疫佐剂，制备了中华鳖4价菌苗。用该菌苗免疫接种50只体重为100～150g／只的健康中华鳖，注射剂量为0．2mL／只，并设置对照组（注射等量的生理盐水），共接种20只健康中华鳖。分别于免疫后第20、30、40、50天随机采集3只受免疫的中华鳖和对照组的1只中华鳖血液并制备血清，用浙江省淡水水产研究所制备的针对中华鳖IgM的单抗3H3介导的ELISA方法，测定血清中的抗体效价。结果表明：当中华鳖免疫后40d，血清中抗体效价达到最高，为1：6．4×10^4；免疫后50d将受免中华鳖分成4组，分别用4种菌株以5LD50（9×10^6个／mL）进行攻毒试验（0．5mL／只），结果免疫保护率均达到100％，而对照组死亡率均为100％。     

欧鳗源嗜水气单胞菌β-溶血素基因序列分析

对克隆的欧鳗源嗜水气单胞菌β一溶血素基因AHL316HEM进行序列和结构分析表明，AHL316HEM基因读码框架全长为1482bp，编码长度为493个氨基酸的蛋白，分子量为54．2kD，等电点为5．625，读码框架内有一个EcoRI酶切位点。AHL316HEM从起始位点至第23个氨基酸残基形成一明显疏水区，可能构成信号肽，其抗原位点大部分都在亲水区，不具穿膜性。同源性分析表明，AHL316HEM基因编码的氨基酸序列与已报道的嗜水气单胞菌溶血素基因(accessionNo．BAA83088)的同源率为98％，与斑点气单胞菌溶血素基因(accessionNo．U40711)、温和气单胞菌溶血素基因(accessionNo．AF443393)的同源串分别为84％和72％，与霍乱弧菌溶血素基因(accessionNo．AF540655)、副溶血弧菌溶血素基因(accessionNo．VIBTRH2A)、金黄葡萄球菌β—溶血素基因(accessionNo．S72497)的同源性分别为7％、5％和4％。这一结果提示，气单胞菌属内各菌种的溶血素基因可能有共同的起源。     

H5N1亚型禽流感油佐剂疫苗安全性试验研究

通过对H5N1亚型禽流感油佐剂疫苗的急性毒性试验、眼结膜刺激试验、肌肉刺激试验与溶血试验研究，评价其安全性。急性毒性试验：取AA+肉鸡70只，随机分成7组，设为高剂量疫苗组与佐剂组，中剂量疫苗组与佐剂组，低剂量疫苗组与佐剂组，空白对照组。眼结膜刺激试验：取兔12只，随机分成2组，为疫苗组和佐剂组，采用自身对照法，观察兔...     

不同因素对抑制素基因免疫肉牛反应性的影响

为探讨佐剂、质粒纯度和免疫次数3种因素对抗抑制素抗体效价的影响，以分析抑制索基因免疫是否使内牛产生免疫应答，利用已构建的抑制索真核融合表达质粒pCISI对内牛进行了免疫试验．结果表明，抑制素pCISI基因免疫内牛后佐剂处理组比无佐剂组免疫效果明显．对抗体P/N（待测血样的吸光值P与阴性血样吸光值N的比值）来说，普鲁卡因佐剂显著优于脂质体，但就抗体阳性率来说，普鲁卡因和脂质体差异不显著．无论是抗体P/N值还是抗体阳性率，高纯度组的效果略高于低纯度组，但差异不明显．随着免疫次数的增加抗体P/N值和抗体阳性率均升高，两者差异显著，说明了抑制素基因免疫内牛可诱导产生抗抑制素抗体，纯度对抗体的产生和抗体阳性牛比例没有影响，但免疫佐剂与免疫次数有影响．     

农用抗生素S-921摇瓶发酵条件的研究

比较系统地研究了S-921菌株产素的发酵条件，筛选出了产素水平较高的发酵条件。研究结果表明：S-921菌株产素的最适发酵条件为种龄36～40h，接种量10％-15％，初始pH值为7．0～7．5，初糖2％，28-25℃变温培养，最高效价达到7627μg／ml。     

生姜茎尖的离体培养研究

用不同生姜品种竹姜与黄姜幼嫩根茎经高温预培后，剥取茎尖分生组织在MS 1．0mg／L 6-BA 0．5～1．0mg／LNAA培养基上进行离体培养，30～40d后分化出1．9个小芽,此时将细胞分裂素6-BA浓度增加到2．0～3．0mg／L，培养30d小芽增殖4．2个以上。生长素NAA是培育壮苗的重要激素，移栽苗成活率达90％以上。     

细菌DNA和gm-csf基因对抑制素基因免疫的作用

40只小鼠分为4组,分别注射pC ISI(抑制素质粒)、pC ISI+细菌DNA、pC ISI+pGM-CSF和生理盐水(8.5 g.L-1)。pC ISI剂量为20μg,与佐剂等量混合,2周后加强免疫1次。试验结果表明,细菌DNA佐剂组诱导77.8%(7/9)的个体产生了抑制素阳性抗体,抗体以IgG2α型为主,gm-csf佐剂组产生的抗体以IgG1型为主;基因佐剂联合抑制素基因免疫激发的淋巴细胞增殖能力显著高于抑制素基因单独免疫组(P<0.05);细菌DNA佐剂组阳性鼠的动情期血浆雌二醇高于阴性鼠(P<0.05),免疫对动情期孕酮水平无显著影响(P>0.05)。上述结果表明,细菌DNA和gm-csf能增强抑制素基因的免疫效果。     

饲料中蛋白&#183;钙&#183;磷水平对生长期固始白鹅日增重的影响

[目的]研究饲粮蛋白质、钙、磷添加水平对生长期固始白鹅日增重的影响。[方法]将270只生长期固始白鹅随机分成9组，每组10只，各设3个重复，其饲粮采用蛋白水平为12．4％～14．5％、14．5％～15．5％、15．5％～17．4％，钙水平为0．7％、0.8％、0．9％，磷水平为0．30％～0．39％、0．40％～0．41％、0．50％～0．52％采用3因素3水平正交设计，比较每组日增重。[结果]结果表明：不同蛋白质水平对生长期固始白鹅日增重影响极显著（P〈0．01），以15．2％（第4组）和15．5％（第5组）蛋白水平增重速度最快，料重比最低；高钙低磷（第5组）水平对日增重影响同样极显著（P〈0．01），但不如蛋白水平影响大；中低钙水平对生长期固始白鹅日增重影响差异不显著（P〉0．05）。[结论]生长期固始白鹅饲粮适宜的蛋白质添加水平为15．2％～15．5％。     

三种植物性杀虫剂对菜青虫的毒效

为了解闹羊花素-Ⅲ，印楝素和鱼藤酮对菜青虫的作用方式，采用叶碟法和叶碟饲喂法，室内测定了这3种植物杀虫剂对菜青虫的非选择性拒食活性和毒杀活性．结果表明，0．1％闹羊花素-Ⅲ乳油对菜青虫的拒食活性和毒杀活性均强，而0．3％印楝素乳油和2．5％鱼藤酮乳油对菜青虫的拒食活性分别是毒杀活性的185.44倍和13．78倍,盆栽试验结果显示，0．1％闹羊花素-Ⅲ乳油2000-6000倍液对菜青虫有较好的毒杀和保叶效果，药后1～3d菜青虫的死亡率为92．45％～100％，第3天的保叶效果为96．63％-98．18％；0．3％印楝素乳油1000～200HD倍液药后1d对菜青虫的毒杀作用效果较差，菜青虫死亡率仅为20．00％-34．00％，但第3天的保叶效果较好，为91-34％～96．13％；500～1500倍液2．5％鱼藤酮乳油对菜青虫的毒杀和保叶效果均差．