桐城小花茶多糖的提取工艺和分离纯化

采用正交试验优化桐城小花茶多糖的提取工艺[三氯乙酸(TCA)脱蛋白,DEAE C-52纤维素柱层析、Sepha-dex G-100凝胶柱层析纯化茶多糖,紫外全波段扫描和红外光谱分析纯度和性质].结果表明:料液比1:20,浸提温度60℃,浸提3 h,浸提2次,为茶多糖提取最优条件;三氯乙酸浓度在3.5%时,除蛋白效果最好;凝胶柱层析纯化后的茶多糖不含核酸或蛋白质等其他组分;红外图谱显示,在500-4000 cm-1区具有多糖类物质的一般特征吸收峰.     

太白贝母多糖分离及结构表征

利用水提醇沉得到太白贝母粗多糖之后,依次采用AB-8型大孔吸附树脂吸附、透析袋透析、二乙基氨基乙基(diethylaminoethyl, DEAE)弱碱性阴离子交换纤维柱层析对太白贝母多糖进行纯化,之后利用葡聚糖凝胶G-100柱层析法测定太白贝母多糖的相对分子质量,利用硅胶薄层层析法,气相-质谱联用法以及傅里叶红外光谱法分析研究太白贝母多糖中单糖的组成类型以及结构特点.结果表明太白贝母多糖经过DEAE纤维素柱纯化洗脱后,至少得到3个分离的洗脱峰,其中NaCl洗脱液洗脱多糖葡聚糖凝胶G-100层析柱洗脱V_e/V_o的比值为1.07;薄层层析结果显示太白贝母多糖水解物的Rf值为0.39,与D(+)-半乳糖的Rf值(0.38)迁移率接近,并且显色接近一致(均为蓝色);太白贝母多糖水解物GC-MS出峰时间(1.522 min)与D(+)-半乳糖出峰时间接近(1.520 min),并且主要m/z碎片信息接近为147.1和75.0.红外光谱特性分析研究,显示其在1 100～1 010 cm~(-1)之间有3个强吸收峰(1 050 cm~(-1 ), 1 027 cm~(-1 ), 1 003 cm~(-1 )),此为吡喃糖苷的特征吸收峰;在827 cm~(-1 )处有吸收峰,而在890 cm~(-1 )处无吸收峰,此为α-型糖苷键链接特征.可见太白贝母NaCl洗脱液洗脱的多糖相对分子质量约为2×10~6,多糖的主要组成单糖类型是D(+)-半乳糖,属于α-型吡喃糖.     

可德兰多糖的分离纯化和化学结构分析

用酸碱法从产碱杆菌突变株C125的发酵液中提取Curdlan粗多糖样品CD-1,经Sevage法脱蛋白、纤维素柱层析脱色后,用Sephadex G-100凝胶层析柱分离纯化得多糖CD-2.紫外分光法及Sephadex G-200凝胶柱层析法检测CD-2为均一多糖,Sephadex G-200柱层析测得CD-2的分子量为65300Da,完全酸水解后纸层析检测CD-2的单糖组成中仅有葡萄糖,分析CD-2的红外光谱、核磁共振谱得知CD-2多糖的化学结构是以β-(1,3)糖苷键连接而成的无分枝的葡聚糖.     

白术多糖的提取、分离纯化及分子量的测定

采用复合酶法对白术多糖进行提取,经过Scrag法脱蛋白、H2O2除色素,再过DEAE纤维素柱层析得到纯品白术多糖;经常压凝胶柱色谱法和高效液相凝胶色谱(High performance gel penetration chromatography,HPGPC)法证明白术多糖为均一多糖,红外谱图初步分析可知该白术多糖有多糖特征吸收峰,凝胶渗透色谱法(Gel penetration chromatography,GPC)测定其分子量(Mw)为4 360 Da.     

香菇多糖的纯化和结构分析

香菇中提取到的水溶性粗多糖,用Ｓｅｖａｇ法结合酶法去蛋白,透析,甲醇分级得到２个多糖级分,分别命名为Ｌｅｎ１和Ｌｅｎ２。去蛋白后多糖经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤层析纯化得精品多糖Ｌｅｎ３,经纸层析及凝胶过滤层析表现单一区带或单一峰。经酸水解后纸层析和气相色谱分析表明Ｌｅｎ２含甘露糖、葡萄糖,摩尔比为甘露糖：葡萄糖＝１０．５０：１．００,Ｌｅｎ３含木糖、甘露糖、葡萄糖,摩尔比为木糖：甘露糖：葡萄糖＝０．６７：２．４５：１．００。２００￣４００ｎｍ紫外扫描,无核酸和蛋白吸收峰。４０００￣６５０ｃｍ＾－１红外光谱扫描,呈多糖类特征吸收峰。     

香菇多糖的纯化和结构分析

香菇中提取到的水溶性粗多糖,用Ｓｅｖａｇ法结合酶法去蛋白,透析,甲醇分级得到２个多糖级分,分别命名为Ｌｅｎ１和Ｌｅｎ２。去蛋白后多糖经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤层析纯化得精品多糖Ｌｅｎ３,经纸层析及凝胶过滤层析表现单一区带或单一峰。经酸水解后纸层析和气相色谱分析表明Ｌｅｎ２含甘露糖、葡萄糖,摩尔比为甘露糖：葡萄糖＝１０．５０：１．００,Ｌｅｎ３含木糖、甘露糖、葡萄糖,摩尔比为木糖：甘露糖：葡萄糖＝０．６７：２．４５：１．００。２００￣４００ｎｍ紫外扫描,无核酸和蛋白吸收峰。４０００￣６５０ｃｍ＾－１红外光谱扫描,呈多糖类特征吸收峰。     

白灵菇胞外多糖的分离纯化及其抗氧化活性的研究

从白灵菇菌株JZ-FH16发酵液中提取胞外多糖,并对该多糖的分离纯化技术、结构和抗氧化活性进行了研究。结果表明,白灵菇胞外粗多糖经DEAE-Cellulose52和Sephadex G-200柱层析后得到主要组成成分PNEP I-a;采用HPLC、Sephadex G-200柱层析、琼脂糖凝胶电泳、红外光谱以及化学反应等方法证明PNEP I-a是一种含有α-D葡萄糖、甘露糖等特征基团的中性纯多糖,其对.OH和O.2-清除率分别为49.50%和47.24%,具有显著的抗氧化活性。     

黄芪多糖的提取分离与光谱分析

对黄芪饮片中的黄芪多糖(APS)采用水提醇沉法粗提,三氯乙酸法除蛋白,活性炭脱色,并用紫外分光光度计、红外光谱仪对所得黄芪多糖进行初步的结构分析。结果表明,APS的收率为3.63%,总糖含量为90.89%。紫外扫描结果显示样品不含核酸和蛋白质。红外光谱显示样品有多糖的一般特征吸收峰,且与标准黄芪多糖的红外谱图一致。     

裸藻多糖的分离纯化、单糖组成及其抗氧化活性

以裸藻为原料,将粗提后的裸藻多糖（EGPS）经DEAE-纤维素和Sephadex G-100柱层析进行分离纯化,得到3个主要组分EGPS1-A、EGPS1-B和EGPS3-A,并对其进行纯度鉴定和抗氧化活性分析,将纯化后抗氧化活性较好的裸藻多糖进行分子量测定、单糖组成分析。纯度鉴定结果表明柱层析后得到的3个多糖组分纯度较高,红外光谱表明其均具有典型的糖类特征吸收峰。抗氧化实验表明3个多糖组分中EGPS1-A的综合抗氧化活性最高,分子量为136.8 ku,单糖组成包括甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖,单糖组分间物质的量比是0.072：0.430：0.049：0.010：0.260：0.620：0.530：0.180：1.010。     

杏鲍菇子实体多糖提取的均匀设计试验

采用均匀设计试验,研究了温度、时间、料液比对杏鲍菇子实体中多糖提取得率的影响,结果显示:提取温度是影响多糖提取得率的主要因素,最佳提取工艺为料液比1:50、温度100℃、时间240min,在此条件下,杏鲍菇多糖提取得率为4.35%;通过乙醇沉淀、透析、DE-52柱层析对提取的杏鲍菇多糖进行纯化,纯化的杏鲍菇多糖经紫外光谱分析不合蛋白质和核酸,最大吸收峰在192 nm.     

山药蛋白酶解液的分离纯化

以山药(Dioscorea opposite Thumb.)为原料,选取碱性蛋白酶酶解山药蛋白粗提物制备山药蛋白酶解液。分别采用纤维素DE-52阴离子交换层析和Sephadex G-50凝胶层析,对酶解制备的山药蛋白酶解液进行分离纯化。结果表明:经过纤维素DE-52阴离子交换层析,得到4个吸收峰,收集每个峰组分,其单位质量的还原能力分别为峰2(P2)>峰1(P1)>峰3(P3)>峰4(P4)。采用Sephadex G-50凝胶分别用蒸馏水和Tris-HCl缓冲液对P1和P2组分继续分离纯化,均能得到2个吸收峰(组分)。     

苦丁茶冬青多糖乙醇分级纯化及其理化性质研究

为了研究苦丁茶冬青多糖醇沉规律及产物理化性质。通过热水浸提和不同浓度乙醇分级沉淀,得到乙醇终浓度为20%、40%、60%和80%的4种苦丁茶冬青多糖组分,即ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4。比色法检测各多糖组分总糖、糖醛酸、蛋白质和总酚含量;高效凝胶渗透色谱法进行相对分子质量的测定;紫外和红外光谱扫描考察各组分的光谱性质。结果表明:ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4总糖含量分别为19.21%、34.91%、37.70%和30.21%,糖醛酸含量分别为5.04%、44.90%、24.20%和5.84%;凝胶渗透色谱图表明:ICP-2和ICP-3为高纯度均一组分,分子量为440.440与348.279 ku;4种多糖组分在280 nm处均有吸收峰,说明均为糖蛋白质化合物。红外结果显示,各组分均为吡喃糖环构型。以上结果表明,乙醇分级沉淀的方法可用于分级纯化制备组分均一、纯度较高的苦丁茶冬青多糖组分。     

超声波对菜豆种子超氧化物歧化酶活性的影响

菜豆种子粗酶液经乙醇-氯仿、丙酮沉淀、DEAE-纤维素柱层析和Sephadex G-75柱层析，获得比活力为127．45U／mg的超氧化物歧化酶(SOD)，该酶活性受H2O2和KCN强烈抑制，经电泳鉴定为3种SOD同工酶，部分纯化的SOD证明为Cu，Zn-SOD，经不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳获得其中1种电泳纯的酶，超声波处理此酶后，酶活力发生改变，适宜的超声波参数能显著提高酶活力，经超声波处理后，SOD的紫外吸收光谱无明显变化，而紫外差示光谱在一定波长范围内出现正峰和负峰。     

新疆芜菁多糖降血糖作用的研究

【目的】检测新疆芜菁多糖的组分结构与对血糖的作用。【方法】采用常规的水提法从芜菁中提取粗多糖,并用Sevag法对其进行脱蛋白,再通过回流、透析等步骤把粗多糖纯化获得芜菁精制多糖。用芜菁精制多糖进行小白鼠血糖实验。对芜菁精制多糖进行DEAE-52离子交换柱层析纯化,对第一个洗脱组分BRPS1再进行Sephadex G-200凝胶柱层析纯度鉴定。此外,用红外光谱法分析BRPS1,并且对离子交换柱层析的7种洗脱组分分别进行了GC-MS分析。【结果】当芜菁精制多糖剂量为400 mg/kg体重时,3 d后的受试小鼠血糖值下降差异显著(P<0.05);6和9 d后的血糖值下降差异极显著(分别是P<0.01和P<0.001);通过DEAE-52离子交换柱层析共分离出7种组分。对第一个洗脱组分BRPS1的Sephadex G-200凝胶柱层析的结果表明,BRPS1是单一的多糖组分;其红外图谱结果表明BRPS1具有多糖的一般结构。对7种洗脱组分的GC-MS分析表明芜菁精制多糖含有6种单糖。【结论】芜菁多糖具有显著的降血糖效果;作为芜菁多糖主要成分的BRPS1为单纯的多糖,具有多糖的一般结构。     

钝顶螺旋藻藻胆蛋白性质的研究

采用羟基磷灰石柱层析法对钝顶螺旋藻藻胆蛋白粗提液进行纯化,得到藻蓝蛋白（PC）和别藻蓝蛋白（APC）纯化液。用紫外-可见分光光度计测得PC和APC的最大可见吸收峰分别在620　nm和650　nm处;用荧光分光光度计测得它们的室温荧光发射峰分别在645　nm和656　nm处。经12% SDS-PAGE法分析,PC由α和β两个亚基组成,其分子量分别为16.3　kD和18.9　kD;APC也由α和β两个亚基组成,其分子量分别为15.0　kD和16.9　kD。用高效液相色谱仪(HPLC)对PC和APC的氨基酸组成作了测定,发现二者的氨基酸组成比较相似。     

牛脑钙调素的分离纯化、鉴定及其免疫原制备

【目的】从牛脑中分离纯化钙调素(CaM),并进行生化鉴定,同时用碳二亚胺法制备CaM偶联免疫原。【方法】以phenyl-Sepharose层析法从牛脑中分离纯化CaM,用PDE法检测其活性,以SDS-PAGE、PAGE检测其分子量并观察CaM有无Ca2+结合时的电泳行为,检测其紫外扫描光谱,同时用交联剂碳二亚胺制备CaM偶联抗原进行动物免疫,并用间接Elisa法检测动物血清免疫效价。【结果】纯化后的CaM对PDE有明显的激活作用,电泳结果显示为均一条带,分子量约为17.3 kDa,在SDS-PAGE中,CaM结合Ca2+时比未结合Ca2+时迁移率快;而在PAGE中,迁移率在结合Ca2+比未结合Ca2+时慢;紫外光谱扫描显示约在251、260、267、272和283 nm有5个吸收峰,动物血清免疫效价为1∶800。【结论】用phenyl-Sepharose层析法纯化CaM和用碳二亚胺法制备CaM偶联抗原是成功的。     

碱溶性黑木耳多糖的分离、纯化和表征

为了比较系统地研究黑木耳中水不溶性物质的成份及生物活性,利用稀碱提取、ＣＰＣ纯化等方法,提取一种碱溶性黑木耳多糖,并进行系列理化性质研究。结果表明,该多糖纯度较高,不含蛋白质核酸等含氮成份,由葡萄糖,甘露糖,木糖,岩藻糖等单糖组成,数均分子量为３．１×１０＾５。     

甘蔗叶多糖的分离纯化及其体外活性分析

以甘蔗叶为原料,采用机械力辅助超声法提取甘蔗叶粗多糖。经除蛋白、除色素、除小分子杂质等预处理后,用DEAE-52纤维素离子柱及DEAE-琼脂糖凝胶FF离子柱对甘蔗叶粗多糖进行分离纯化,得到SCLP-1和SCLP-5两种甘蔗叶纯多糖,并对其红外吸收特征、抑菌性能和抗氧化性能进行进一步研究。结果表明：甘蔗叶粗多糖提取率为1.8%,除蛋白率为39.8%,除蛋白过程多糖保留率为58.6%,除色素率为67.9%;除色素过程的多糖保留率为60.2%,除小分子杂质过程的多糖保留率为96.8%。红外光谱扫描结果显示, SCLP-1和SCLP-5这两种甘蔗叶纯多糖均具有多糖特征吸收峰;抗氧化试验结果显示,SCLP-5的抗氧化能力略高于SCLP-1的抗氧化性但均低于V_C;抑菌试验结果显示,两种纯化组分对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有良好的抑制作用,且对大肠杆菌的抑制效果优于金黄色葡萄球菌。     

水稻条纹叶枯病的研究 Ⅲ.病害的病原性质

水稻条纹叶枯病系由水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)所致.病毒由灰飞虱(Laodelphax striatellus)以持久性方式并经卵传播,介体灰飞虱有明显的间歇传毒现象.提纯病毒制剂具有典型的核蛋白紫外吸收曲线,最大吸收260nm,最小吸收245nm,A260/280=1.54.病毒粒体长丝状,粒体直径约8nm,与日本的水稻条纹病毒抗血清呈阳性反应.将提纯病毒制剂免疫家兔制备抗血清,其效价可达1∶2048.采用该抗血清,通过免疫扩散和ELISA间接法反应,可很灵敏地检测病叶中的RSV.