种植地域和采收时间对铁皮石斛品质影响

[目的]分析云南省不同产地和不同采收时间对铁皮石斛品质的影响.[方法]通过对云南省3个栽培基地所生产的铁皮石斛进行为期一年的跟踪调查,检测其多糖含量以及醇溶液浸出物含量,分析云南省不同产地生产的铁皮石斛之间品质差异,以及同一产地生产的铁皮石斛品质与采收时期之间的相关性.[结果]同一地点两年生铁皮石斛在全年各个采收期中采收时,其多糖和醇溶液浸出物的含量有所差异,3个地区的多糖含量和醇溶液浸出物含量在全年中都呈现出稳定的、相似的趋势.3个地区大棚产铁皮石斛的多糖含量在春季、冬季出现显著性差异,其醇溶液浸出物含量在春、秋、冬季都有显著性差异.[结论]该研究为铁皮石斛栽培选址的选择以及采收品质的控制提供参考.     

铁皮石斛的抗逆性研究铁皮石斛的抗逆性研究

[目的]研究不同时期、不同试验处理组铁皮石斛的抗逆生理反应及人工干预对其抗逆性的影响.[方法]铁皮石斛组培苗人工种植,分6-BA 50 μg/L定期喷施(激素组)、一定波长和强度的光照补充(物理组)、对照组3个试验组,测定3个生长期3个试验组的铁皮石斛叶片过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)含量,并进行统计分析.[结果]激素组、物理组POD、CAT活性高于对照组,MDA含量低于对照组.[结论]施用6-BA或一定的光照补充均可提高铁皮石斛抗逆能力.     

8种产地铁皮石斛蛋白质和同工酶分析

研究可溶性蛋白和同工酶电泳图谱与铁皮石斛种质资源之间的关系。利用可溶性蛋白和同工酶电泳技术,对来自8个产地的8种铁皮石斛的可溶性蛋白、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和超氧化物歧化酶(SOD)进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。电泳分析表明,8种铁皮石斛材料共得到119条谱带,特异性条带6条,多态性谱带占总谱带数的94.6%。在3种同工酶中,POD的谱带最为丰富,8种材料共得到36个条带;而PPO的谱带最少,8种材料只得到22个条带,说明其蛋白质和同工酶在种类和表达量上均有比较明显的差异。对8种铁皮石斛电泳条带进行的主成分分析表明,8种产地铁皮石斛的遗传变异不同,可分为4类。该研究对铁皮石斛的引种、育种具有指导意义。     

铁皮石斛查尔酮合酶基因克隆与表达分析

[目的]克隆铁皮石斛中查尔酮合酶(CHS)基因,分析其基本生物学信息及组织表达特异性,为进一步研究CHS基因在铁皮石斛中的表达调控机理及其在铁皮石斛中的功能打下理论基础.[方法]采用铁皮石斛转录组序列与NCBI同源序列进行比对,根据保守区段设计引物克隆铁皮石斛CHS基因的cDNA全长,采用实时荧光定量PCR定量表达分析不同生长年限、不同组织部位中CHS基因的表达水平.[结果]铁皮石斛CHS基因cDNA编码区1188 bp,编码395个氨基酸,GenBank登录号KT783451,分子量为43.2 kD,理论等电点6.05.铁皮石斛GHS氨基酸序列与同属植物金钗石斛(Dendrobium nobile)的CHS氨基酸序列同源性最高,达99%,与非同科植物欧洲大叶杨(Populus trichocarpa)、巨桉(Eucalyptus grandis和紫玉兰(Magnolia liliiflora)等植物的同源性在83%左右.该基因编码的蛋白质属非分泌蛋白,定位于细胞质基质中,为非跨膜结构的亲水性不稳定蛋白.CHS基因在1年生铁皮石斛叶片中的表达量最高,随着植株年龄的增长,叶片中CH基因的表达量降低,茎中的表达量升高.[结论]铁皮石斛CHS基因早期主要参与激素运输和器官形态建成,后期主要参与类黄酮物质合成.     

石斛多糖在饮料加工过程及货架期内的变化规律

[目的]研究石斛多糖在铁皮石斛饮料加工过程及成品货架期内的变化规律,为铁皮石斛功能产品的加工工艺优化提供科学参考.[方法]以铁皮石斛为原料、多糖提取率和多糖含量为指标,研究铁皮石斛饮料加工过程及成品存放对石斛多糖的影响.[结果]多糖提取率随粉碎粒度的增加而增加,铁皮石斛经超微粉碎(过300目)的多糖提取率最高(94.7%);铁皮石斛超微粉末水煮沸10~40 min均能获得90.0%以上多糖提取率,但煮沸时间延长至60 min会造成多糖损失;洗涤滤渣可增加多糖回收;泵送操作对多糖含量无影响;高压灭菌导致石斛多糖损失约6%;无论冷藏与否,在180 d货架期内铁皮石斛饮料的石斛多糖含量无明显变化.[结论]粉碎粒度和煮沸时间是影响石斛多糖提取效果的关键因素,应作为铁皮石斛多糖饮料生产工艺的首选参数.     

不同附生基质对铁皮石斛生长与代谢成分含量的影响

为明确不同附生基质对铁皮石斛生长及代谢成分的影响,以自然生长的木棉、毛果杜英、幌伞枫和干燥木板为附生基质仿造铁皮石斛自然生长环境,对铁皮石斛生长形态指标进行观测,并对多糖和生物碱等代谢成分含量进行测定与分析。结果表明,木棉、幌伞枫、毛果杜英、干燥木板这4种基质均可作为铁皮石斛的附生基质,但不同附生基质对铁皮石斛的生长有显著性影响,对其代谢成分也有一定的影响。其中,生长状况表现为木棉>幌伞枫>毛果杜英>干燥木板,代谢成分含量表现为木棉>毛果杜英>干燥木板>幌伞枫。综合排序,适合铁皮石斛附生生长的基质依次为木棉>幌伞枫>毛果杜英>干燥木板。在自然生长的木棉林下种植铁皮石斛可获得较高的经济效益,是一种较好的林下经济发展模式。     

铁皮石斛壮苗生根与移栽种植研究

[目的]筛选出较适宜铁皮石斛壮苗生根的培养基和移栽基质及移栽管理方式.[方法]以已分化出真叶的丛生苗为试材,通过研究不同植物激素配比和有机添加剂对铁皮石斛壮苗生根的影响,筛选出促进铁皮石斛试管苗快速生根和壮苗的培养基,同时对铁皮石斛试管苗的移栽进行全面研究,设置不同的移栽基质及移栽管理方式,以提高试管苗的脱瓶移栽成活率.[结果]适宜铁皮石斛生根的培养基为1/2MS+ 6-BA 0.5 mg/L+ NAA 1.0 mg/L+ IBA 2.0 mg/L;适宜铁皮石斛壮苗的培养基为1/2MS+ NAA 0.1 mg/L +6-BA0.5 mg/L;适宜铁皮石斛生根壮苗的有机添加剂为20％香蕉汁;适宜铁皮石斛移栽种植的管理方式为单栽,其中运用单栽管理方式适合铁皮石斛移栽种植的基质为1/3泥炭+1/3松树皮+1/3兰石,60d后成活率达80.0％.[结论]建立一套适合铁皮石斛壮苗生根与移栽种植的方法,为铁皮石斛的产业化大规模种植奠定基础.     

应用近红外光谱技术快速鉴别铁皮石斛的产地

采用近红外漫反射光谱技术结合簇类独立软模式方法(SIMCA)建立了预测模型,并对5个产地的铁皮石斛进行了快速鉴别研究。光谱数据经过Savitzky-Golay(S-G)平滑、1阶Savitzky-Golay(S-G)求导和均值中心化组合光谱预处理和波段选择优化后,所建的SIMCA模型为最佳模型。所建模型的识别率和拒绝率均为100%,而且5个产地铁皮石斛的模型也能拒绝其他3种石斛金钗石斛、紫皮石斛和金石斛。研究表明,模型合理,能够成功实现铁皮石斛产地快速鉴别,为不同产地的铁皮石斛的快速鉴别提供了一种新的方法。     

深色有隔内生真菌(DSE)引进菌株对铁皮石斛的接种效应

[目的]深色有隔内生真菌(DSE)是一类与植物共生的内生真菌,研究DSE对铁皮石斛苗生长的影响,可为铁皮石斛专用菌肥的开发利用提供理论依据.[方法]试验分为7个DSE菌株分别与铁皮石斛组培苗和盆栽苗共生培养两个阶段,按不同DSE菌株接种铁皮石斛组培苗设7个处理,另以不接种菌株为对照处理,测定不同处理下铁皮石斛组培苗生长指标;按不同DSE菌株制成的菌液浇灌盆栽苗设7个处理,以未浇菌液为对照处理,测定不同处理下铁皮石斛盆栽苗生长指标.[结果]供试菌株均能与铁皮石斛苗共生,其中菌株24L-4处理的促生作用较为突出;接种该菌株后,铁皮石斛组培苗的株高、叶宽、茎径和干重分别较对照处理显著增长33.3%、65.7%、27.3%和45.1%;铁皮石斛盆栽苗的茎径、鲜重和干重分别较对照显著增长104.0%、83.9%和114.7%;显微镜观察发现该菌株的深色有隔菌丝和类似微菌核的定殖结构分布于铁皮石斛根部皮层的细胞内.[结论]DSE真菌能明显提高铁皮石斛的生产能力,具有较好的开发利用潜力.     

铁皮石斛茎尖脱毒组培快繁技术研究

[目的]研究铁皮石斛的茎尖脱毒组培快繁技术.[方法]参考其他作物的脱毒技术对铁皮石斛进行脱毒组培研究.[结果]培养基为MS＋ 0.2 mg/L NAA＋ 0.3 mg/L 6-BA时,茎尖的愈伤组织诱导率和分化率最高.[结论]该方法为今后进一步探讨铁皮石斛的脱毒组培快繁技术奠定了基础.     

铁皮石斛组培苗快速繁殖的研究

[目的]研究铁皮石斛组织培养与快速繁殖方法.[方法]以铁皮石斛蒴果为材料,分别探究不同培养基及培养基添加物对铁皮石斛原球茎诱导、增殖及生根的影响.[结果]最适宜的铁皮石斛萌发的培养基为1/2 MS,加入0.2 mg/L NAA的培养基中原球茎增殖率达120％,在培养基中加入1.0mg/L 6-BA和20％香蕉提取液均对其茅的增殖有良好的促进作用,添加0.25mg/L NAA、2.0mg/L6-BA和20％马铃薯提取液的培养基中其再生率可高达220％,0.2 mg/L NAA和20％马铃薯提取液均可显著提高铁皮石斛苗生根生长.[结论]该研究为铁皮石斛快速繁殖技术的应用奠定了理论基础.     

铁皮石斛组培快繁技术

[目的]研究铁皮石斛的组培快繁技术.[方法]以铁皮石斛无菌苗的茎段为外植体,研究不同外源激素及其配比对铁皮石斛芽诱导及生根的影响.[结果]芽增殖最佳培养基为MS＋5 mg/L 6-BA＋ 0.4 mg/L NAA,此时外植体生长健壮,芽分化数和诱导率较高;最佳生根培养基为MS ＋0.5 mg/L IBA ＋0.5 mg/L NAA.[结论]该研究为铁皮石斛种苗的工业化生产奠定了基础.     

铁皮石斛多糖提取工艺及优化研究

【目的】考察铁皮石斛多糖提取方法及不同产地多糖含量的差异。【方法】采用正交试验设计筛选料液比、提取时间、提取次数对铁皮石斛多糖提取率的影响。【结果】铁皮石斛多糖提取最佳工艺条件为料液比1∶40,提取时间2 h,提取次数3次;分析云南省不同产地的铁皮石斛多糖含量,结果表明景洪勐龙的含量最高,可达到45.23%。【结论】获得铁皮石斛多糖提取的最佳工艺条件,不同产地的铁皮石斛多糖含量存在较大差异。     

贵州不同产地铁皮石斛的单糖组成

为铁皮石斛药效及多糖药理活性提供科学依据,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化方法使糖类物质带上紫外基团,用高效液相色谱仪紫外检测器进行检测,对贵州不同产地铁皮石斛单糖组成进行测定,并对其中单糖的含量进行分析。结果表明:铁皮石斛多糖主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖醛酸和半乳糖等组成,其中甘露糖和葡萄糖含量较高,甘露糖均占总多糖35%以上,葡萄糖均占总多糖12%以上,贵州不同产地铁皮石斛药材中各单糖占总多糖含量的比例存在明显差异,大方县产铁皮石斛单糖含量相对较低,而乌当及独山等地产铁皮石斛单糖含量相对较高。     

不同LED光质对铁皮石斛瓶内开花的影响

[目的]分析不同LED光质对铁皮石斛瓶内开花的影响,为石斛花期调控和试管花卉的开发利用提供参考依据.[方法]以无菌铁皮石斛原球茎为试材,进行4种LED光质[红蓝绿复合光(RBG)、红光(R)、蓝光(B)和白光(W)]照射处理,以白色荧光灯照射为对照(CK),100 d后测定各处理组培苗的形态和生理指标.[结果]经4种LED光质处理铁皮石斛组培苗的叶片数、叶长、叶宽、根粗和株高与CK差异不显著(P>0.05,下同);经R处理铁皮石斛组培苗的根数、根长和鲜重均最大,分别为8.67条、3.20 cm和0.32 g,其中根数和鲜重显著高于其他处理(P<0.05,下同);不同光质处理铁皮石斛组培苗瓶内开花率排序为RBG处理>W处理>CK>R处理>B处理,其中,B处理未开花,RBG处理铁皮石斛组培苗瓶内开花率最高,为45.4%,显著高于其他处理,平均每株开花3.33朵,始花期也最早,比CK提前14.67 d;RBG处理铁皮石斛组培苗的可溶性糖和可溶性蛋白含量最高,分别为4.23%和4.67%,显著高于其他处理;RBG和B处理植株的全氮含量最高,均为3.68%,显著高于其他处理;RBG、R和W处理的C/N差异不显著,但三者显著小于CK,显著大于B处理.[结论]以LED光质中的红+蓝+绿光复合照射铁皮石斛组培苗有利于其在瓶内开花,且花期早,开花率高.     

电刺激对铁皮石斛原球茎中石斛碱含量的影响

[目的]探讨电刺激对铁皮石斛原球茎中石斛碱含量的影响。[方法]采用铁皮石斛原球茎培养基扩增培养铁皮石斛原球茎,并将扩增所得原球茎随机分为试验组和对照组,其中试验组给予不同时间电刺激(25 V),对照组不做处理,正常培养15 d后,以氯仿热回流法提取原球茎中的石斛碱,紫外分光光度法测定石斛碱含量。[结果]与对照组相比,经电刺激(25 V)1和2 h的试验组铁皮石斛原球茎石斛碱含量显著增加(P0.05),而经电刺激(25 V)3 h的试验组铁皮石斛原球茎石斛碱含量下降(P0.05)。[结论]25 V电刺激1、2 h能够促进铁皮石斛原球茎中的石斛碱积累,这可能与电刺激能改变原球茎中细胞的渗透性、增强对培养基中各种成分的吸收,导致内源次生代谢物增加有关。     

一株木榄内生真菌菌株的分类鉴定及其对铁皮石斛生长和多糖积累的影响

[目的]从红树植物内生真菌中筛选能促进铁皮石斛(Dendrobium officinale)生长的内生真菌菌株,并对其进行分类鉴定,为下一步开展铁皮石斛乃至其他特色作物专用菌剂(肥)开发利用提供理论依据.[方法]以北部湾红树植物内生真菌为研究对象,通过平皿和盆栽试验筛选对铁皮石斛具有优良促生作用的菌株,并综合形态学特征观察及ITS序列和18S rDNA序列分析结果对表现突出的促生菌株进行分类鉴定.[结果]从32株内生真菌中筛选获得对铁皮石斛具有良好促生效果的深色有隔内生真菌(DSE)菌株1株,该菌株分离自木榄(Bruguiera gymnorrhiza)茎,编号HS40;通过再分离及显微观察,发现菌株HS40可定殖于铁皮石斛根部并产生DSE的典型特征——微菌核和菌丝.盆栽铁皮石斛苗接种菌株HS406个月后,其株高、分蘖数、总鲜重、总干重和茎干多糖含量分别较对照增加21.7%、375.0%、94.7%、57.6%和15.8%,其中,株高、总鲜重、总干重和茎干多糖含量与对照相比达极显著差异水平(P<0.01),分蘖数达显著差异水平(P<0.05).综合形态观察和序列分析结果,将菌株HS40鉴定为球腔菌科(Mycosphaerellaceae)的Zasmidium citri-griseum.[结论]菌株HS40可显著促进铁皮石斛的生长并提高其茎干多糖含量,有望用于开发铁皮石斛专用菌剂(肥).     

铁皮石斛热激转录因子(Hsf)基因家族鉴定及生物信息学分析

[目的]鉴定铁皮石斛热激转录因子(Hsf)基因家族成员,并进行生物信息学分析,为深入研究该家族在铁皮石斛热应激响应中的调控机制提供理论参考.[方法]以拟南芥和水稻Hsf蛋白氨基酸序列为参考序列,在铁皮石斛蛋白数据中搜索其同源蛋白序列,利用SMART和Pfam数据库鉴定出其Hsf基因家族成员.利用生物信息学方法对铁皮石斛Hsf基因家族组成、基因结构、启动子区顺式作用元件及其编码蛋白结构域和进化关系等进行分析.[结果]共鉴定获得23个铁皮石斛Hsf基因家族成员,编码氨基酸数量为132~514个,平均343个,多数属于酸性蛋白和亲水性蛋白,可分为HsfA、HsfB和HsfC组,其中HsfA组成员13个、HsfB组成员9个、HsfC组成员1个.除DoHsfA3仅包含motif 1和motif 2外,其他HsfA组蛋白均含有motif 1~motif 5,HsfB和HsfC组蛋白均缺少motif 5.铁皮石斛Hsf蛋白缺少A9、B3、B5和C1亚类成员,与同属于单子叶兰科植物的小兰屿蝴蝶兰Hsf蛋白亲缘关系最近.HsfA组成员包含完整的HSF功能域和卷曲螺旋(CC)功能域,HsfB和HsfC组成员缺少或含不完整的CC功能域.DoHsfA1A蛋白具有保守的丝氨酸—苯丙氨酸—缬氨酸—精氨酸—谷氨酰胺序列.铁皮石斛Hsf基因启动子区含有大量激素响应、胁迫响应和生长相关元件.[结论]铁皮石斛Hsf基因家族成员进化较保守,其生物学功能存在明显物种特异性,进化关系较复杂,推测其在不同的非生物胁迫和植物激素信号途径中发挥潜在"节点"作用.     

Liquid Suspension Culture of the Seeds of CAULIS DENDROBH

[目的]研究铁皮石斛种子的液体悬浮培养方法.[方法]以MS为基础培养基,设计了不同浓度的基础培养基、激素、天然附加物、pH、蔗糖等5个影响因子的15种培养液配方,筛选出铁皮石斛最适的液体培养条件.[结果]适中的无机盐浓度,NAA、较低的pH值、较高的蔗糖浓度以及适量的土豆汁都有利于铁皮石斛种子的萌发;试验优选出的相对适合种子萌发的培养基为1/2MS+0.5 mg/LNAA +80 g/L土豆汁+45 g/L蔗糖.[结论]筛选出了相对较合适的培养基配方,为铁皮石斛栽培种植提供了理论依据.     

有机肥料对大棚种植铁皮石斛生长的影响

[目的]筛选适合铁皮石斛大棚种植的有机肥料,促进铁皮石斛的生长,使其增产。[方法]在相同的大棚种植环境条件下,分别施加发酵羊粪、发酵蚕粪和发酵花生麸对铁皮石斛种苗进行处理。1 a后,再分别对不同有机肥处理的铁皮石斛植株相关性状进行调查与分析。[结果]施加发酵羊粪(加入10%硫酸钾造粒)更有利于促进大棚铁皮石斛植株的生长,其植株的存活率、青叶数、茎节数和株高均高于施加发酵蚕粪的和发酵花生麸的。[结论]发酵羊粪(加入10%硫酸钾造粒)是一种适合铁皮石斛大棚种植的优质有机肥料,具有推广价值。