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1.
《黑龙江八一农垦大学学报》2012,24(2)
以干酪乳杆菌作为呈递抗原活载体,表达新城疫病毒保护性抗原HN蛋白。重组于酪乳杆菌表达外源蛋白后,经SDS-PAGE、Westernblot及间接免疫荧光分析,表明目的蛋白表达并展示到乳酸菌表面。将重组菌及空质粒菌株分别滴鼻、点眼免疫雏鸡,于不同时间检测血清样品中特异性IgG;于三免后不同时间采集雏鸡的泪液、气管洗液、胆汁和肠洗液样品,采用间接ELISA方法检测样品的特异性sIgA;用MTY法检测免疫鸡脾淋巴细胞增殖情况,结果显示重组干酪乳杆菌表达系统能刺激动物黏膜免疫反应和系统免疫反应。 相似文献
2.
以干酪乳杆菌作为呈递抗原活载体,表达新城疫病毒保护性抗原HN蛋白。重组干酪乳杆菌表达外源蛋白后,经SDS-PAGE、Western blot及间接免疫荧光分析,表明目的蛋白表达并展示到乳酸菌表面。将重组菌及空质粒菌株分别滴鼻、点眼免疫雏鸡,于不同时间检测血清样品中特异性IgG;于三免后不同时间采集雏鸡的泪液、气管洗液、胆汁和肠洗液样品,采用间接ELISA方法检测样品的特异性sIgA;用MTT法检测免疫鸡脾淋巴细胞增殖情况,结果显示重组干酪乳杆菌表达系统能刺激动物黏膜免疫反应和系统免疫反应。 相似文献
3.
鸭瘟弱毒疫苗诱导IgA、IgM和IgG产生规律的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】探讨鸭瘟弱毒苗诱导鸭局部黏膜和系统免疫中抗体发生的规律。【方法】将DPV弱毒苗Cha株经皮下、口服和滴鼻途径免疫20日龄樱桃谷鸭后60 d内定时随机剖杀5只鸭,采集血清、气管和消化道(食道、十二指肠、空肠和直肠)分泌液,应用间接ELISA检测抗DPV的IgA、IgM和IgG抗体滴度(以lg表示)。【结果】所有免疫鸭检测样品中均可检测到DPV特异性IgG、IgM和IgA抗体。血清中抗体滴度由高到低均为IgG、IgM和IgA,其中IgM检出时间最早,IgG存留时间最长。皮下免疫DPV弱毒苗可更早诱导鸭血清中生成特异性IgG,且抗体滴度最高;气管和消化道分泌液中抗体滴度由高到低均为IgA、IgM和IgG,其中IgA和IgM检出时间最早,IgA存留时间最长。口服和滴鼻途径免疫鸭消化道和气管分泌液中IgA滴度较皮下免疫鸭高。【结论】不同途径免疫鸭瘟弱毒疫苗均可迅速诱导免疫鸭体液免疫介导的黏膜免疫和系统免疫。以DPV特异性IgA为主要抗体的黏膜免疫在预防DPV强毒早期对鸭消化道和呼吸道等局部黏膜的感染中具有十分重要的作用,使DPV弱毒疫苗快速产生免疫保护的机制从黏膜免疫的角度得到一定程度解释。 相似文献
4.
【目的】利用干酪乳酸菌作为抗原传递系统来刺激机体产生黏膜免疫反应,从而研制有效的黏膜疫苗预防ETEC F41的感染。【方法】重组菌在MRS培养基中进行表达,经SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白的表达,间接免疫荧光分析及流式细胞术检测外源蛋白展示到菌体表面。将重组菌及空质粒菌株分别滴鼻接种SPF级Balb/c小鼠,采集血液样品测定小鼠产生抗F41的特异性IgG,收集小鼠肺部冲洗液、肠道冲洗液、阴道冲洗液及粪便样品测定小鼠产生抗F41的特异性sIgA,并对小鼠进行攻毒保护性试验。【结果】重组干酪乳杆菌pLA-F41/L.casei免疫小鼠能够产生明显的抗F41的sIgA和IgG抗体水平,主动免疫组保护率在85%以上,对照组则全部死亡,被动免疫组新生幼鼠的保护率达80%,对照组保护率仅为5%。【结论】细胞表面锚定ETEC F41菌毛蛋白的重组干酪乳杆菌pLA-F41/L.casei通过滴鼻途径免疫能够有效预防F41型ETEC的感染。 相似文献
5.
【目的】研究重组鼠疫耶尔森氏菌(简称鼠疫菌)YscF蛋白的免疫原性。【方法】将含重组质粒YscF的E.coliBL21-YscF阳性克隆接种于LB液体培养基进行诱导表达;采用Ni2+亲和层析法对表达产物进行纯化;以蛋白体为佐剂吸附重组YscF蛋白,对Balb/c小鼠滴鼻免疫后,采用间接ELISA法检测血清中抗YscF的IgG和鼻、肺、小肠冲洗液中sIgA的抗体效价。【结果】重组YscF蛋白获得了高效表达,并以可溶性蛋白形式存在于上清中;滴鼻免疫小鼠后不但可以提高血清中总IgG效价,还可以诱导呼吸道分泌IgA型抗体;对腹腔注射100LD50强毒鼠疫菌攻击有一定保护效力,存活率为60%。【结论】YscF是鼠疫菌的一个有免疫原性的蛋白,能诱导较强的系统免疫和黏膜免疫;重组鼠疫菌YscF抗原可以作为改进的F1+V亚单位疫苗的辅助成分。 相似文献
6.
《上海农业学报》2018,(6)
旨在评价猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)活疫苗与大肠杆菌热敏性肠毒素(LT)蛋白配伍后经滴鼻途径接种小鼠后的免疫应答水平,分析猪繁殖与呼吸综合征活疫苗经黏膜途径免疫的可行性。试验共分为四组,分别为对照组、PRRSV滴鼻组、PRRSV+LT滴鼻组和PRRSV注射组。一免、二免后检测血清Ig G和鼻拭子Ig A抗体水平,同时检测IFN-γ和IL-10细胞因子的表达。结果表明:二免后,PRRSV+LT滴鼻组可产生较高水平的Ig G抗体,与PRRSV注射组无显著差异; PRRSV+LT滴鼻组产生的Ig A抗体水平明显高于PRRSV注射组; PRRSV+LT滴鼻组小鼠脾脏IFN-γ、IL-10水平与PRRSV注射组无显著差异。因此,猪繁殖与呼吸综合征活疫苗与LT蛋白经滴鼻途径免疫小鼠,可产生理想的黏膜免疫应答及系统的体液免疫和细胞免疫反应。黏膜分泌性抗体的产生,为阻断病毒局部感染提供了保护屏障,能更有效达到抵抗病毒入侵及感染的目的。 相似文献
7.
非致病性大肠杆菌鞭毛蛋白对O型口蹄疫病毒的佐剂效果 总被引:2,自引:0,他引:2
【目的】口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)的传染性强,传播广,给世界经济和社会发展带来巨大危害,目前疫苗接种仍是主要而有效的防控手段。以增强口蹄疫疫苗免疫效力为目的,基于国内外对鞭毛蛋白佐剂的深入了解与研究,对非致病性大肠杆菌鞭毛进行修饰,研究鞭毛蛋白(flagellin,F)以及有无LTMT佐剂不同重组鞭毛蛋白对口蹄疫病毒(foot and mouth disease virse,FMDV)的佐剂作用。【方法】通过体外表达获得pCold-F0、pCold-F0-LTMT、pCold-F0NC、pCold-F0NC-LTMT 4种不同重组鞭毛蛋白,用间接ELISA方法检测pCold-F0-LTMT和pCold-F0NC-LTMT蛋白的生物学活性,按照5μg/只小鼠蛋白量与FMDV灭活抗原混合制备疫苗,同时设置添加或者不添加ISA 206佐剂组,皮下接种Balb/c小鼠,共免疫2次,每次间隔2周。分别于免疫前和免疫后14、21、28、35和45 d采血并采集小鼠粪便,45 d后取小肠后段,采用阻断ELISA方法检测血清IgG抗体滴度,用间接ELISA方法检测小鼠粪便和肠洗液中特异的分泌性IgA(secretory IgA,SIgA)抗体滴度,以评估免疫效力。【结果】SDS-PAGE和Western blot分析表明,4种不同重组鞭毛蛋白成功表达。并用GM l-ELISA方法验证了pCold-F0-LTMT和pCold-F0NC-LTMT的生物学活性,融合蛋白F0-LTMT和F0NC-LTMT保留了与GM l结合能力。动物试验结果表明,疫苗经皮下注射接种后,单独口蹄疫抗原组没有产生明显的抗体水平,而鞭毛蛋白佐剂组比单独的口蹄疫抗原组,IgG滴度高,并且产生sIgA抗体滴度更早、更高。此外,LTMT与鞭毛蛋白协同作用能刺激小鼠机体产生更高的IgG和sIgA。在试验中,当鞭毛蛋白与ISA 206佐剂联合使用时,血清中IgG滴度大幅增高,且抗体持续期延长。口蹄疫抗原与ISA 206佐剂和F0NC-LTMT混合使用效果最佳,显示对FMDV的最好保护。【结论】数据表明,黏膜佐剂F0-LTMT发挥双重佐剂活性,皮下注射可显著提高FMDV全身特异性IgG和局部sIgA水平,显示其具有良好的应用前景。 相似文献
8.
雏鸡新城疫免疫后部分黏膜中抗新城疫IgG的检测 总被引:3,自引:1,他引:3
利用新城疫Ⅳ系对不同免疫途径免疫后雏鸡的泪液、气管液、血清中抗新城疫病毒的HI抗体效价进行了检测。结果表明:黏膜免疫途径比非黏膜免疫途径更活跃地激活黏膜免疫应答部位产生IgG,并且黏膜免疫后,离Ag刺激近的部位免疫应答较强。黏膜免疫应答部位的HI抗体在一免后要比血清中抗体效价高,而二免后其IgG含量要低于血清中IgG含量。 相似文献
9.
本实验研究了雏鸡感染传染性法氏囊病毒(IBDV)后对异种抗原——小鼠红细胞(MRBC)和新城疫(ND)疫苗在外周血液的免疫应答反应。检测指标有IgG,IgM 和γ—球蛋白含量;血凝抗体滴度以及 T 细胞、B 细胞和淋巴细胞数量。实验结果表明,1日龄感染 IBDV 雏鸡接种 ND 疫苗后,血清 IgG,IgM 及γ—球蛋白含量和血液 B 细胞、T 细胞及淋巴细胞数量均明显低于对照雏鸡。1日龄和4周龄感染 IBDV 雏鸡接种 MRBC 后血凝抗体滴度,血清 IgG,IgM 及γ—球蛋白含量和血液 T 细胞及淋巴细胞数量也均低于未感染雏鸡。说明感染 IBDV 雏鸡对 ND 疫苗和 MRBC 的体液免疫和细胞免疫应答功能均明显降低。 相似文献
10.
实验小鼠感染小鼠肝炎病毒后的抗体变化 总被引:2,自引:0,他引:2
采用MHV-A59标准毒株通过3种途径(腹腔、滴鼻、灌胃)对6个品系的实验小鼠(BALB/c、C57、nu/nu、NIH-Ⅲ、IL-4T、IL-10T)进行了病毒感染。通过检测小鼠感染后1个月内不同时段的抗体变化,发现小鼠在感染MHV后,血清转阳一般发生在感染后5-7 d,3周左右特异性IgG水平达到高峰;而特异性IgM水平出现上升时间比IgG早,3 d左右开始升高,7 d到达高峰,3周后开始下降。不同品系小鼠由于遗传背景不同,对MHV的易感性和耐受性存在明显差异。不同感染途径之间也存在着一定的差异,腹腔感染MHV的小鼠抗体转阳时间和IgG、IgM高峰水平出现的时间都较滴鼻和灌胃途径早,而滴鼻感染MHV后小鼠抗体转阳时间出现较晚,但其维持时间较长,认为MHV感染后产生免疫力的持久性在很大程度上取决于免疫途径的选择。 相似文献
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白细胞介素-10分子佐剂增强口蹄疫DNA疫苗黏膜免疫效果研究 总被引:4,自引:0,他引:4
【目的】研究白细胞介素-10作为黏膜分子佐剂是否可以增强口蹄疫DNA疫苗(pcD-VP1)的黏膜免疫应答。【方法】利用RT-PCR技术以Balb/c小鼠脾脏组织总RNA为模板,扩增出小鼠的IL-10基因,并构建真核表达质粒proVAX-IL-10, 通过鼻腔接种方式,将口蹄疫DNA疫苗(pcD-VP1)和真核表达质粒(proVAX-IL-10)共同免疫小鼠,用ELISA法检测免疫小鼠黏膜部位(肺脏、生殖道)sIgA滴度,免疫组织化学法检测气管、生殖道和小肠中sIgA 的表达情况,CSFE染色法检测小鼠扁桃体淋巴细胞增殖反应水平,用胞内细胞因子染色法通过流式细胞仪检测扁桃体部位CD4+阳性T细胞内IFN-γ和IL-4的表达量。【结果】成功构建了proVAX-IL-10真核重组质粒,且重组质粒可以在BHK细胞中有效表达;将proVAX-IL-10与口蹄疫DNA疫苗pcD-VP1共同免疫小鼠后发现,与单独接种pcD-VP1相比,加入IL-10分子佐剂后,可以诱导更高水平的黏膜sIgA的表达及分泌,极大的提高了黏膜部位抗原特异性T细胞增殖反应水平以及CD4+ T细胞中IL-4的表达量。【结论】IL-10作为分子佐剂,通过鼻腔黏膜免疫后,可以有效增强机体对口蹄疫DNA疫苗的黏膜免疫应答,对于预防口蹄疫病毒的感染和清除体内病毒起到重要的作用。 相似文献
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ImmunologicalChangesofChicksImmunizedwithMarch'sDiseaseVaccinesandChallengedwithVirulentMDVirus¥LiuZhonggui;GaoRong;LiQingzha... 相似文献
13.
Mucosal immunity plays an important role in protecting pigs against transmissible gastroenteritis virus (TGEV) infection. To elicit mucosal immune response against TGEV, we developed a surface antigen display system using the poly-γ- glutamate synthetase A (pgsA) protein of Bacillus subtilis as an anchoring matrix to express recombinant fusion proteins of pgsA and nucleocapsid protein of TGEV in Lactobacillus casei. Surface location of fusion protein was verified by ELISA and indirect immunofluorescence test. Oral and intranasal inoculations of pregnant sow and mice with recombinant L. casei resulted in high levels of serum immunoglobulin G (IgG) and secretory immunoglobulin A (slgA) against recombinant N protein as demonstrated by ELISA. More importantly, the level of specific slgA in colostrum significantly increased compared with that of IgG. The serum IgG levels of the piglets increased after suckling colostrum produced by sows was previously inoculated with recombinant L. casei. These results indicate that immunization with recombinant L. casei expressing TGEV N protein on its surface elicited high levels of specific slgA and circulating IgG against TGEV N protein. 相似文献
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感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后免疫保护效应及其机理研究 总被引:3,自引:0,他引:3
雏鸡 1日龄人工感染鸡贫血病毒 (CAV) ,于 8日龄接种 L asota疫苗 ,免疫后 2 8d进行新城疫强毒 (v NDV)攻击 ,以同龄未感染 CAV和用 L asota疫苗免疫并经 v NDV攻毒雏鸡为对照 ,检测其免疫保护效应 ,胸腺和脾脏 T细胞数量及 T细胞增殖反应 ,法氏囊和脾脏 Ig G+、Ig M+、Ig A+抗体生成细胞数量 ,血清免疫球蛋白 Ig G、Ig M、Ig A含量 ,血凝抑制抗体 (HI)滴度等。结果表明 ,CAV人工感染并用新城疫 (ND)疫苗免疫雏鸡经 v NDV攻击后的免疫保护率为 6 0 % ,对照组雏鸡 v NDV攻击后免疫保护率为 10 0 % ,胸腺和脾脏 T细胞数量和 T细胞增殖反应、法氏囊和脾脏Ig G+ 、Ig M+ 、Ig A+ 抗体生成细胞数量、血清 Ig G、Ig M、Ig A含量及 HI抗体滴度 ,均较对照组雏鸡显著降低。说明感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后的免疫保护效应及免疫功能明显降低。 相似文献
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用山羊IgG注射欧洲鳗鲡背部肌肉后,采用山羊IgG-琼脂糖亲和层析柱对欧鳗血清免疫球蛋白(IgM)进行分离纯化,并通过SDS-PAGE电泳对纯化后的IgM进行检测,同时制备兔抗欧鳗IgM血清,运用间接ELISA检测正常欧鳗血清(第0天)以及山羊IgG注射欧鳗后第7、14、21、28、35、42天的血清抗体水平,同时利用荧光定量PCR测定了第0天至第28天的欧鳗肾脏、脾脏和鳃中IgM基因表达水平变化.结果表明:纯化后的欧鳗IgM经SDS-PAGE检测含有一条分子质量约68 ku的重链,以及分子质量分别为26 ku和28 ku的两条轻链,获得的兔抗欧鳗IgM血清效价达1/51 200;欧鳗血清抗体水平在第28天达到峰值,脾脏IgM基因表达水平在第14天达到峰值,肾脏和鳃均在第21天达到峰值,血清抗体水平以及三种组织器官IgM基因表达水平的变化规律均为先升高、达到峰值后再降低. 相似文献
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The experiment was conducted to study the dynamic changes of immune responses of chicks immunized with Marck‘s disease(MD) trivalent vaccine and turkey herpesvirus (HVT)at one day age.Results were found that after immunization of chicks with MD vaccines,the interlcukine-2 (IL-2) inductive activity and IL-2 receptor expression of T cells from thymus and spleen significantly increased.suggesting that the immunoregulative function was markedly enhanced in the immune organs;the number of antibody-producing cells,the number and proliferative function of T cells rose markedly in Bursa Fabricius,Splcen and thymus,indicating that the ccllular and humoral immune responses were elevated remarkablly in the central and peripheral immune organs; the number of T and antibody-producing cells as well as the content of IgG,IgA and IgM obviously mounted in cecal tonsil,Harder ian gland mucosal lymphoid tissucs of bronchus along with tears,trachea washings,bilc and intestinal fluids,demonstrating that the local and mucosal immunity was raised in the respiratory and digestive tract;the levels of immune responses mentioned above in the trivalent vaccine-immuniacd chicks were apparently higher than those of HVT-immunized birds. 相似文献
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鸡马立克氏病疫苗免疫后的免疫学变化 总被引:1,自引:0,他引:1
实验对1日龄雏鸡接种MD三价疫苗或HVT疫苗后的免疫应答变化进行了检测.发现MD疫苗免疫后:(1)脾脏、胸腺T细胞IL—2诱生活性和IL—2R表达明显增强或增多,表明IL—2的免疫调节作用增强;(2)胸腺、法氏囊和脾脏中T细胞和抗体生成细胞数量及T细胞增殖功能明显增高,表明中枢与外周免疫器官的细胞免疫和体液免疫应答显著增强;(3)盲肠扁桃体、哈德尔腺、支气管粘膜淋巴组织中T细胞和抗体生成细胞数量以及泪液、气管液、肠液、胆汁中IgA,IgG,IgM含量明显增多,表明呼吸道与消化道的局部免疫应答也显著增强;(4)MD三价疫苗免疫鸡的上述免疫应答变化比HVT疫苗免疫鸡明显. 相似文献