海南沼虾(♀)×日本沼虾(♂)的人工种间杂交及其RAPD分析

运用人工授精方法,进行海南沼虾(♀)×日本沼虾(♂)杂交试验,获得了可育的F1代杂种,并对F1代及其双亲进行了RAPD分析。共进行6批杂交试验,4批抱卵,3批获得杂交虾,成活率分别为30%,48%,64%。形态上,F1代兼有双亲特征,但偏向父本。RAPD扩增结果显示,海南沼虾和日本沼虾的扩增带型存在显著的差异,F1杂种兼有双亲的特征带,父、母本之间的遗传距离为0.785 6,父本与F1的遗传距离为0.410 9,母本与F1的遗传距离为0.423 8。从分子水平确认了日本沼虾(♀)和海南沼虾(♂)种间杂交的成功,并为进一步寻找经济性状相关分子标记提供了条件。     

RAPD标记在罗氏沼虾杂交F1中分离的研究

利用RAPD标记技术对罗氏沼虾缅甸引进群体和浙江本地群体及其一对一杂交产生的F1的分离方式进行了研究,并分析了双亲及F1的遗传结构。结果显示,50个RAPD随机引物中有9个可扩增出多态性位点,共产生47个位点,其中22个有多态性,占总位点的46.8%;9个位点可用于遗传连锁作图;13个为偏分离位点,1个为异常分离位点。克隆分析该异常分离位点发现,其大小为707 bp,与已知序列同源性极低。父母本之间的遗传距离为0.185 7,双亲与F1间的距离分别为0.158 2和0.107 3。以上结果表明,F1群体可以作为作图群体应用于罗氏沼虾遗传图谱的构建。     

RAPD标记在罗氏沼虾杂交F1中分离的研究

利用RAPD标记技术对罗氏沼虾缅甸引进群体和浙江本地群体及其一对一杂交产生的F1的分离方式进行了研究,并分析了双亲及F1的遗传结构。结果显示,50个RAPD随机引物中有9个可扩增出多态性位点,共产生47个位点,其中22个有多态性,占总位点的46.8%;9个位点可用于遗传连锁作图;13个为偏分离位点,1个为异常分离位点。克隆分析该异常分离位点发现,其大小为707 bp,与已知序列同源性极低。父母本之间的遗传距离为0.185 7,双亲与F1间的距离分别为0.158 2和0.107 3。以上结果表明,F1群体可以作为作图群体应用于罗氏沼虾遗传图谱的构建。     

海南沼虾ITS-1序列分析

为了了解海南沼虾遗传方面信息,利用ITS-1分子标记技术对珠江海南沼虾群体作了研究.研究结果表明:①其ITS-1片段在1700～1900 bp之间,较日本沼虾短;②其碱基含量变化范围为:27%～30%(A),27%～31%(G),14%～16%(C),43%～46%(G+C);③其ITS-1序列中包含着非常丰富的SSR序列信息,具体为(AG)n,(GA)n,(AGT)n,(AGC)n,GCA)n重复,在个体中出现的比例分别为100%,100%,25%,12.5%,12.5%.(AG)n,(GA)n是多态位点;④BLAST比对结果表明,海南沼虾同日本沼虾和刀额新对虾都有较高的同源性.此研究结果在一定程度上填补了海南沼虾ITS-1方面研究的空白,同时也为海南沼虾后续研究提供了理论参考.     

江苏地区日本沼虾种质资源的RAPD分析

用RAPD技术研究了江苏地区10个日本沼虾群体的遗传多样性和亲缘关系。以40个随机引物(10个碱基)对沼虾基因组DNA进行扩增,选取其中18个扩增产物多态性好的引物进行分析。结果共扩增出234个DNA片段,大小在250~2000 bp之间;126个位点表现为多态位点,多态位点比例为53.85%。常州湖繁保区的日本沼虾遗传多样性最高,遗传多样性指数为0.1742;宿迁骆马湖池塘养殖的日本沼虾遗传多样性最低,遗传多样性指数为0.1263。UPGMA聚类分析表明,常州湖繁保区的日本沼虾和苏州太湖胥口镇渔洋山西南侧水域的日本沼虾亲缘关系最近,总体上亲缘关系和地理位置呈正相关。     

江黄颡(♀)和乌苏里拟鲿(♂)及其杂交子代遗传变异的RAPD分析

利用RAPD分子标记分析了江黄颡(♀)和乌苏里拟鲿(♂)及其杂交子代3个群体的遗传结构。18个RAPD随机引物对每个群体8尾鱼的基因组DNA进行扩增,共获得106个条带清晰且重复性较好的RAPD标记,片段大小在200~2 000 bp之间,江黄颡(♀)和乌苏里拟鲿(♂)及其杂交子代3个群体的多态位点比例分别为17.92%、18.87%和25.47%,平均遗传相似系数分别为0.940 8、0.936 8和0.928 0,平均遗传距离分别为0.059 2、0.063 2和0.072 0,平均Nei’s基因多样性指数(H)分别为0.075 4、0.073 8和0.103 6,平均Shannon信息指数(I)分别为0.108 7、0.108 1和0.150 1;亲缘关系树状图显示杂交子代与母本遗传距离较近,而与父本遗传距离较远。结果分析表明:杂交子代继承了双亲的优良性状,但从母本中继承的遗传物质稍多于父本;杂交子代群体内的遗传多样性高于两亲本群体,杂交一代基因杂合性增强,表现出一定的杂种优势。     

江黄颡(♀)和乌苏里拟鲿(♂)及其杂交子代遗传变异的RAPD分析

利用RAPD分子标记分析了江黄颡(♀)和乌苏里拟鲿(♂)及其杂交子代3个群体的遗传结构。18个RAPD随机引物对每个群体8尾鱼的基因组DNA进行扩增,共获得106个条带清晰且重复性较好的RAPD标记,片段大小在200~2 000 bp之间,江黄颡(♀)和乌苏里拟鲿(♂)及其杂交子代3个群体的多态位点比例分别为17.92%、18.87%和25.47%,平均遗传相似系数分别为0.940 8、0.936 8和0.928 0,平均遗传距离分别为0.059 2、0.063 2和0.072 0,平均Nei’s基因多样性指数(H)分别为0.075 4、0.073 8和0.103 6,平均Shannon信息指数(I)分别为0.108 7、0.108 1和0.150 1;亲缘关系树状图显示杂交子代与母本遗传距离较近,而与父本遗传距离较远。结果分析表明:杂交子代继承了双亲的优良性状,但从母本中继承的遗传物质稍多于父本;杂交子代群体内的遗传多样性高于两亲本群体,杂交一代基因杂合性增强,表现出一定的杂种优势。     

日本沼虾4个地理群体遗传变异的RAPD分析

采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对取自六安、龙感湖、淮南和高淳等4个地理群体的日本沼虾(Macrobrachium nipponense)各30个个体进行遗传多样性分析。在事先优化的反应条件下,所使用的OPP、OPX2个系列40个随机引物中,有16个引物扩增出清晰稳定的片断,共产生173个位点,大小在250~2 000 bp,利用PopGen 1.32进行分析,日本沼虾多态位点为75个(多态性片断的比例为43.4%),Shan-non信息指数为0.177 1~0.246 6。遗传距离显示日本沼虾群体间有一定遗传分化,其中高淳群体和龙感湖群体之间遗传距离最大(0.171 2),六安群体和淮南群体之间最小(0.114 6)。用UPGMA对4个地理群体进行聚类分析,六安和淮南群体首先聚在一起,高淳和龙感湖群体最后。     

日本沼虾4个地理群体遗传变异的RAPD分析

采用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对取自六安、龙感湖、淮南和高淳等4个地理群体的日本沼虾（Macrobrachium nipponense）各30个个体进行遗传多样性分析。在事先优化的反应条件下。所使用的OPP、OPX2个系列40个随机引物中，有16个引物扩增出清晰稳定的片断。共产生173个位点。大小在250～2000bp，利用PopGen1．32进行分析，日本沼虾多态位点为75个（多态性片断的比例为43．4％），Shannon信息指数为0．1771～0．2466。遗传距离显示日本沼虾群体间有一定遗传分化。其中高淳群体和龙感湖群体之间遗传距离最大（0．1712）．六安群体和淮南群体之间最小（0．1146）。用UPGMA对4个地理群体进行聚类分析，六安和淮南群体首先聚在一起。高淳和龙感湖群体最后。     

日本沼虾不同地理种群的遗传多样性研究

笔者采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对6个地理种群(微山湖、洪泽湖、太湖、龙感湖、洪湖、珠江)的日本沼虾各30个个体进行了遗传多样性分析.在筛选出的18个引物中共检测到201个位点,大小在100～2000bp之间.多态位点141个,多态位点比例70.15%;各种群的多态位点数为30～99不等,多态位点比例为21.13%～55.93%.日本沼虾中国不同地理种群的平均遗传杂合度为0.2446,各种群内平均遗传杂合度为0.1132～0.2071.Shannon信息指数(Ⅰ)为0.1695～0.2950.日本沼虾6个地理种群的两两地理种群间遗传分化指数Gst值在0.2116～0.4442之间.种群间总的遗传分化指数Gst0值为0.4858,Nm值在0.6257～1.8628之间,表明日本沼虾种群间已经发生显著或重要分化.同时发现OPX-830bp、OPI-360bp为珠江种群区别于其他种群的特征标记.聚类分析结果表明,洪湖种群与龙感湖种群,洪泽湖种群与微山湖种群分别先聚在一起,再与太湖种群聚类.最后与珠江种群聚合在一起.     

江苏省两个日本沼虾群体的遗传多样性ISSR分析

利用ISSR分子标记技术对江苏长江和太湖2个地区青虾(Macrobrachium nipponense)群体的遗传多样性进行了分析.结果显示,77个ISSR引物中有6个引物能扩增出清晰条带,6个引物对2个群体各24个样品扩增出44个位点.青虾长江和太湖两群体的多态位点比率均为63.64 0A,Shannon's指数分别为0.348 0、0.346 5.Shannon's指数估算和AMOVA分析均显示日本沼虾的遗传变异主要来自于群体内个体间.日本沼虾UPGMA系统树表明:两个地区日本沼虾群体的遗传多样性均处于较高水平;日本沼虾江苏长江和太湖两个群体间存在一定的遗传分化.     

杂交日本沼虾太湖1号各世代与普通日本沼虾生长特征的比较

池塘精养条件下,比较了杂交日本沼虾太湖1号F1、F2、F3和普通日本沼虾的生长特征差异.结果显示:经90d的养殖,太湖1号各世代体长和体重均高于普通日本沼虾,太湖1号F1和F2增重与普通日本沼虾差异显著(P＜0.05);同时,太湖1号各世代肥满度、捕捞产量、产值和效益均高于普通日本沼虾,表明太湖1号具有优良的生长性状,在生产实践中能够创造更多的经济价值.此外,太湖1号各世代均在养殖70 d时体重和体长等生长指标达到最大值,随后出现回落;太湖1号在自繁自育过程中,随着传代数的增加,优良性状则逐步衰减.因此建议在太湖1号养殖过程中,养殖70 d上下时需要进行清塘起捕,同时注意亲本的及时更新,确保生产实践中良好的经济效益.     

甜瓜亲本与其F_1代的RAPD标记分析

利用RAPD标记方法,从分子水平上探测了甜瓜亲本与其杂种F1的遗传差异,用27个引物对11个甜瓜基因型进行了扩增,共扩增出44条有效谱带,其中多态性条带19条,占总条带数的43.18%。每条引物可扩增3～8条带,平均每条引物产生1.63条有效带。根据RAPD遗传距离进行分析,杂种F1多偏向母本自交系遗传;甜瓜亲本自交系间的遗传距离为0～0.39。作为父本,TopMark自交系与H16自交系相比,子代更多继承了Top-Mark自交系的遗传特性。以上结果与田间性状表现相符,RAPD标记用于甜瓜遗传差异的研究切实可行,其结果可用于育种过程中的亲本选配和分子标记辅助选择。     

三个群体罗氏沼虾线粒体COI基因的遗传多样性分析

运用PCR方法,扩增罗氏沼虾缅甸原种F1代、广西选育群体和江苏养殖群体的线粒体DNA上的细胞色素氧化酶(Cytochrome oxidase subunit I,COI)基因,在此基础上选用10种限制性内切酶对扩增产物进行限制性片段长度多态(RFLP)分析。三个群体共发现2个多态位点,11种酶切图谱,3种基因型。三群体的多态座位比例、平均杂合度和基因型多样性指数分别为:缅甸原种F122.2%、0.0556、0.0472,广西选育群体22.2%、0.0400、0.0398,江苏养殖群体11.1%、0.0106和0.0083,群体间遗传差异未见显著。根据群体间遗传距离构建UPGMA聚类关系图,显示广西选育群体和江苏养殖群体间的遗传关系较近,而与原种F1群体的遗传关系较远。     

天津地区日本沼虾群体遗传多样性的微卫星分析

为了评估天津地区日本沼虾(Macrobrachium nipponense)野生种质资源遗传背景,采用9对微卫星分子标记(Mn33、Mn37、Mni04、Mni01、Mni06、Mni76、Mni13、Mni40、Mni58)对日本沼虾4个野生群体(YDXH、DLJH、XQLH和YQSK)进行了遗传多样性研究。结果表明,9对微卫星引物在日本沼虾4个群体中的等位基因数(Na)为3～12,有效等位基因数(Ne)为1.976 9～10.816 5,观测杂合度(Ho)为0.285 7～0.975 0,期望杂合度(He)为0.494 2～0.896 7,多态信息含量(PIC)为0.474 9～0.888 0,说明日本沼虾群体的遗传多样性水平较高;分子方差分析(AMOVA)显示,群体中仅有2.04%(P0.01)的遗传变异来源于群体间,97.96%(P0.01)的变异来源于群体内,表明遗传差变异主要存在于个体间;群体间遗传分化指数(Fst)为0.010 4～0.037 7,说明群体间的遗传分化程度并不明显;基于群体间Nei’s遗传距离采用UPGMA法对4个群体进行聚类树构建,永定新河(YDXH)与独流减河(DLJH)首先聚为一支,其次与西七里海(XQLH)聚为一支,最后与于桥水库(YQSK)聚为一支。     

三个群体罗氏沼虾线粒体COI基因的遗传多样性分析

运用PCR方法,扩增罗氏沼虾缅甸原种F1代、广西选育群体和江苏养殖群体的线粒体DNA上的细胞色素氧化酶(Cytochrome oxidase subunit I,COI)基因,在此基础上选用10种限制性内切酶对扩增产物进行限制性片段长度多态(RFLP)分析。三个群体共发现2个多态位点,11种酶切图谱,3种基因型。三群体的多态座位比例、平均杂合度和基因型多样性指数分别为:缅甸原种F122.2%、0.0556、0.0472,广西选育群体22.2%、0.0400、0.0398,江苏养殖群体11.1%、0.0106和0.0083,群体间遗传差异未见显著。根据群体间遗传距离构建UPGMA聚类关系图,显示广西选育群体和江苏养殖群体间的遗传关系较近,而与原种F1群体的遗传关系较远。     

栉孔扇贝和虾夷扇贝通用微卫星引物的筛选及其在杂种鉴定中的应用

[目的]为进行大规模栉孔扇贝×虾夷扇贝群体的杂种鉴定以及家系中的亲子鉴定提供了基础。[方法]将已发表的25对虾夷扇贝的微卫星引物在栉孔扇贝基因组DNA上进行PCR扩增,并利用筛选出的通用引物对栉孔扇贝(♀)×虾夷扇贝(♂)进行杂种鉴定。[结果]通过PCR扩增,筛选出6对引物获得扩增产物,其中2对表现为多态性。将这6对具有属间通用性的微卫星引物对栉孔扇贝(♀)×虾夷扇贝(♂)进行PCR扩增,均能扩增出特异性条带,其中引物P13F449和KMY134的扩增产物中可以明显地分辨出来自父母本群体的特有条带,从而确定了杂交子代的杂种身份。[结论]虾夷扇贝和栉孔扇贝间通用微卫星引物是存在的,而且部分引物可以直接用于属间杂种的鉴定。     

基于线粒体COⅠ基因的DNA条形码在沼虾属种类鉴定中的应用

为探索DNA条形码在沼虾属(Macrobrachium)种类鉴定中的可行性,对21种沼虾(亚洲群体7种和美洲群体14种)的COⅠ基因片段序列进行分析。结果显示:沼虾COⅠ基因组成偏倚明显,AT含量(57.74%)高于GC(42.26%),GC在各个密码子位点的含量由高到低分别为第1密码子位点(49.24%)、第2密码子位点(40.72%)、第3密码子位点(36.82%);基于Kimura2–Parameter模型分析21种沼虾的种间和种内平均遗传距离分别为0.753和0.005,种间平均遗传距离是种内遗传距离的150.6倍,符合HEBERT所推荐的鉴定不同物种的最小有效种间遗传距离为0.02以及种间遗传距离大于或等于10倍种内遗传距离的标准;在分子系统发育树中,NJ树和ML树的拓扑结构基本一致,亚洲种群和美洲种群分别以100%和82%的置信度形成2个姐妹支,并且同种沼虾都以较高的置信度聚集在同一分支内。研究结果证明,线粒体COⅠ基因能有效地对沼虾属的种类进行鉴别。     

日本沼虾幼虾的耐盐性研究

在人工养殖条件下,研究了日本沼虾幼虾（体长为2．0～2．5cm）在不同盐度条件下的平均死亡时间（MST）、半数死亡时间（ST50）、半致死盐度（MLS）以及生长率和成活率。结果表明：日本沼虾在盐度为32、34、36条件下的MST分别为19.63、6．63、2．93h;在盐度为30、32、34、36条件下的ST50分别为26．67、11．27、2．60、1．53h;MLS-24、MLS-48、MLS-72、MLS-96分别为30．71、26．66、26．31、25,80;当盐度为12时,日本沼虾幼虾的增长率和增重率最高。这说明日本沼虾的耐盐性较高,能在盐度较高的水域中养殖。     

武湖日本沼虾卵巢发育研究

日本沼虾(Macrobrachium nipponensis)是我国淡水虾中的重要种,具有较高的经济价值,研究其繁殖生物学是必要的。对日本沼虾雄性生殖系统的研究已较深入,但对卵巢发育的研究还很薄弱。本研究选取武汉市黄陂区面积为2 000 hm2的武湖为采样点,运用生态学和组织学等方法研究大水面日本沼虾卵巢的发育,旨在丰富日本沼虾繁殖生物学内容,为大水面合理利用日本沼虾资源提供参考资料。