双价抗寒基因CBF3/COR15A转化大白菜的初步研究

为探索拟南芥的冷诱导转录因子CBF3和抗寒基因COR15A在"黔白"系列大白菜的转化体系,以"黔白"系列大白菜3个优良自交系作为研究对象,分别用大白菜4d苗龄的带柄子叶、半子叶、下胚轴作为外植体,利用农杆菌介导的方法将同时含有CBF3和COR15A双价抗寒基因的表达载体转入大白菜,就影响大白菜再生和遗传转化的因素进行研究。通过抗生素筛选得到大白菜T0代转基因抗性植株36株,经PCR检测后获得转基因阳性植株6株。经抗寒性初步鉴定,转基因大白菜植株抗寒性超过对照。     

AP70抗病基因转化番茄的研究

[目的]通过基因工程提高番茄抗病性。[方法]通过冻融法将含萝卜抗真菌蛋白基因的质粒AP70转入农杆菌LBA4404中,再用农杆菌介导法将AP70抗病基因对番茄进行遗传转化,研究预培养、侵染时间等因素对AP70转化番茄的影响。[结果]带柄子叶诱导番茄产生不定芽的效率比子叶块效率高。农杆菌浸染番茄子叶前预培养1 d,不仅能提高子叶存活率,而且可降低共培养时外植体的污染率。农杆菌对番茄子叶的侵染时间最好不超过5 min。外植体筛选培养基中Kam的浓度不宜太高或太低,可获得少量转AP70基因的抗性芽。[结论]农杆菌对番茄子叶侵染前要进行稀释,且侵染时间不宜超过5 min,共培养1 d时转化率较高。     

农杆菌介导外源基因转化棉花上胚轴方法的研究

[目的]介绍一种获得棉花转基因植株的新方法。[方法]以棉花感受态萌动的上胚轴作为外源基因转化的受体,用农杆菌介导法将携带有筛选标记NPTII(新霉素磷酸转移酶)基因及GFP(绿色荧光蛋白)报告基因导入棉花,研究了农杆菌介导法用于棉花感受态萌动上胚轴转化的预培养时间,浸菌时间,共培养时间及抗生素处理浓度等。[结果]在新疆棉花离体培养植株直接再生植株基础上,经3~5d预培养处理过的棉花上胚轴,在浸菌15 min共培养2 d后,经50 mg/L kan筛选,用1 000 mg/L头孢霉素抑菌,并用相对高含量细胞分裂素和低含量生长素的组合对其进行直接出芽培养,从而获得抗性小苗。[结论]用农杆菌转化处理棉花上胚轴是一种操作简单、重复性好、非基因依赖型的转化方法。     

农杆菌介导FAD8基因遗传转化小油桐的研究

为了创制抗冷性增强的转基因小油桐新种质,本研究以苗龄15 d左右的小油桐无菌苗子叶为外植体,利用农杆菌介导法,将35S启动子驱动能够提高植物不饱和脂肪酸相对含量的拟南芥FAD8基因遗传转化小油桐,通过获得抗性植株,经GUS组织化学染色及PCR检测,证明FAD8基因已整合进入小油桐基因组中。研究获得移栽成活的小油桐转基因株系2个,与对照相比,转FAD8基因植株无明显表型差异。本研究首次获得转FAD8基因小油桐植株,为其抗冷新种质筛选及创制奠定了基础。     

农杆菌介导番茄“美粉一号”遗传转化体系优化研究（英文）

[目的]研究农杆菌介导番茄＂美粉1号＂遗传转化体系的优化。[方法]以番茄美粉1号无菌苗的子叶为外植体,通过农杆菌介导法对其遗传转化效率进行了优化,建立高效番茄子叶农杆菌介导的遗传转化体系。[结果]外植体在MS＋2mg/L6-BA＋0.5mg/LIAA进行2d的预培养后,用农杆菌EHA105（浸染浓度为OD=0.4）浸染5min,转化效率最高;经过PCR检测初步证明nptⅡ基因已整合到番茄再生植株中。[结论]该研究结果为今后优良基因导入番茄品种美粉1号奠定了基础。     

农杆菌介导番茄“美粉1号”遗传转化体系优化研究

[目的]优化农杆菌介导番茄＂美粉1号＂遗传转化体系。[方法]以番茄美粉1号无菌苗的子叶为外植体,通过农杆菌介导法对其遗传转化效率进行了优化,建立高效番茄子叶农杆菌介导的遗传转化体系。[结果]外植体在MS＋2.0 mg/L6-BA＋0.5 mg/L IAA进行2 d的预培养后,用农杆菌EHA105（浸染浓度为OD=0.4）浸染5 min,转化效率最高;经过PCR检测初步证明nptⅡ基因已整合到番茄再生植株中。[结论]该研究结果为优良基因导入番茄品种美粉1号奠定了基础。     

cNHX1基因转化草莓的研究

[目的]探讨将完整的含柑橘cNHX1基因转化为草莓植株。[方法]以弗吉尼亚草莓品种为试材构建了含柑橘cNHX1基因的植物表达载体,并进行了酶切鉴定,然后将表达载体导入农杆菌EHA105中,获得了工程菌株;利用农杆菌转化法,把cNHX1基因转化成草莓植株,并利用PCR方法鉴定了转化植株。[结果]利用农杆菌转化法获得了转cNHX1基因,通过进一步利用含Kam的平板进行筛选,获得了纯合的转基因植株;对获得的转基因草莓植株提取叶片DNA,利用引物F01和R02进行扩增,结果在草莓基因组中可以扩增出1.63kb的目的条带,证明cNHX1基因已经整合到草莓基因组。[结论]为获得耐盐程度显著提高的转基因草莓奠定了初步基础。     

农杆菌介导油菜油体基因与碱性成纤维细胞生长因子融合基因转化油菜研究

[目的]利用植物转基因技术，生产药用蛋白。[方法]以带柄子叶作为转化受体，利用根癌农杆菌介导法将油菜油体基因与bFGF的融合基因转入油菜中，在获得潮霉素（Hyg）抗性植株的同时，对油菜的再生条件进行优化，并对获得的抗性苗进行PCR和Southern检测。[结果]油菜最佳转化再生条件为外植体预培养2d，共培养3d，茵液浓度OD值为0．3，侵染时间5min。[结论]该研究中，融合基因已成功整合到油菜基因组中，为以后转基因植物种子的蛋白提取、分离和纯化奠定了基础。     

高羊茅转OsWAX2—1基因的研究

以高羊茅品种强劲为受体材料,通过农杆菌介导法将OsWAX2-1,基因导入高羊茅胚性愈伤组织,建立了农杆菌介导的高羊茅遗传转化体系,获得了转OsWAX2-1基因高羊茅植株.最优化参数为:预培养3 d,农杆菌工程菌液OD600=0.8,pH值5.2,浸染时间30min,100μM乙酰丁香酮,共培养时间3 d,潮霉素延迟筛选10d.     

甘蓝过量表达硝酸还原酶基因对硝酸盐积累的影响

为探索过量表达硝酸还原酶基因对甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)硝酸盐积累的影响,以‘中甘11号’下胚轴为外植体,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将烟草硝酸还原酶基因(NR)导入甘蓝,获得13株卡那霉素抗性植株。PCR和Southern blot检测证实,NR基因已经成功导入并整合到甘蓝的基因组。4个转基因株系硝酸盐质量分数明显低于非转基因供体株系,降幅为13.9%~23.0%。说明:将重组硝酸还原酶基因导入甘蓝且得到超量表达,创制低硝酸盐育种材料的方法可行。     

有机N与无机N配比施肥对大白菜产量和硝酸盐含量的影响研究

[目的]为大白菜的配方施肥提供依据。[方法]在粘壤土、砂壤土上种植大白菜,以不施N肥为对照,研究总养分相同时有机N与无机N不同配比施肥对大白菜产量和硝酸盐含量的影响。[结果]不同配比施肥处理均能提高大白菜的单株重,有机N∶无机N为2∶1时大白菜的产量最高。对粘壤土来说,有机N∶无机N为1∶1时大白菜的净菜率最高,达75.8%,比对照高2.8个百分点。对砂壤土来说,不同施肥处理皆可提高大白菜的净菜率,有机N∶无机N为1∶2时,净菜率最高,达75.4%。使用有机肥可明显降低大白菜硝酸盐含量。无机N∶有机N为1∶(1~2)时,大白菜的硝酸盐含量最低。[结论]有机N与无机N混合使用的增产效果好,可明显降低大白菜中硝酸盐含量。     

超声波处理对大白菜花粉管通道法转基因的影响

[目的]探索提高花粉管通道法对大白菜转化率的途径。[方法]以大白菜品种03号和玉青的花粉为材料,对其萌发的缓冲液和超声波处理的各参数进行筛选。[结果]大白菜花粉萌发的最佳缓冲液为蔗糖200g/L＋硼酸100mg/L＋硝酸钙200mg/L,较理想的超声波处理参数为功率150W、工作时间5s、间隔时间5s、处理次数8s;经浓度为200mg/L的卡那霉素筛选,获得3株T1代单株。[结论]为进一步进行大白菜的基因转化奠定了基础。     

蔬菜中硝酸盐与亚硝酸盐含量分析与评价

[目的]分析3种蔬菜中硝酸盐与亚硝酸盐的含量与变化。[方法]以大白菜、甘蓝和马铃薯为试材,采用离子色谱法测定3种蔬菜的硝酸盐和亚硝酸盐含量,并分析3种蔬菜在不同贮藏温度和不同贮藏时间下硝酸盐与亚硝酸盐含量的动态变化。[结果]大白菜、甘蓝和马铃薯的硝酸盐含量分别为7.1×102、5.1×102和2.5×102mg/kg,3种蔬菜的亚硝酸盐含量均未超标。无论在4℃还是在15～18℃条件下贮藏,3种蔬菜的硝酸盐含量均呈先升高后下降的趋势;3种蔬菜的亚硝酸盐含量可维持3～5 d基本不变,但随着贮存时间的延长,其含量均呈上升趋势。[结论]该研究为深入研究贮藏条件对蔬菜硝酸盐与亚硝酸盐含量的影响提供参考。     

超声波处理对大白菜花粉管通道法转基因的影响

[目的]探索提高花粉管通道法对大白菜转化率的途径。[方法]以大白菜品种03号和玉青的花粉为材料,对其萌发的缓冲液和超声波处理的各参数进行筛选。[结果]大白菜花粉萌发的最佳缓冲液为蔗糖200 g/L+硼酸100 mg/L+硝酸钙200 mg/L,较理想的超声波处理参数为功率150 W、工作时间5s、间隔时间5s、处理次数8s;经浓度为200 mg/L的卡那霉素筛选,获得3株T1代单株。[结论]为进一步进行大白菜的基因转化奠定了基础。     

不同施氮水平对小油菜产量及叶片硝酸盐含量的影响

[目的]研究施氮量与小油菜叶片硝酸盐含量的关系,控制小油菜叶片硝酸盐含量。[方法]利用盆栽试验,研究不同施氮水平对小油菜叶片中硝酸盐含量的影响,采用比色法测定小油菜叶片中的硝酸盐含量。[结果]随着氮肥施用量的增加,小油菜叶片中硝酸盐含量增加。[结论]为减少硝酸盐含量的积累,应适当控制氮肥用量。     

施用沼液对无土栽培小白菜产量及品质的影响

[目的]探索沼液和化学肥料组配施用对小白菜（Brassica chinensis L.）产量及品质的影响。[方法]在无土栽培条件下,利用沼液作为营养液基液进行正交试验。[结果]当施用的沼液营养液肥为1L含沼液250ml,配入3g尿素、2g磷酸二氢钾、1g氯化钙、2g硫酸镁和2ml微量元素储备液时,小白菜产量最高,为10.6g/株,而且与单纯施用化学肥料营养液（对照）相比,小白菜品质指标硝氮、Vc、可溶性糖、叶绿素含量并没有下降,Fe、Zn、Cu、Mn含量显著提高,而Cd、As含量则显著低于绿色食品绿叶类蔬菜[NY/T743-2003]重金属含量的国家标准限值。[结论]合理利用沼液栽培小白菜对提高其产量和品质有积极的作用。     

钾、锌肥与氮肥配施对油菜体内硝酸盐累积的影响

:采用盆栽试验方法探讨了钾、锌肥与氮肥配施对不同生育期油菜体内硝酸盐累积量及与其相关的硝酸还原酶 (NR)活性的影响。结果表明 ,施氮肥是使硝酸盐含量明显增加的主要原因 ,适量氮、钾、锌肥配施能明显提高油菜体内NR活性和显著降低其硝酸盐累积 ,油菜体内硝酸盐含量与NR活性呈显著负相关。在氮肥用量较高时 ,钾肥和锌肥降低油菜体内硝酸盐含量的作用在生长后期尤其明显。     

叶面施用氨基酸对菜心品质和酶活性的影响

通过盆栽试验研究了叶面喷施甘氨酸、丙氨酸、赖氨酸和谷氨酸对菜心品质和酶活性的影响。结果表明,喷施4种氨基酸均能够提高菜心产量,显著提高菜心体内可溶性糖含量,降低菜心体内硝酸盐的累积;除丙氨酸外,喷施其他3种氨基酸均能提高菜心可溶蛋白含量、降低草酸的累积;而施用氨基酸对菜心叶绿素无明显影响,致使菜心维生素C含量有所降低。同时,喷施氨基酸均能够提高菜心硝酸还原酶（NR）和谷氨酸脱氢酶（GDH）活性。说明喷施氨基酸有利于改善菜心氮代谢,降低菜心硝酸盐和草酸的积累,提高菜心可溶糖和可溶蛋白含量,改善菜心品质。     

不同贮藏方式对大白菜叶绿素降解的影响

[目的]研究不同贮藏方式对大白菜贮藏品质的影响,为大白菜的采后保鲜技术提供参考。[方法]以大白菜为试材,将其置入0℃冷库(0.03 mm PE袋包装)和传统窖中,在100 d贮藏期间内测定大白菜中与叶绿素降解相关的生理生化指标。[结果]冷库贮藏能够有效地延缓大白菜的水分损失,维持叶绿素含量,较好地抑制了参与叶绿素降解途径的相关酶活性,其中包括脱镁叶绿素酶(Pheophytinase,PPH)活性、叶绿素酶(Chlase)活性、脱镁螯合酶(Mg-dechelating)活性,而叶绿素过氧化物酶(chlorophyll-peroxidase,Chl-POX)被证实不是参与大白菜叶绿素降解的关键酶;除此之外,还较好地维持了大白菜叶绿体的完整性及其数量。[结论]0℃冷库贮藏结合0.03mm PE包装可有效抑制大白菜叶绿素的降解,对其保鲜效果最佳。     

蔬菜间作及氮肥调控对土壤硝酸盐及氮素表观损失的影响(英文)

[目标]研究蔬菜间作及氮肥调控对土壤硝酸盐及氮素表观损失的影响,为菜地合理施肥及减少环境污染提供理论依据。[方法]采用大田试验方法,选择深根系的茄子和浅根系的大葱进行间作种植,并辅以氮素调控措施,研究其对土壤硝态氮时空变异规律及氮素表观损失的影响。[结果]在减量施肥条件下,土壤硝酸盐运移和累积的规律均为间作区含量低于单作区,表明与单作相比,茄子与大葱间作能有效阻截硝酸盐的向下淋洗,并有效减少土壤中硝酸盐累积量。间作种植模式下,减量施肥能够减少土壤中硝酸盐含量,特别是深层土壤,在作物生长期间,硝酸盐含量均比常规施肥区明显降低;土壤剖面硝酸盐累积量也表现为减量施肥区明显低于常规施肥区。采用蔬菜间作和减量施肥,均能不同程度地减少氮素的表观损失。[结论]该研究结果为蔬菜高产种植及田间合理施肥奠定了基础,在减少环境污染上有重要意义。