新疆加工番茄病毒病毒原种类及TMV,CMV株系的鉴定

对１９９１，１９９２和１９９４年采集的４１２份加工番茄病毒病样本的鉴定结果表明，新疆加工番茄主要毒原种类有烟草花叶病毒（ＴＭＶ）、黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）、马铃薯Ｘ病毒（ＰＶＸ）和马铃薯Ｙ病毒（ＰＶＹ），分别为样本数的４０．５％，２４．８％，１４．６％和４．４％。ＴＭＶ主要株系为０株系，占分离物的６５．７％，其次为１株系占３４．３％，没有发现２株系和１．２株系。ＣＭＶ以轻花叶株系为主，占分离物的６６．７％，重花叶株系为次，占３３．３％。     

陕西烟草主要蚜传病毒病发生及预测预报研究

研究结果表明,陕西烟田烟草蚜传病毒病的初侵原主要来自当地的冬油菜田,冬油菜带毒量占总越冬毒量的８７．３６％,烟草蚜传病毒病的主要类群有烟草黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）、烟草蚀纹病毒（ＴＥＶ）、马铃薯Ｙ病毒（ＰＶＹ）。迁入陕西烟草的有翅桃蚜和棉蚜为ＣＭＶ、ＴＥＶ、ＰＶＹ三者的共同介体,萝卜蚜是ＣＭＶ及ＰＶＹ的介体。迁入烟田的有翅蚜有２个迁飞高峰,呈双峰曲线,第１高峰期出现在５月是旬至５月底６月初,此次迁飞     

天津地区辣椒病毒种群鉴定与分析

用ＡＰ－白蛋白ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法对危害本市郊县辣椒生产的４种主要病毒进行了检测,并分析了病毒种群的消长规律。检测结果表明,８０～９０年代的１０余年间ＣＭＶ侵染率明显下降,而ＴＭＶ、ＰＶＸ、ＰＶＹ则明显上升,４种病毒检出率排序由８０年代的ＣＭＶ－ＴＭＶ－ＰＶＸ－ＰＶＹ变成ＴＭＶ－ＰＶＸ－ＰＶＹ－ＣＭＶ。早春至盛夏ＴＭＶ、ＰＶＸ检出率急剧上升并保持较高水平,应作为主要的抗病育种的目标和防治的对象。ＣＭＶ、ＰＶＹ的侵染高峰出现较晚并主要以与ＴＭＶ、ＰＶＸ复合侵染形式出现,构不成主要的威胁,可作为次要的抗病育种目标和防治对象。     

山东省侵染西瓜的西瓜花叶病毒（WMV－2）和黄瓜花叶病毒（CMV）的研究

从采自平度、临沂两地的西瓜病叶中得到两个病毒分离物Ｗ—ＰＤ和Ｗ—ＬＹ。Ｗ—ＰＤ可侵染３科８种植物，可由桃蚜以非持久性方式传播。钝化温度６５℃，稀释限点１０￣（－４）～１０￣（－５），体外存活期２０～２５ｄ。提纯病毒呈典型的核蛋白吸收，最大吸收峰为２６０ｎｍ，最小吸收峰为２４６ｎｍ。Ａ２６０／Ａ２８０＝１．２４。病毒外壳蛋白分子量为３３．３４ＫＤ。Ｗ—ＰＤ的粒子线状，长度为６００～７５０ｎｍ。在病组织超薄切片中可以看到风轮状和环状内含体。Ｗ—ＰＤ与ＷＭＶ—２的抗血清有明显的沉淀反应。以上结果表明，Ｗ—ＰＤ为ＷＭＶ—２的一个分离物。Ｗ—ＬＹ可侵染５科１３种植物。钝化温度７０℃，稀释限点１０￣（－３）～１０￣（－４），体外存活期３～５ｄ，可由桃蚜以非持久方式传播，与ＣＭＶ的抗血清有明显的沉淀反应。Ｗ—ＬＹ应为ＣＭＶ的一个分离物。ＷＭＶ—２是我省西瓜病毒病的主要毒原，其分出率为７５％，ＣＭＶ的分出率为１６．３５％。     

番茄双抗TMV和CMV基因工程的研究

在ＴＭＶ外壳蛋白（ＣＰ）基因的５′和３′端分别合成寡聚核苷酸引物Ｐ１和Ｐ２，并分别引入ＣｌａＩ和ＢａｍＨＩ位点，采用ＰＣＲ技术扩增ＴＭＶＣＰ基因，用ＣｌａＩＢａｍＨＩ消化后重组到ｐＢｌｕｅ ｓｃｒｉｐｔＫＳ＋中，并将该基因与ＣＭＶＣＰ基因重组在同一个表达载体ｐＥ３上获得双价ＣＰ基因表达载体ｐＥＴＣ２，转化番茄，获得再生植株。通过点杂交、ＰＣＲ检测和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，证实２、１２和１３号为转ＴＭＶ和ＣＭＶＣＰ基因的工程植株。工程植株在温室中表现正常，比对照植株表现出明显的抗性。     

辣椒抗病毒病研究现状概述

辣椒是当前生产中大面积栽培的主要蔬菜种类之一,在全国各地普遍栽培。20世纪70年代以来,由于品种交流范围扩大、交流速度加快以及耕作制度的限制,使得病毒病的传播进一步加快,病毒病由原来的次要病害逐渐上升成为辣椒的主要病害,危害逐年加重,严重影响了辣椒的产量和品质〔1,2〕。辣椒病毒病的毒源,从1923～1925年Ｄｏｌｉｔｔｅ证实黄瓜花叶病毒(ＣＭＶ)侵染辣椒以来,世界各国已分离到30余种病原病毒,其中最主要的是烟草花叶病毒(ＴＭＶ)、黄瓜花叶病毒(ＣＭＶ)、马铃薯Ｙ病毒(ＰＶＹ)、烟草蚀纹病毒(ＴＥＶ)、黄瓜绿斑花叶病毒(ＣＧＭＭ…     

几种药剂对病毒侵染和植物抗病性的影响

用４０μｇ／Ｌ的ＣＴ,ＥＫ,ＥＨ,ＰＡＰ和ＭＡＰ在体钝化ＣＭＶ１ｈ后接种,枯斑数依次降低达１５．２％,８８．５％,６４％,２８．１％和６１．６％。在接种ＣＭＶ前２４ｈ喷施８０μｇ／Ｌ的ＣＴ,ＥＫ和ＥＨ,预防效果依次为９２．４％,９０％和８２％,将浓度提高到１００μｇ／Ｌ时３种药剂能完全低抗ＴＭＶ的摩擦接种和ＣＭＶ的３头蚜虫接种。     

双线盗毒蛾NPV-Bt-白僵菌复合杀虫剂初步研究

通过室内生物测定和野外试验，筛选出双线盗毒蛾ＮＰＶ－Ｂｔ－白僵菌复合杀虫剂的最佳组合为Ｂ１Ａ１Ｃ３，即Ｍ－Ｂｔ孢子５００亿个／Ｌ＋ＰｓＮＰＶＰＩＢ５×１０１０／Ｌ＋白僵菌孢子１０００亿个／Ｌ．复合杀虫剂中添加低浓度化学农药有明显增效作用，但对ＰｓＮＰＶ的传代不利．林间防治以隔行带状喷洒较好．     

沈阳地区唐菖蒲病毒种类鉴定

通过沈阳地区栽培唐菖蒲的病毒病症状类型调速查，以及对病毒毒原的生物学测定、电镜观察、对流免疫电泳测定和间接酶联免疫吸附法测定，明确沈阳地区种植的唐菖蒲受黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）、菜豆黄花叶病毒（ＢＹＭＶ）和烟草花叶病毒（ＴＭＶ）的浸染。阐明了染病寄主的症状与病毒毒原种类的相关性，在典型症状中，碎色症和斑驳症的植株多为受ＣＭＶ侵染造成，条斑症和皱叶症主要是由ＢＹＭＶ侵染引起。ＴＭＶ的含量较低，尚未单独引起寄主的典型症状。     

TMV蚕豆株系CP基因及3′端非编码区序列分析与表达

根据烟草花叶病毒Ｕ１株系ＴＭＶ－Ｕ１序列，人工合成引物，通过ＰＣＲ扩增并克隆了烟草花叶病毒蚕豆株系（ＴＭＶ－Ｂ）的外壳蛋白（ＣＰ）基因和３′端非编码区．ＤＮＡ全序列测定结果表明，外壳蛋白基因全长４５９个碱基，编码１５１个氨基酸，３′端非编码区全长２２４个碱基．与ＴＭＶ－Ｕ１株系相比，ＴＭＶ－Ｂ仅在ＣＰ基因上有一个碱基缺失，并导致ＣＰ基因提前终止，使其编码的氨基酸少７个．将ＣＰ基因及３′端非编码区插入ｐＧＥＭＥＸ－１的Ｔ７基因１０中，转入Ｅ．ｃｏｌｉ后诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳分析呈现一特异的蛋白带．Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫检测证明，该特异带与ＴＭＶ抗血清呈阳性反应．将ＣＰ基因正向插入植物表达载体ＰＢⅠ１２１中，置于花椰菜花叶病毒３５Ｓ启动子控制之下，获得了植物表达载体ｐＺＬ５     

计算机病毒的预防和杀毒策略

针时计算机病毒的种类，常见的传播方式，命名规则以及命名解释进行了介绍，并根据其传播方式，介绍了相应的防毒措施和有效的顽固性病毒杀毒策略。按照所介绍的知识，能够防止绝大部分病毒时网络计算机的入侵，并能够在杀毒软件无效的情况下，对顽固性病毒进行彻底地查杀。     

种籽和花粉传播植物病毒状况及存在问题

本文综述了国内外有关种籽和花粉传播植物病毒的重要资料,指出种籽传播病毒的特征．目前已知的在分类上属于２３群的１０８种和未归类的９种种传植物病毒中,我国已见报道的有１７种,花粉传播的植物病毒共１０种,其中９种分属于３个分类群,另有１种尚未归类．对存在的问题提出了讨论．这些问题包括多种过去被误认为是种传的病毒、同物异名的种传病毒、隐性病毒、未经证实的种传病专以及通过花粉和种籽传播的“类病毒草”等．     

表达狂犬病病毒糖蛋白的重组伪狂犬病病毒gG-基因缺失转移载体的构建

以伪狂犬病毒TK-/gI-缺失疫苗株为亲本株提取病毒基因组DNA,克隆含gG基因的EcoRⅤ/StuⅠ片断,用限制性内切酶BamHⅠ和NdeⅠ缺失gG基因,构成重组质粒pIRⅤ。同时,分别将狂犬病病毒SRV9的株糖蛋白和绿色荧光蛋白克隆入载体pIRESneo,构建平行表达糖蛋白和绿色荧光蛋白表达盒。将表达盒插入到pIRⅤ,构建gG基因缺失转移载体,为下一步同源重组获得伪狂犬病毒奠定基础。     

蓝舌病病毒、流行性出血病病毒和帕利亚姆血清群病毒三重RT-qPCR检测方法的建立及应用

目的 建立蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)、流行性出血病病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)及帕利亚姆血清群病毒(Palyam serogroup virus,PALV)快速筛查和诊断的三重RT-qPCR检测技术。方法 选择BTV的NS3、EHDV的NS1以及PALV的VP7基因作为靶基因,设计3组特异性引物和探针,建立3种病毒的三重RT-qPCR检测方法。对检测方法的灵敏度、特异性和重复性进行验证,同时使用我国分离的BTV、EHDV与PALV不同血清型毒株和对应的阳性血液样本,与24个BTV血清型及6个EHDV血清型参考毒株对该三重法的检测效果进行验证。结果 三重RT-qPCR的扩增效率均可达90%以上,对3种病毒核酸拷贝数的检测下限均为10 μL^-1级别,与单重法的检测灵敏度相当;与阿卡斑病毒、小反刍兽疫病毒、口蹄疫病毒和牛流行热病毒之间无交叉反应;Ct值批内、批间变异系数均在2%以内;可检测出24种BTV血清型、6种EHDV血清型与3种PALV血清型,具有群特异性;可有效检测血液中的病毒核酸,检测结果与单重法一致。结论 本研究建立的BTV、EHDV与PALV三重RT-qPCR具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于临床样本中对3种病毒的同时诊断与筛查。     

植物病毒检测技术研究进展

综述了植物病毒鉴定与检测技术的研究进展,介绍了生物学、电子显微镜观察、免疫学、分子生物学技术（PCR、NASH、FISH、ds-RNA、芯片检测等）方面的植物病毒检测方法的特点、发展应用方向等。     

陕西辣椒病毒病的毒原鉴定及化学防治药剂筛选

分别从陕西咸阳、兴平、杨凌、柔谷、眉县、岐山、凤翔等地采集辣椒病毒病标样126份,在室内通过单斑分离及回接验证得到5种分离物,采用鉴别寄主的生物学反应和DA S-EL ISA法鉴定,结果表明,引起陕西辣椒病毒病的毒原有黄瓜花叶病毒(CM V)、烟草花叶病毒(TM V)、烟草蚀纹病毒(TEV)、马铃薯Y病毒(PVY)和蚕豆萎蔫病毒(BBW V),其中CM V和TM V是优势毒原种群,分别占检测样品的60.31%和30.94%。在室内分别以CM V和TM V的枯斑寄主苋色藜和心叶烟为测试寄主,采用半叶法对接种叶片分别于接种前和接种后涂施病毒抑制剂,测试了7种病毒抑制剂的抑制效果。结果表明,接种前后涂施3.85%病毒必克水乳剂500倍液,均对黄瓜花叶病毒和烟草花叶病毒有很好的防治效果,且接种前涂施的防治效果较接种后涂施的防治效果好。     

鸡痘病毒载体研究进展

本文就鸡痘病毒作为基因工程重组疫苗的重要载体研究的进展作以综述，主要包括鸡痘病毒表达载体的构建，外源基因在重组鸡痘病毒中的表达及免疫效果，并对鸡痘病毒载体的研究及开发应用前景加以展望。     

广州市郊及其邻近地区辣椒CMV和TMV的鉴定

根据对广州市郊及其邻近地区辣椒病毒病的田间调查、寄主范围和症状特点、血清学反应以及RT-PCR的试验结果，证实了黄瓜花叶病毒(CMV)是广州市郊及其邻近地区辣椒病毒病的主要毒原之一；通过生物学和血清学方法，鉴定了烟草花叶病毒(TMV)是另一主要毒原。在采集的病样中，根据鉴别在寄主上的症状特点，主要存在两种类型的分离物，分别称为分离物Ⅰ和分离物Ⅱ。分离物Ⅰ在辣椒、西葫芦、三生烟、普通烟、心叶烟、曼陀罗等寄主植物上引起花叶等症状，在苋色藜、昆诺阿藜上产生局部枯斑，不侵染千日红，由此可初步鉴定为CMV；从间接ELISA和RT—PCR的检测结果也可判断分离物Ⅰ是CMV，其检出率为36．67％。分离物Ⅱ在辣椒、普通烟上产生花叶症状，在心叶烟、曼陀罗、千日红、三生烟、苋色藜和昆诺阿藜等寄主植物上产生局部枯斑，而不侵染西葫芦，由此可初步鉴定其为TMV；间接ELISA检测结果表明，分离物Ⅱ是TMV，其检出率为43．33％。另外，TMV在田间发生率明显高于CMV。     

小苍兰3种病毒多重RT-PCR检测体系的建立

根据GenBank中已发表的小苍兰花叶病毒Freesia mosaic virus (FreMV)、黄瓜花叶病毒Cucumubermosaic virus (CMV)和菜豆黄花叶病毒Bean yellow mosaic virus (BYMV)外壳蛋白(CP)基因序列保守区域分别设计特异性引物,通过优化多重PCR反应条件,建立能同时检测小苍兰3种病毒的多重PCR检测体系.该体系能够一次扩增出FreMV,CMV和BYMV的特异片段,其大小分别是340、628和212 bp.测序结果表明,3种病毒序列与相应的参考序列相似性均达97％以上.灵敏度测定结果表明,从≥10-2mg的感病植物组织中能够检测到这3种病毒.     

乐都紫皮大蒜4种病毒多重RT-PCR检测技术的建立

【目的】建立乐都紫皮大蒜4种病毒的多重RT PCR快速检测方法，为大蒜病毒病病原鉴定、脱毒效果验证等提供技术支撑。【方法】根据乐都紫皮大蒜RNA全长转录组测序结果，分别设计洋葱黄矮病毒（onion yellow dwarf virus，OYDV）、大蒜潜隐病毒（garlic latent virus，GLV）、大蒜D病毒（garlic virus D，GarVD）和大蒜X病毒（garlic virus X，GarVX）4种病毒的外壳蛋白特异性引物，筛选不同引物，优化引物用量、模板用量、退火温度等条件，并进行了多重RT PCR的灵敏度检测和12份引进栽培大蒜种质资源的病毒检测。【结果】通过优化筛选，在一个PCR反应体系中实现了OYDV（1 232 bp）、GLV（831 bp）、GarVD（506 bp）和GarVX（116 bp）4种病毒的多重检测，最优反应条件为退火温度55 ℃，模板用量2.5 μL，混合引物用量1.0 μL。多重RT PCR的灵敏度略低于单一RT-PCR。对引进的12份栽培大蒜资源进行4种病毒的多重RT-PCR检测发现，有5份资源存在4种病毒，4份资源存在2种病毒，3份资源存在1种病毒。对7份资源中经多重PCR未检测到的病毒，使用单一RT-PCR进行检测和验证发现，除1份内蒙古资源（NMG）的1种病毒（GarVX）外，多重RT PCR结果与单一RT-PCR检测结果一致。【结论】本研究建立的大蒜多重RT-PCR体系可靠性强，可用于大蒜病毒的检测与防控