1株海洋来源产阿魏酸酯酶菌株的筛选及其对木质纤维材料的降解能力

利用平板透明圈法,从海水中分离得到3株具有阿魏酸酯酶活性的菌株。其中,菌株S1表现出良好的阿魏酸酯酶活性且产酶周期短。根据其形态特征、分子生物学鉴定结果,推测S1为嗜甲基菌科。这是首次发现嗜甲基菌科菌株具有阿魏酸酯酶活性。以去淀粉麦麸(DSWB)为底物检测酶学性质,结果表明,S1所产阿魏酸酯酶FAES1酶活性为(2.81±0.35)U/mL,该酶最适反应温度为45℃,最适反应pH值为7.0。FAES1在70℃保温2 h仍可保持80%以上酶活性,表现出良好的热稳定性。FAES1对DSWB、汽爆小麦秸秆(SEWS)、汽爆玉米秸秆(SECS)表现出一定的降解能力,以对DSWB的降解能力最强。FAES1与木聚糖酶协同作用6 h,分别能够释放DSWB、SEWS、SECS中46.0%、33.2%、14.1%的阿魏酸。     

荷斯坦阉牛瘤胃液中阿魏酸酯酶和乙酰酯酶的酶学特性研究

为研究瘤胃液中阿魏酸酯酶和乙酰酯酶的酶学特性,自安装永久瘤胃瘘管的成年荷斯坦阉牛瘤胃中采集瘤胃食糜液,4℃1 000g离心10min制备成粗酶液,测定了粗酶液中阿魏酸酯酶和乙酰酯酶活性及其酶促反应动力学参数。结果表明,瘤胃液中阿魏酸酯酶酶促反应最适pH为9.0,最适温度为40～50℃;用阿魏酸甲酯作为为酶促反应标准底物,测得米氏常数(Km)为0.76mmol/L,最大反应速度(Vmax)为5.43mU;乙酰酯酶酶促反应最适pH为8.0,最适反应温度为50℃。用对-硝基苯乙酰酯作为标准底物,测得Km为0.64mmol/L,Vmax为91.00mU。研究发现Fe2+可以促进阿魏酸酯酶酶促反应,而Cu2+等金属离子可以抑制阿魏酸酯酶酶活性;Mg2+、K+、Co2+、Ca2+和Mn2+则可促进乙酰酯酶酶促反应。尽管瘤胃内环境并不能为2种酯酶发挥最大酶效提供最适温度和pH条件,相比较而言,阿魏酸酯酶在瘤胃液中稳定性更优于乙酰酯酶。     

果胶酶酶解大枣发酵产酯的研究

[目的]探索果胶酶酶解大枣发酵产酯的最佳酶解工艺条件。[方法]以枣和水或豆芽汁为发酵底物,乙醇为中间产物辅料,设计L9（34）枣香料酶解发酵产酯生产最佳工艺条件试验。4因素分别为酶量、料液比、酶解温度、酶解时间,每个因素设3个水平。以产酯量作为评定指标。通过单因素试验确定底物和乙醇添加量。[结果]发酵底物用豆芽汁加枣,乙醇添加量为3％时,果胶酶较佳的酶解条件为果胶酶加入量0．2％,料液比1：5（W／W）,酶解温度45℃,酶解时间2h,乙醇添加量为3％,枣香料产酯率最高,可达5．63mg／ml。[结论]为利用酶和产酯微生物定向开发新的烟用枣香料提供了依据。     

灰绿青霉阿魏酸酯酶的分离纯化和酶学性质研究

[目的]研究青霉(Penicillium glaucum)XGY36胞外产阿魏酸酯酶的纯化和酶学性质。[方法]菌株胞外产酶发酵液经硫酸铵沉淀、DEAE-cellulose DE52离子交换柱层析、Sephadex-G75分子筛层析进行纯化,得到纯度较高的酶蛋白,并对其酶学性质进行研究。[结果]从菌株发酵液中分离纯化到电泳纯的阿魏酸酯酶,纯化倍数6.54,酶活性回收59.7%。阿魏酸酯酶经SDS-PAGE获得1个条带,其表观分子量为36.5 ku。催化底物阿魏酸乙酯的最适反应温度为50℃,最适p H为5.0。阿魏酸酯酶在60℃以下和p H 3.0~7.0范围内稳定。金属离子Zn~(2+)、Mg~(2+)、Ca~(2+)对酶有明显的激活作用,而Pb~(2+)、Hg~(2+)和Ag+对阿魏酸酯酶有强烈的抑制作用,Na+、K+、Mn~(2+)、Cu~(2+)和Fe~(2+)对酶活的影响不大。[结论]青霉阿魏酸酯酶具有潜在的应用价值,适合应用于食品、医药及生物等领域。     

绿色木霉C-08产纤维素酶的固态发酵条件优化

以稻草粉与麦麸为主料,对影响绿色木霉(Trichoderma viride)C-08固态发酵生产纤维素酶、半纤维素酶的营养因素和环境条件进行了研究。结果表明:秸秆粉和麸皮为2∶4最适合产酶;铵态氮适合C-08产CMCase,NO3-利于产Xylanase,其中NH4NO3最好;料水比1∶2,适合C-08产CMCase,1∶2.5适合产Xylanase;稻草粉粒度40~100目时,适合C-08产CMCase,此范围外适合产Xylanase;pH值为4时,适合C-08产酶;孢子接种量为7.5×107孢子.mL-1时,适合C-08产酶;低于28℃时适合C-08产酶;最适发酵时间为72h。该菌株在以上条件下产酶效果较好,为实际应用奠定了基础。     

康宁木霉固态发酵生产纤维素酶条件研究

以稻草粉与麦麸为主料,对影响康宁木霉(Trichoderma koningii)固态发酵生产纤维素酶的因素,如秸秆粉和麦麸的用量比、料水比、初始pH值、氮源及其浓度、发酵温度和时间等进行了研究.结果显示,秸秆∶麦麸比为3∶2、料水比为1∶2、初始pH值为6.0、以0.5%尿素液为氮源、36℃培养72 h的产酶活力最高,CMC酶和β-葡萄糖苷酶分别比基础发酵条件下增加了44.8%和301.6%.     

米曲霉固态发酵豆粕产蛋白酶条件的研究

通过单因素(温度、豆粕含量、发酵时间)试验和3因素3水平正交试验,以蛋白酶活为测定指标,对米曲霉固态发酵豆粕产蛋白酶条件进行研究,结果表明:米曲霉固态发酵豆粕产蛋白酶最优条件是发酵温度30℃,发酵时间66 h,豆粕含量93%,此条件下的酶活为572.85 U/g。     

根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统的构建

[目的]建立根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统,探讨利用泡盛曲霉表达异源蛋白的可行性。[方法]从国内主要菌种库中购买泡盛曲霉菌株,根据分泌蛋白图谱分析确定合适的宿主菌,在此基础上通过药物敏感性分析确定遗传转化的选择标记,并利用构建的泡盛曲霉遗传转化体系对米黑根毛霉脂肪酶基因RML进行转化、表达研究,通过转化子鉴定及性质分析考察泡盛曲霉作为异源蛋白表达系统的可行性。[结果]通过分泌蛋白图谱分析确定泡盛曲霉CBS115.52和CICC2257作为异源蛋白表达的宿主菌;药物敏感性试验确定潮霉素抗性基因(HygBr)作为有效的遗传选择标记;在此基础上,利用根癌农杆菌介导的转化方法(agrobacterium tumefaciensmediated transformation,ATMT),将带有HygBr的质粒pHGW-amdS成功导入泡盛曲霉宿主菌CBS115.52,建立以HygBr为选择标记的泡盛曲霉遗传转化体系。利用该体系,介导米黑根毛霉脂肪酶(Rhizomucor miehei lipase,RML)的表达载体转化泡盛曲霉,通过底物水解试验、SDS-PAGE及Western blot确定RML基因已在泡盛曲霉中表达。[结论]该研究证明了根癌农杆菌介导转化泡盛曲霉作为异源蛋白的表达体系具有潜在的可行性。     

利用小麦麦麸制备阿魏酸工艺条件的初步研究

[目的]研究通过酶法和碱提取方法利用小麦麦麸制备阿魏酸的工艺条件。[方法]用酶对小麦麦麸进行预处理,去除淀粉、蛋白质和糖类物质,用氢氧化钠提取阿魏酸,麦麸与碱液的比例为1∶20,通过正交试验分别确定酶法处理干燥小麦麦麸和碱液提取阿魏酸的最优工艺条件。[结果]用酶法预处理干燥小麦麦麸的最优工艺条件是:耐高温α-淀粉酶、蛋白酶和糖化酶的加酶量分别为2 000、1 398和50 000 U/g麦麸;用碱法从经酶预处理的麦麸中提取阿魏酸的最佳工艺条件是:氢氧化钠浓度为1.5%,提取温度为85℃,提取时间4h,同时在氢氧化钠中加入0.5%的KBH4,可有效增加阿魏酸的在提取液中的保留量,阿魏酸得率可达9.414%~10.937%。[结论]该研究为提高小麦麦麸的利用率和附加值提供科学依据。     

绿色木霉纤维素酶AS3.3032固态发酵的研究

该研究以麦麸和汽爆蔗渣为主要原料 ,采用绿色木霉AS3 30 32 (Trichodermaviride)固态发酵生产纤维素酶 ,研究了氮源、碳源、表面活性剂、接种方式、培养基含水量、培养温度、培养基起始pH值对绿色木霉产酶活力的影响 .研究结果表明 :①以硫酸铵为氮源 ,其FPA ,CMC ,和 β Gase酶活力均较高 ,每克干曲分别高达 12 2 5FPAU g ,1470 0CMCU g和 119 3β GaseU g ;②碳源以麸蔗比为 3∶2时 ,FPA ,β Gase和CMC酶活力均为最高 ,每克干曲分别高达 138 2FPAU g ,134 6 β GaseU g和 16 0 3 1CMCU g ;③添加 0 1%的Tween 80和 0 5 %～ 0 7%的洗衣粉可分别提高FPA ,β Gase和CMC为 2 3倍、2 8倍、2 3倍和 3 1倍、3 7倍、3 0倍 ;④培养基含水量、培养温度、培养起始pH值分别为 2 5 0 % ,2 8℃和pH3 5 ,产酶活力最高     

利用麦麸制备低聚糖阿魏酸酯的研究

利用木聚糖酶和Viscozyme L水解去淀粉和蛋白质后的小麦麸皮(DSPWB)制备低聚糖阿魏酸酯(FO)。结果表明,酶解制备FO的最佳条件为:料液比1∶20,酶添加量3 g/L(木聚糖酶和Viscozyme L添加量之比为2∶1),在pH4.5、60℃下酶解8 h。在该条件下,酶解产物的总固形物、还原糖、总糖含量分别为277、104、215 mg/g;FO中的阿魏酸含量为2.73 mg/g。     

南宁市西乡塘区农场土壤真菌种类的调查与鉴定

对南宁市西乡塘区农场4种土壤中真菌种类及其分布情况进行调查研究,共分离鉴定出8属12种,其中毛霉属（Mucor Fresen）2种;沙氏毛霉属（Saksenaea Saksena）1种;小克银汉霉属（Cunninghamella Matruchot）1种;犁头霉（Absidia Van Tiegh.）1种;曲霉属（Aspergillus（Mich）Link）3种;丝核菌属（Rhizoctonia de Candolle）1种;地霉属（Geotrichum Link）1种;青霉属（Penicillium Link）2种。     

一种新的耐热性植酸酶基因在烟草中的表达

[目的]探究一种新的耐热性植酸酶基因在烟草中的表达结果。[方法]克隆了泡盛曲霉植酸酶基因编码区全序列,使其在烟草中高效表达,对重组植酸酶与天然植酸酶性质进行初步的分析和比较。[结果]对烟草叶片的植酸酶活性检测结果表明,重组植酸酶基因在烟草中得到较高水平表达,转基因植株的最高植酸酶活力为对照烟草的13倍;对烟草重组植酸酶蛋白的酶学性质进行了初步分析,结果表明重组植酸酶拥有与天然植酸酶同样的最适pH值和最适温度,耐热性略微下降,但在80℃处理15 min后仍有33%的残余酶活力。[结论]该研究为该植酸酶基因转化饲料作物的开发提供理论依据,也为泡盛曲霉植酸酶的工业化生产开辟了新的途径。     

嗜热子囊菌JCM12803来源的阿魏酸酯酶FAE-2515酶学性质研究

阿魏酸酯酶广泛应用于食品、药品、饲料及造纸等行业,挖掘适用于工业化的阿魏酸酯酶至关重要。从嗜热真菌Thermoascus crustaceus JCM12803中克隆得到一个阿魏酸酯酶基因FAE-2515,经基因序列分析,FAE-2515 cDNA全长为1 581 bp,编码526个氨基酸和1个终止子,理论分子量大小为57 kDa,等电点为5.08。将FAE-2515成功地在毕赤酵母中实现高效异源表达,通过对重组蛋白进行酶活测定,比活为（53.653±3.451）U/mg,Kcat/Km值为1.423,最适pH为6.0,最适温度为55℃,60℃处理1 h之后还能保持60%的酶活,热稳定性较已报道的同类酶更为稳定。以阿魏酸甲酯为底物时酶活表现为最高,以硝基苯棕榈酸酯为底物时几乎没有酶活。金属离子K+、Ca2+、Na+对该酶有显著的促进作用,Fe3+、Zn2+对该酶有轻微抑制作用,Mn2+、Cu2+对该酶有显著的抑制作用。综上,该酶在造纸工业和动物饲料制备工业中具有一定优势。     

Expression, Glycosylation, and Secretion of an Aspergillus Glucoamylase by Saccharomyces cerevisiae

A strain of Saccharomyces cerevisiae capable of simultaneous hydrolysis and fermentation of highly polymerized starch oligosaccharides was constructed. The Aspergillus awamori glucoamylase enzyme, form GAI, was expressed in Saccharomyces cerevisiae by means of the promoter and termination regions from a yeast enolase gene. Yeast transformed with plasmids containing an intron-free recombinant glucoamylase gene efficiently secreted glucoamylase into the medium, permitting growth of the transformants on starch as the sole carbon source. The natural leader sequence of the precursor of glucoamylase (preglucoamylase) was processed correctly by yeast, and the secreted enzyme was glycosylated through both N- and O-linkages at levels comparable to the native Aspergillus enzyme. The data provide evidence for the utility of yeast as an organism for the production, glycosylation, and secretion of heterologous proteins.     

不同产地云当归中阿魏酸的含量比较

[目的]比较不同产地云当归中阿魏酸的含量。[方法]以高效液相色谱法测定14个产地的云当归中阿魏酸含量。[结果]14个不同产地云当归样品中阿魏酸的含量为0.598-1.459mg／g。大理鹤庆马场产云当归中阿魏酸含量最高,富源洞上村岔河产云当归中阿魏酸含量最低。[结论]为进一步开发利用云当归资源提供了依据。     

HPLC测定不同采收期川楝子中阿魏酸的含量

目的]测定不同采收期川楝子中阿魏酸的含量,并考察阿魏酸在采收期内的含量变化。[方法]采用高效液相色谱法,色谱柱为UltrasphereTM-ODS柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85=V∶V）,流速为1.0 ml/min,检测波长为322nm,柱温为25℃。[结果]不同采收期川楝子药材中阿魏酸含量无显著变化,以1月份采集的样品中阿魏酸含量最高。[结论]该方法简便、快速,可为川楝子确定最佳采收期提供科学依据。     

烹调方法对马铃薯抗氧化活性及多酚类物质含量的影响

马铃薯是抗氧化活性较高的蔬菜之一,以Gogu Valley、Purple Valley和Superior 3个马铃薯品种为试材,用DPPH方法测定了鲜马铃薯以及经常压水煮、压力蒸煮、微波和油炸不同烹调处理后的抗氧化活性;用HPLC法检测了鲜马铃薯及各处理后多酚类物质(绿原酸、咖啡酸及阿魏酸)的含量.结果表明:Purple Valley 的多酚类物质含量最多且抗氧化活性最高;马铃薯经烹调后其抗氧化活性和多酚类物质含量均比鲜马铃薯降低;微波处理方法可保持较高的抗氧化活性和多酚类物质含量.     

干燥方法对蘼芜中阿魏酸含量的影响

[目的]研究干燥方法对蘼芜中阿魏酸含量的影响。[方法]采用高效液相色谱法测定不同干燥方法处理的蘼芜中阿魏酸的含量。[结果]阿魏酸在进样量0.011 48～0.114 8μg/ml浓度范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为100.1%,RSD为1.18%(n=9);采用晒后烘干法干燥的蘼芜中阿魏酸的含量为0.005 4%,RSD为1.55%;采用自然阴干法干燥的蘼芜中阿魏酸的含量为0.008 0%,RSD为1.80%;采用晒后烘干法干燥的蘼芜中阿魏酸的含量为0.010 5%,RSD为1.07%。结果表明,3种干燥方法中,以晒后烘干处理的蘼芜中阿魏酸的含量最高。[结论]蘼芜的最佳干燥方法为晒后烘干法。