GMP玻璃化冷冻对水牛MⅡ期卵母细胞

将体外成熟(IVM)24 h的水牛卵母细胞随机分成对照组、冷冻剂毒性试验组、GMP玻璃化冷冻组,研究玻璃微细管法(GMP)冷冻对水牛MⅡ期卵母细胞冷冻损伤和体外受精后发育能力的影响.结果表明:冷冻剂毒性试验组的存活率显著高于GMP玻璃化冷冻组;在透明带消化时间上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组显著高于对照组.在单精入卵率上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组显著低于对照组;在无精子入卵率上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组与对照组差异显著;而多精入卵率3组间差异不显著.卵母细胞冷冻后进行体外受精,3组之间的2- 细胞率,8- 细胞率和桑椹胚率差异均极显著.表明冷冻剂和GMP玻璃化冷冻均会引起水牛MⅡ期卵母细胞透明带硬化,降低精子穿透率和其体外受精的发育能力.     

GMP玻璃化冷冻对水牛MⅡ期卵母细胞冷冻损伤和体外发育能力的影响

将体外成熟(IVM)24h的水牛卵母细胞随机分成对照组、冷冻剂毒性试验组、GMP玻璃化冷冻组,研究玻璃微细管法(GMP)冷冻对水牛MⅡ期卵母细胞冷冻损伤和体外受精后发育能力的影响。结果表明:冷冻剂毒性试验组的存活率显著高于GMP玻璃化冷冻组;在透明带消化时间上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组显著高于对照组。在单精入卵率上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组显著低于对照组;在无精子入卵率上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组与对照组差异显著;而多精入卵率3组间差异不显著。卵母细胞冷冻后进行体外受精,3组之间的2-细胞率,8-细胞率和桑椹胚率差异均极显著。表明冷冻剂和GMP玻璃化冷冻均会引起水牛MⅡ期卵母细胞透明带硬化,降低精子穿透率和其体外受精的发育能力。     

猪冷冻精子的体外受精与单精子胞浆内注射

用猪冷冻精子进行体外受精和单精子胞浆内注射(ICSI),并研究添加L-半胱氨酸及不同成熟培养法对猪ICSI胚胎发育的影响。结果表明:用猪冷冻精子生产的ICSI胚胎卵裂率及囊胚发育率分别为68.3%和11.4%,均低于用冷冻精子进行体外受精(IVF)所获得的卵裂率和囊胚发育率(分别为76.9%和19.2%,P<0.05)。在培养液中添加1.71mmol·L~(-1) L-半胱氨酸培养3 h,无论是卵裂率、桑椹胚发育率,还是囊胚发育率,均未得到明显改善(P>0.05);采用含0.4%BSA的NCSU-23培养液进行猪卵母细胞成熟培养,ICSI胚胎卵裂率虽明显高,但各组所获胚胎发育率均无显著差异(P>0.05),表明所用卵母细胞的成熟方法并未对ICSI胚胎发育产生明显的影响;用颗粒细胞或卵丘细胞共培养ICSI胚胎后,卵裂率有明显提高(P<0.05),但各组囊胚发育率无统计学差异。     

猪精液0.5 ml细管快速冷冻和解冻方法的优化

 【目的】优化冷冻-解冻方法，提高0.5 ml细管快速冷冻保存猪精液的质量。【方法】冷冻方法：分别将细管水平置于液氮面上方3、5、7、9和11 cm处，每一水平位置细管分别熏蒸3、5、10、15和20 min后投入液氮保存，37℃×30 s水浴解冻，确定最优冷冻方法;在选择最优冷冻方法的基础上，分别采用37℃×30s(对照组)、42℃×25 s、47℃×20 s、52℃×15 s、57℃×10 s和62℃×5 s共6种方法水浴解冻，确定最佳解冻方法。【结果】采用3 cm×10 min冷冻方法，解冻0、8 h精液中精子活率、质膜完整率和顶体完整率均最高。采用相对“高温短时”解冻，精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体膜电位均较高，同时丙二醛浓度降低;57℃×10 s和62℃×5 s解冻的精子各项指标无显著差异（P＞0.05），但前4项指标显著高于对照组（P＜0.05），丙二醛浓度显著降低（P＜0.05）。【结论】优化猪精液0.5 ml细管快速冷冻的冷冻和解冻方法可以显著提高解冻质量，采用3 cm×10 min冷冻、57℃×10 s或62℃×5 s解冻方法效果最佳。     

小檗碱对玻璃化冷冻猪卵母细胞脂滴含量及胚胎发育的影响

【目的】探讨小檗碱对玻璃化冷冻猪卵母细胞脂滴含量及体外受精胚胎发育效果的影响。【方法】体外成熟液和胚胎培养液中添加小檗碱为Ber组,未添加小檗碱为对照组,MII期卵母细胞进行冷冻液处理为冷冻液处理对照组和冷冻液处理+Ber组;采用开放式拉长塑料细管法对卵母细胞玻璃化冷冻与解冻,试验各组别为GV期冷冻组、GV期冷冻+Ber组、MII期冷冻组、MII期冷冻+Ber组。观察卵母细胞体外成熟效果及其体外受精胚胎体外发育效果;观察卵母细胞冷冻化学损伤存活率及其体外受精胚胎发育率;采用尼罗红染色法观察卵母细胞中脂滴含量,观察卵母细胞玻璃化冷冻解冻后存活率及其体外受精胚胎发育率;利用差异染色法和TUNEL法计数囊胚内细胞团和细胞总数以及细胞凋亡数。【结果】Ber组能够极显著促进猪卵母细胞体外成熟,显著降低猪卵母细胞玻璃化冷冻的化学损伤,促进猪卵母细胞冷冻解冻后的细胞存活率,而猪MII期卵母细胞相对于GV期卵母细胞具有很好的冷冻解冻后的存活率;小檗碱能降低猪卵母细胞玻璃化冷冻后的脂滴含量,MⅡ期卵母细胞冷冻前后脂滴含量均低于GV期冷冻前后;小檗碱能够促进猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻解冻后的体外成熟,且有利于猪卵母细胞玻璃化冷冻解冻后早期胚胎的发育,相对于冷冻MII期卵母细胞,冷冻GV期卵母细胞具有更好的体外发育效果;小檗碱能够提高猪卵母细胞玻璃化冷冻解冻后体外发育囊胚内细胞团数与细胞总数,降低其细胞凋亡,有利于提高猪卵母细胞玻璃化冷冻解冻后体外受精胚胎发育至囊胚的质量。而GV期相对MII期则冷冻效果更佳。【结论】小檗碱能够通过降低玻璃化冷冻猪卵母细胞脂滴含量,从而提高其冷冻解冻后体外成熟率和体外受精胚胎发育质量;GV期玻璃化冷冻卵母细胞相对于MII期,在冷冻解冻后其体外受精胚胎发育质量有更好提高。相关机制还有待今后进一步研究。     

不同激活方法对猪ICSI卵早期发育的影响

[目的]探讨不同激活方法对猪单精子显微受精（ICSI）胚发育的影响。[方法]冷冻精子解冻洗涤后直接应用于ICSI,ICSI后采用不同激活方法激活卵母细胞,检测其原核形成情况。[结果]结果表明,单纯电脉冲激活以及电脉冲与6-DMAP联合激活其受精率分别达53.3%和60.4%,对ICSI卵雌雄原核形成的影响差异不显著（P〉0.05）;ICSI后采用不同激活方法激活卵母细胞,检测猪ICSI卵胚胎早期发育情况,单纯电脉冲激活囊胚率达13.0%,显著高于对照（P〈0.05）。[结论]单纯电脉冲激活能促进猪ICSI胚胎的早期发育。     

东方田鼠精子及冷冻复苏精子体外受精的研究

本文采用Nakagata法,对东方田鼠精子及冷冻复苏后的精子进行体外培养、体外受精,结果显示:东方田鼠精子浓度约为106～108个·μL-1,精子活力冷冻前约为20%～80%,冷冻后约为1%～50%,精子经冷冻复苏后的体外受精率为10%～50%,与冷冻前的体外受精率80%～95%相比,差异显著。     

卵丘细胞和细胞骨架稳定剂对绵羊成熟卵母细胞玻璃化冷冻的影响

[目的]为了提高绵羊成熟卵母细胞玻璃化冷冻的效果。[方法]以未冷冻的卵母细胞为对照,研究卵丘细胞存在与否以及不同浓度的细胞骨架稳定剂对绵羊成熟卵母细胞冷冻保存的影响。[结果]卵丘细胞存在与否对绵羊成熟卵母细胞玻璃化冷冻没有影响。在所有细胞松弛素B处理组中,用7.5、10.0μg/ml细胞松弛素B处理的绵羊成熟卵母细胞玻璃化冷冻后获得较高的囊胚率(P<0.05),分别为8.1%、7.8%;在所有紫杉醇处理组中,用0.5μmol/L紫杉醇处理的绵羊成熟卵母细胞玻璃化冷冻后获得的囊胚率最高为10.1%(P<0.05)。[结论]细胞骨架稳定剂细胞松弛素B或紫杉醇可以提高绵羊成熟卵母细胞的玻璃化冷冻效果。     

超低温保存对藏獒犬精子质量及超微结构的研究(英文)

[目的]该研究旨在观察超低温保存对藏獒犬精子质量及超微结构的影响。[方法]通过精子运动度、膜完整率及顶体完整率评价4种冷冻保护剂、冷冻时距液氮面3种不同高度及添加物(SDS和Vc)对精子超低温冷冻效果的影响;在此基础上,在扫描电镜和透射电镜下观察超低温冷冻对精子超微结构的影响。[结果]试验1表明,EG作为冷冻保护剂获得了最好的冷冻效果,解冻后精子运动度、膜完整率及顶体完整率分别为36.3%、38.0%和42.0%。但EG和甘油作为冷冻保护剂并无显著差异存在(P>0.05)。试验2表明,距离液氮面5cm冷冻时冷冻效果最好。但除顶体完整率外,冷冻高度2和5cm间不存在显著差异(P>0.05)。试验3表明,稀释液中单独或共同添加十二烷基磺酸钠(SDS)和维生素C(Vc)均能改善精子冷冻-解冻效果。单独添加SDS或Vc时,除单独添加Vc组表现精子冷冻-解冻后运动度更低外(P<0.05),其它指标并无显著差异存在(P>0.05)。共同添加SDS和Vc时,精子冷冻效果最好,精子解冻后运动度、膜完整率和顶体完整率分别为44.1%、48.0%和48.2%。超微结构显示超低温保存引起藏獒犬精子不同程度的损伤,顶体损伤更严重,如顶体肿胀、囊泡化,甚至顶体消失。[结论]冷冻保护剂EG、距液氮面5cm高度及共同添加SDS和Vc可提高精子超低温保存效果,但超低温对精子超微结构仍具有一定损伤作用。     

一个重要的精子受体—猪透明带糖蛋白β-D-半乳糖残基

 【目的】证明末端半乳糖残基在猪透明带糖蛋白中的分布以及它在精子结合和侵入中的作用。【方法】体外成熟的猪卵母细胞去除周围卵丘细胞，用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC) 络合西非单叶豆凝集素(Bandeiraea simplicifolia lectin-I，BS-I) 或蓖麻凝集素(Ricinus communis agglutinin，RCA-I)处理30min，分别观察末端-D-半乳糖残基或-D-半乳糖残基在透明带中的定位分布。荧光显微镜观察显示，BS-I和RCA-I都标记于整个透明带上且比较集中于透明带的外层，其中BS-I显示微弱荧光反应，而RCA-I呈强荧光反应且在透明带的外层反应尤为强烈。植物凝集素处理的卵母细胞用于体外受精，分别在受精2h或12h观察精-卵结合和精子入卵情况。【结果】RCA-I处理组卵母细胞平均精子结合数显著低于对照组（18 vs 95），而精子入卵则完全被阻断；可是BS-I处理组的卵母细胞的精子结合数少量被抑制（59 vs 95），而且精子入卵率与对照组无显著差异。【结论】猪透明带末端-D-半乳糖残基作为精子受体的重要组成成分，参与精-卵结合和受精。     

酸性土壤中耐铝放线菌·酵母菌的分离及耐铝性的初步研究

[目的]为解决环境中Al^3＋污染问题提供依据。[方法]将来自不同地区的土壤分别在高氏培养基、PDA培养基上分离、纯化出放线菌、酵母菌,继而对比研究放线菌与酵母菌菌株在不同Al^3＋浓度影响下的生长繁殖情况。[结果]Al^3＋浓度为0、1.0、1.5、2.0和2.5mmol/L时,放线菌F1菌株的增长率分别为320.00%、282.00%、148.90%、115.00%和86.80%,其余菌株与之类似。Al^3＋浓度为3mmol/L时,放线菌基本不能生长。Al^3＋浓度为0、5.0、10.0、15.0和20.0 mmol/L时,酵母菌B1菌株的平均直径分别为5.86、4.62、4.88、4.12和3.26μm,B4菌株与之类似。Al^3＋浓度为5.0 mmol/L时,B2和B3菌株的平均直径略有升高,而Al3＋浓度为15.0 mmol/L时菌体直径有所减小。Al^3＋浓度为0、5.0、10.0、15.0和20.0 mmol/L时,液体培养基中B1酵母菌菌体个数分别为33.88×10^7、20×10^7、8.8×10^7、5.2×10^7和3.2×10^7个/m l,其余菌株与之类似。[结论]Al^3＋对酵母菌、放线菌都有不同程度的抑制作用。     

莱氏野村菌MZ060806-XW菌株对棉铃虫幼虫的感染效应

[目的]研究利用莱氏野村菌对棉铃虫进行生物防治的效果。[方法]采用浸渍接种法,用莱氏野村菌MZ060806-XW分生孢子的5个浓度（3.5×104～3.5×108个/ml）对棉铃虫2龄和3龄幼虫进行致病性研究。[结果]在莱氏野村菌MZ060806-XW分生孢子3.5×108个/ml浓度下;第8天2龄和3龄的幼虫死亡率最高分别达84.68%和82.23%;第8天,2龄和3龄幼虫的致死中浓度（LC50）分别为3.975×104和7.794×104个/ml。在3.5×104～3.5×108个/ml的5个浓度处理下,2龄幼虫的致死中时间（LT50）依次为9.774、6.322、5.415、4.559和4.051d,3龄幼虫的LT50分别为9.462、6.842、5.365、4.636和4.177d。随着孢子浓度的增加,LT50逐渐缩短,虫口的死亡率逐步增加;随着施药时间的推移,LC50逐渐减小。[结论]利用莱氏野村菌MZ060806-XW菌株对棉龄虫2龄幼虫的防治效果高于3龄幼虫。莱氏野村菌用于害虫的生物防治具有开发利用价值。     

植物生长调节物质HKL-4对黄花乌头种子萌发及出苗影响研究

[目的]为提高黄花乌头种子发芽率和出苗率提供参考。[方法]以不同浓度的植物生长调节物质HKL-4对黄花乌头种子进行浸种处理,研究HKL-4浓度及浸种时间对黄花乌头种子发芽率和出苗率的影响。[结果]浸种时间对发芽率和发芽势的影响不显著,而HKL-4浓度对发芽率和发芽势的影响极显著,30×母液浸种4 h时种子发芽率和发芽势最高,分别为83.62%和65.34%,比对照处理(清水浸种)高32.39%和25.94%;用适当浓度的HKL-4处理可显著提高种子出苗率和种子存苗率,30×母液处理的出苗率最高,为59.56%,比对照高34.66%,存苗率为50.20%,比对照高58.86%。[结论]HKL-4对黄花乌头种子的最佳处理浓度为30×母液。     

鸡舍基质与空气中真菌定量分析

[目的]揭示鸡舍空气与基质、基质与基质间的相关性。[方法]采用曝皿法收集某养鸡场鸡舍内空气真菌,从舍内4种基质(土壤、粪便、饲料、灰尘)采集23份样品进行分离、纯化和鉴定,通过SPSS13.0软件分析不同样本中真菌浓度的相关性。[结果]从样品中共获得2229分离株。空气中真菌浓度是1.12×104cfu/m3,其中优势真菌属为青霉属、酵母菌属和木霉属;基质中总真菌浓度是1.49×106cfu/g,其中土壤中优势菌为酵母菌,灰尘中优势菌为镰孢菌和酵母菌,粪便中优势菌为镰孢菌属和木霉属,饲料中优势菌为镰孢菌、青霉属和木霉属。[结论]空气与土壤、灰尘与粪便、灰尘与饲料、粪便与饲料的真菌浓度的相关性极大(P<0.01),相关系数分别为0.838、0.944、0.923和0.933。对变量进行线性回归分析,发现空气与土壤的真菌浓度相关性显著。     

感染异育银鲫补体组分C3·C4表达研究

[目的]了解补体组分在感染性鱼类疾病中的作用,为鱼类疾病的诊断和治疗提供参考。[方法]采用不同浓度(2×106、4×106CFU/ml)的嗜水气单胞菌感染异育银鲫,利用半定量RT-PCR技术检测感染不同时间后肝脏中补体组分C3和C4的表达量。[结果]感染后4、5 h时,异育银鲫肝脏中C3的表达量均显著高于对照组。在感染后4 h时,不同浓度组之间C3的表达量无显著差异。而在感染后5 h时,感染浓度1组(注射2×106 CFU/ml嗜水气单胞菌)中C3的表达量显著高于感染浓度2组(注射4×106 CFU/ml嗜水气单胞菌)。异育银鲫肝脏中C4的表达水平远低于C3。在感染后5 h时,感染浓度1组C4的表达量显著高于对照组,其余处理组与对照组均无显著差异。[结论]补体组分C3在鱼类免疫防御系统中具有非常重要的意义。     

猪精液颗粒冷冻技术的研究

为提高猪冻精质量,加速猪冻精在生产上的应用,本试验以解冻后的精子活率、顶体完整率和体外受精(IVF)结果作为判定指标,探讨了冷源和Equex.STM对猪精液颗粒冷冻效果的影响。手握法采集成年、健康种公猪精液,分别采用含有Equex.STM的稀释液和普通稀释液进行两步法稀释,然后以干冰或液氮为冷源进行精液冷冻。结果表明,以干冰为冷源滴冻精液冻后活率为0.487833±0.046761,顶体完整率为0.782±0.039704,而以液氮为冷源的方法冻后活率为0.3334±0.055734、顶体完整率为0.5578±0.068482,前者在这两项指标上均显著优于后者(P<0.05)。另外,在稀释液中添加Equex.STM,以干冰为冷源进行滴冻,可使冻精顶体完整率极显著提高(P<0.01)。以含有Equex.STM的稀释液采用干冰滴冻的冻精进行IVF,胚胎卵裂率、囊胚率分别为0.5316±0.125582和0.216±0.053198。结果表明,采用Equex.STM作为冷冻保护剂并以干冰作为冷源可以获得高质量的猪冷冻精子。     

山羊精液冷冻保存技术研究

[目的]探索山羊精液的冷冻方法。[方法]以甘油为冷冻保护剂,采用细管法冷冻保存山羊精液,探讨甘油浓度和添加时间、冻结方法和解冻温度对山羊精液冷冻效果的影响。[结果]在稀释液中添加6%和7%甘油的处理组中,冻后精子活率与复苏率均显著高于添加3%、5%甘油的处理组。配液时添加6%甘油的处理组中冻后精子活率与复苏率均显著低于在4℃平衡后添加的处理组。把平衡的山羊精液分别在离液氮面3 cm处熏蒸9 min和-80℃冰箱中冻结9 min,前者的精子复苏率显著低于后者。在解冻温度分别为40、45和50℃的处理组中精子冻后活率与复苏率显著高于解冻温度为55和60℃的处理组,说明解冻温度以40～50℃为宜。[结论]在山羊精液冷冻保存中,甘油的最佳添加时间为4℃平衡后冻结前。     

蝉拟青霉APC20菌株对小菜蛾的室内毒力试验

[目的]为蝉拟青霉的进一步应用提供理论依据。[方法]采用生物测定法测定蝉拟青霉APC20菌株对小菜蛾的室内毒力。[结果]药后第1~4天,蝉拟青霉APC20各个浓度的孢子悬浮液对小菜蛾的校正死亡率均低于50%,而第7天,浓度为3.0×108个/ml的孢子悬浮液对小菜蛾的校正死亡率达85.11%,并且虫尸布满蝉拟青霉的菌丝体和孢子粉,说明APC20对小菜蛾呈现较强的寄生致死性。蝉拟青霉菌株APC20对小菜蛾具有较强的侵染力,处理小菜蛾第4~7天的LC50分别为5.3×105、1.1×105、1.1×104、8.9×102个/ml。[结论]蝉拟青霉APC20菌株对小菜蛾具有一定的致病力。     

分光光度法测定小球藻数量的方法研究

[目的]确定用分光光度法测定小球藻藻液浓度的适宜波长。[方法]在不同波长下对不同浓度普通小球藻藻液的吸光度进行测定，对有关数据进行生物统计分析。[结果]在8．7×10^6～8．7×10^8个／ml的浓度范围内，小球藻藻液的最大吸收波长在680nm左右，较高浓度小球藻藻液的吸光度超出了测定范围。显著性测验表明，9种波长下小球藻藻液浓度与藻液吸光度呈极显著直线相关。680nm波长下的测定灵敏度最高，其最高藻液浓度最低，为3．79×10^8个／ml；700nm波长下的测定灵敏度最低，其最高藻液浓度最高，为7．7×10^8个／ml；560nm波长下的测定灵敏度仅高于700nm波长下的，其最高藻液浓度为6．9×10^8个／ml；540nm波长下的测定灵敏度高于560nm波长下的，其最高藻液浓度为6．5×10^8个／ml。[结论]在680nm波长下测定小球藻藻液浓度，其灵敏度高、数据更精确。     

罗非鱼治理蓝藻水华研究

[目的]为有效控制蓝藻水华污染提供方法支持。[方法]通过现场设置围隔研究利用罗非鱼控制蓝藻水华污染的效果。[结果]投放罗非鱼后水体中蓝藻颗粒浓度在5d后下降到4．0×10^5／ml，而空白对照组（CK）蓝藻颗粒浓度基本维持在1×10^6／ml。与CK相比，投放罗非鱼组水体中亚硝酸氮下降迅速，4d后降低到0．02mg/L。罗非鱼对水体中硝酸氮和磷酸根的去除作用更为显著，分别在2d后和4d后降低到基苓检测不出。对于水体中氨氮的浓度，罗非鱼的影响则不明显。[结论]高密度投放罗非鱼能显著减少水体中的蓝藻，迅速降低水体中硝酸氮、亚硝酸氮和磷的含量。