猪源乳酸菌的分离及其生物学性能研究

【目的】从猪新鲜粪便和肠道黏膜中筛选乳酸菌,为猪益生剂饲料添加剂提供理论依据和可靠菌种。【方法】采集陕西八眉猪的粪便和肠道组织,分离纯化乳酸菌,通过体外耐酸、耐胆汁试验以及抑菌试验和黏附试验,筛选特性优良的益生菌,用16SrRNA基因序列系统发育树确定其分类地位。采用小鼠安全性检验试验,检测筛选菌株的安全性。【结果】筛选出一株耐受性和抑菌性良好,生长曲线稳定且黏附性较好的乳酸菌,命名为FB027;另一株抑菌性和黏附性良好,生长曲线稳定且耐酸、耐胆盐较好的乳酸菌,命名为SE013。16SrRNA基因序列系统发育树分析发现,FB027为非解乳糖链球菌(Streptococcus alactolyticus),进化与同属的血红链球菌Streptococcus sanguinis(GenBank登录号CP000387.1)同源性最高,SE013为肠系膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides),进化与同属的伪明串珠菌Leuconostoc pseudomesenteroides(GenBank登录号AB572039.1)同源性最高。小鼠安全性检验试验发现,连续2周口服乳酸菌FB027和SE013,小鼠健康状况良好,行为、生长、采食量和病理组织剖检均无明显异常。【结论】分离获得了性能优良的2株乳酸菌,其在猪饲料添加剂方面有潜在的应用前景。     

猪源发酵乳杆菌的筛选及其潜在益生性能

【目的】对从健康仔猪粪便中筛选分离出一株发酵乳杆菌 的益生性能进行测试，为其在畜禽动物 养殖中的应用提供参考。【方法】采用 Rogosa SL 完全选择性培养基分离出 106 株乳酸菌，通过革兰氏染色、酸 和胆盐耐受初步筛选出 1 株潜在的饲用乳酸菌，经 16S rDNA 序列鉴定为发酵乳杆菌 LF1，并对其益生性能潜力 进行评估，包括抑菌活性 ( 针对大肠杆菌 K88、金黄色葡萄球菌、猪链球菌、沙门氏菌以及弧菌等 12 种病原菌 )、 对模拟胃液中酸性环境的耐受性、对胆盐的耐受性以及对小肠上皮细胞的粘附性。【结果】发酵乳杆菌 LF1 耐 酸和耐胆盐的能力较强，显示出较强的益生菌潜力，但 LF1 菌株对猪肠道上皮细胞的粘附能力不强。在生物拮 抗作用方面，发酵乳杆菌 LF1 的培养上清可以显著抑制多种常见动物病原菌生长。【结论】发酵乳杆菌 LF1 具 有较好的益生性能，通过进一步的动物实验评估后，可以作为应用于畜禽养殖业的益生菌候选菌株。     

产酸、耐酸乳酸菌的分离鉴定及益生特性

【目的】分离筛选高效产酸的乳酸菌Lactobacillus spp.,并进行功能评价,为乳酸菌在饲料行业的应用提供物质基础。【方法】以酸性风味食品为样品来源,以溶钙圈大小为指标进行初筛,以耐酸能力为指标进行复筛,并进一步研究了筛选得到的乳酸菌的产酸性能、生长特性、耐酸、耐胆盐以及抑制病原菌的能力。【结果】获得了10株可在pH 3.0生长的乳酸菌。其中,菌株SC3A和DJ3被鉴定为戊糖乳杆菌L.pentosus,菌株SC15、SC16、DJ9B、DJ10C、SC8、DJ8A、DJ8B和DJ9A为发酵乳杆菌L.fermentum。戊糖乳杆菌DJ3和SC3A的产酸能力、发酵生长速率和抑制病原菌的能力显著优于发酵乳杆菌。而发酵乳杆菌DJ8A和DJ9B的耐酸和耐胆盐能力较强。【结论】从酸性风味食品分离得到了10株具有较强的产酸、耐酸和抑菌能力的乳酸菌,在食品和饲料工业中具有应用潜力。     

禽用乳酸菌的筛选与功能鉴定

【目的】从健康鸡肠道中分离筛选优质乳酸菌,为制备禽用微生态制剂提供技术支持。【方法】选用30日龄健康青年鸡,取其盲肠内容物,通过选择性培养基筛选出具有产酸能力的乳酸菌,对其进行耐pH 3.0胃酸和3g/L牛胆盐筛选试验及菌株生长曲线、产酸能力测定,并通过平板抑菌试验筛选出具有较强抑菌效果的菌株。最后对此菌株16SrRNA进行克隆测序,经Blast比对和系统进化树分析,对菌株进行鉴定。【结果】从所取鸡盲肠内容物中分离得到L1~L9 9株乳酸菌,其中L2、L4和L9株耐pH 3.0和3g/L牛胆盐的综合能力较强。经过比较3株菌的生长曲线和产酸曲线,发现L2菌株耐酸耐牛胆盐、生长迅速、产酸能力强,且具有较强的抑制致病性大肠埃希菌的活性。经16SrRNA序列比对和系统进化树鉴定,确定L2为唾液乳酸杆菌。【结论】成功筛选出了1株可用以研制禽用微生态制剂的乳酸菌菌株。     

传统发酵酸凝硬质奶酪中乳酸菌的分离鉴定及其体外益生特性

【目的】 研究传统发酵酸凝硬质奶酪中乳酸菌的分离鉴定及其体外益生特性,得到产酸性能较高的菌株,测试体外益生特性,筛选出优良益生菌。【方法】 采用传统分离纯化方法,以新疆伊犁地区昭苏县农家自制自然发酵酸凝硬质奶酪为原材料,运用稀释涂布、平板划线以及复筛纯化的方法,从自然发酵奶酪中分离得36株菌株,观察其菌落与菌株形态特征并检测生理生化,选取符合条件的菌株运用16S rDNA同源序列分析方法鉴定其分子生物学。【结果】 鉴定6株为乳酸菌,5株是瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus),另外1株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。这些菌株的耐胆盐、耐酸、耐模拟胃液以及表面特性得知植物乳杆菌E₁₁在这些方面的性能最佳。【结论】 该菌株在浓度为0.5%的胆盐培养基中存活率达到46.42%,pH 2的条件下存活率仍然保持在20%以上,静置5 h后其自凝集率达到63.6%,对二甲苯的疏水率为44.26%。     

发酵蔬菜中乳酸菌分离及其耐酸耐胆盐特性分析

为获得优良的耐酸耐胆盐乳酸菌菌株，从市售发酵蔬菜样品中分离乳酸菌，通过形态学观察以及糖发酵试验对其进行初步鉴定，并开展耐酸耐胆盐初筛及人工胃肠液复筛试验。结果表明：分离出的18株乳酸菌菌株中，有11株具有较高的耐酸耐胆盐能力；经过人工胃肠液复筛后，存活率高于30%的有4株，其中cf12菌株在人工胃液中存活率达到95%,人工肠液处理4、8 h后的存活率分别为173%、194%,菌液浓度未有下降反而有所增加，说明该菌株对低酸性环境及高胆盐环境均具有较强的耐受能力。4株乳酸菌经16S rDNA分子生物学鉴定表明，菌株cf10为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum,菌株cf9、cf12为短乳杆菌Lactobacillus brevis,菌株cf18为副短乳杆菌Lactobacillus parabrevis。     

具有潜在抑制肠道致病菌能力的乳酸菌的筛选

[目的]从实验室保藏的乳酸菌中筛选出耐酸耐胆盐能力较强的乳酸菌,并研究其对肠上皮细胞的黏附能力及对肠道病原菌的抑制能力。[方法]通过模拟人工胃肠液及体外与IEC-6细胞共培养来分别研究乳酸菌的耐酸耐胆盐能力及对细胞的黏附能力,并利用单层琼脂平板扩散法测定其抑菌效果。[结果]试验的27株乳酸菌中,10株乳酸菌在p H 3.0的人工模拟胃液中培养3 h的存活率均大于44.00%,在p H 8.0的人工模拟肠液中培养4 h的存活率均大于51.56%,在含0.30%胆盐的培养基中培养24 h的存活率均大20.00%;其中菌株C13、A03、A17及A90对IEC-6细胞的黏附个数均大于8个/cell;菌株C13、A03对艰难梭菌、沙门氏菌和大肠杆菌的抑制能力较强,抑菌圈直径均大于22 mm。经16S rRNA测序将C13和A03分别鉴定为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosu)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。[结论]L.rhamnosu C13、L.plantarum A03的耐酸耐胆盐能力及对上皮细胞的黏附能力较强,对肠道病原菌有较好的抑制作用,可作为良好的抑制肠道病原菌的候选益生菌株。     

空间搭载长双歧杆菌BBMN68耐氧株筛选及其耐酸耐胆盐特性

【目的】通过航空诱变技术筛选耐氧性能良好且耐酸、耐胆盐的长双岐杆菌菌株.【方法】将实验室分离自百岁老人肠道的长双歧杆菌BBMN68搭载于"神舟十一号"飞船,进行航空诱变,将筛选的菌株采用16S rDNA测序,测定600nm处好氧/厌氧的OD值,比较野生株和突变株耐氧能力的差异,并用接种法对野生株和突变株的耐酸和耐盐特性进行了比较.【结果】与野生株耐氧能力(好氧D_(600nm)/厌氧D_(600nm)值为0.70)相比,突变株耐氧能力显著提高(好氧D_(600nm)/厌氧D_(600nm)值为0.87).突变株在pH6.5的MRSC培养基中24 h的生长情况与野生株并无差异,且透射电镜显示的结果也无明显差异.同时,经过航天诱变的菌株耐酸能力和耐胆盐能力与野生株比较也没有下降.【结论】航天诱变可以有效提高长双歧杆菌BBMN68耐氧能力,且不会影响其生长性能和耐酸性与耐胆盐能力.     

獭兔肠黏膜乳杆菌的分离鉴定及其体外益生特性研究

【目的】分离筛选适于在獭兔肠道中存活并定殖的高黏附性乳酸菌株。【方法】通过乳酸菌选择性培养基从5和10日龄哺乳獭兔肠黏膜中分离具有抑制大肠杆菌活性的菌株,经16SrRNA基因序列分析进行鉴定,并检测其耐人工胃液、耐胆盐及黏附特性、表面疏水性等益生特性。【结果】分离筛选出3株具有较强抑制大肠杆菌活性的菌株,分别鉴定为短乳杆菌(L1)、植物乳杆菌(L2)、干酪乳杆菌(L3),其抑菌活性大小为L3L2L1。3株菌株均能耐受pH=4.0的人工胃液;在pH=3.0人工胃液中,L2和L3的活菌含量未出现明显变化(P0.05),而L1的活菌含量显著下降(P0.05);3株菌株在pH=2.0和pH=1.8人工胃液中的活菌含量均显著降低(P0.01)。L1和L2均能耐受2.0g/L胆盐;虽然L1和L2在3.0g/L胆盐中的活菌量出现极显著(P0.01)和显著(P0.05)下降,但二者仍保留较高活菌含量;胆盐对L3的存活有明显抑制作用,随着胆盐含量的升高,L3的活菌含量极显著降低(P0.01)。L2和L3对黏蛋白的黏附率无显著差异(P0.05),均显著高于L1(P0.05)。L3的表面疏水性最高,L2次之,二者之间无显著差异(P0.05);L1的表面疏水性低于L2(P=0.092),显著低于L3(P0.05)。【结论】分离所获得的3株乳杆菌均具备益生菌特性,其中以植物乳杆菌L2最佳。     

1株猪源乳酸杆菌的分离鉴定与益生特性

微生态制剂是发展绿色养猪业的关键,乳酸杆菌是目前应用的微生态制剂中最重要的有益菌组成成分之一.本研究分离、鉴定并筛选出了1株耐酸和耐胆盐能力较强的乳酸杆菌,命名为乳酸杆菌L5株.雏鸡安全性试验、抑菌试验和肠黏液糖蛋白黏附性试验结果显示,所筛选的乳酸杆菌L5株具有良好的生物安全性、抑菌性和肠道黏附能力.     

草鱼源致病性维氏气单胞菌的鉴定及其黏附特性分析

采用表型鉴定与细菌16S rRNA基因序列分析对从患病草鱼体内分离的病原菌株16-1进行分类鉴定，综合该菌株的表型特征与16S rRNA基因序列，确定其为维氏气单胞菌。随后，对该菌株的细胞黏附特性及其携带的黏附素基因进行检测与分析。结果显示，分离菌株能以聚集性方式黏附于鲤鱼上皮瘤细胞（EPC）周围，平均黏附菌数随共孵育时间延长而增加，90 min达到峰值，说明该分离株具有良好的细胞黏附性。黏附因子检测表明，该菌株同时携带ompAI、ompAII和ahl13种黏附素基因，这些黏附素基因在分离菌株与不同来源参考株之间的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别介于95.8%～99.5%和95.0%～100%（ompAI），96.3%～99.1%和97.9%～100.0%（ompAII），78.6%～99.6%和75.5%～99.4% （aha1），说明所携带的ompAI和ompAII黏附素基因在不同来源的维氏气单胞菌之间具有较高的保守性。     

嗜水气单胞菌ZN1株Mah-TrxA融合蛋白的粘附功能分析

为深入探讨嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)主要粘附素在菌体侵入宿主和介导宿主产生免疫过程可能扮演的角色,对Ah菌ZN1株主要粘附素重组基因的表达产物的部分生物学功能进行分析。通过酶联免疫吸附试验、细胞与Ah菌的粘附试验及粘附抑制和阻断试验,研究分析克隆表达的Mah-TrxA(硫氧还蛋白与主要粘附素形成的融合蛋白)生物学功能。结果显示:克隆表达的Mah-TrxA融合蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,对不同Ah菌株有交叉粘附抑制的作用,抗原竞争性抑制试验和抗体阻断试验均能显著减少不同Ah菌株对EPC的粘附作用。因此,克隆表达的Mah-TrxA确为ZN1菌株的主要粘附素;基因工程技术以融合蛋白形式表达的Mah-TrxA与野生菌株ZN1表达的主要粘附素具有类似的生物学活性。     

蚯蚓非光滑体表试样的法向土壤粘附特性

以赤子爱胜蚓（Eisenia foetida）为研究对象，利用微粘附力测试系统，通过单因素试验探讨蚯蚓非光滑体表的法向粘附力随含水量的变化规律；通过正交多项式设计法寻求正压力与卸载速度对蚯蚓非光滑体表法向粘附力的影响，建立了回归方程。试验结果表明，蚯蚓体表试样的法向粘附力随含水量的增加呈抛物线趋势增加，与钢试样相比，最大减粘率达到44％；正压力对法向粘附力呈二次效应关系，卸载速度对法向粘附力呈一次效应，随正压力和卸载速度的增加粘附力增加。本研究可为生物非光滑表面仿生研究以及揭示仿生耦合机制提供基础数据。     

壳聚糖和鱼精蛋白对淡水污损黏附菌的抑制作用

水下固形物表面微生物的黏附生长是生物污损层形成和生物腐蚀的初级阶段。从长江水体分离得到三株淡水黏附菌,在前期对其形态特征进行研究的基础上,对其黏附生长进行了初步研究,探讨了壳聚糖和鱼精蛋白两种物质对它们生长、黏附的抑制作用。结果显示,3种菌株在玻璃片上能迅速黏附,壳聚糖与鱼精蛋白处理菌体后能明显改变菌株生长或黏附情况;处理材料表面后能显著改变材料表面能,引起不同的微生物黏附现象。     

益生乳酸菌水产动物消化道黏附机制研究进展

乳酸菌作为益生菌目前在水产养殖业已经得到了广泛的应用,而益生菌发挥益生功能的重要基础是能黏附到宿主消化道内。因此,黏附机制对于探讨乳酸菌的益生机制极为重要。综述了乳酸菌黏附相关的研究进展,主要包括乳酸菌黏附因子、影响因素和评价体系,探讨了其可能的作用机制,以期为下一步挖掘黏附相关益生元件奠定基础。     

咳喘宁对RSV诱发哮喘大鼠ICAM-1表达的影响

目的 研究咳喘宁对RSV诱发哮喘大鼠气道重塑形态学及ICAM-1表达的影响，阐明其防治哮喘的作用机制。方法 将60只幼年SD雄性大鼠随机分为6组，即正常组，模型组，泼尼松与沙丁胺醇治疗组（简称泼+沙治疗组），咳喘宁大、中、小剂量组，每组10只。用卵清蛋白复制大鼠哮喘模型，并予呼吸道合胞病毒（RSV）激发哮喘。大鼠处死后肺组织行HE染色观察炎症反应；图像分析软件测定支气管壁厚度及气道壁面积；免疫组化pv-9000二步法检测ICAM-1表达水平。结果 与模型组相比，各治疗组炎症反应较轻。各治疗组支气管壁厚度及气道壁面积改变较小，与模型组相比差异有统计学意义（P<0.01）；咳喘宁中剂量组较泼+沙治疗组作用略差，但差异无统计学意义（P>0.05）；咳喘宁大、小剂量组与泼+沙治疗组相比，其作用明显较差，有统计学意义（P<0.05）。各治疗组与模型组比较，其肺组织中ICAM-1表达均降低，有显著性差异（P<0.01）；泼+沙治疗组ICAM-1表达稍低于咳喘宁中剂量组，但差异无统计学意义（P>0.05﹚。结论 咳喘宁可有效抑制气道重塑，其机制可能与降低肺组织中ICAM-1表达有关。     

粘附分子CD44v6在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:了解粘附分子CD44v6在宫颈癌组织中的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学法(SP法)检测CD44v6在69例宫颈癌组织及20例正常宫颈组织中的表达。结果:正常宫颈组织中的CD44v6呈阴性表达。69例宫颈癌组织中CD44v6的阳性表达率为68.1％(47/69)。CD44v6的阳性表达在不同的病灶大小、临床分期、细胞分化程度及有无淋巴结转移的宫颈癌组织中差异有统计学意义(P<0.05～0.01);在不同的病理类型及年龄的患者中差异无统计学意义(P>0.05)。结论;CD44V6可能在宫颈癌的生长、浸润及转移过程中起重要作用,可望作为反映宫颈癌恶性潜能的新指标。     

乳酸菌对动物肠道的黏附作用研究进展

乳酸菌作为益生菌可以产生乳酸、细菌素以及其他抗菌物质来抑制大肠杆菌等肠道病原菌的增殖,但是其对动物肠道的黏附性是选择其作为益生菌株的重要依据。文章就乳酸菌对动物肠道的黏附机理、影响因素以及黏附的生理效应方面的研究做一综述。     

鲍氏不动杆菌MF1株的粘附特性

取从患病鳜鱼体内分离到的鲍氏不动杆菌 Ｍ Ｆ１株和３株 Ａ Ｔ Ｃ Ｃ不动杆菌参考株做血凝试验（ Ｈ Ａ）,１３种不同动物的红细胞对４株不动杆菌的血凝特性分析结果表明,鲍氏不动杆菌（ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍ ａｎｎｉｉ） Ｍ Ｆ１株能凝集人 Ｏ 型血以及鸡、鼠、绵羊、鲢、黄鳝等５种动物的红细胞, 不凝集鳜、罗非鱼、鲫、团头舫、鲤、欧洲鳗、鳙的红细胞, 且该种血凝不能被甘露糖抑制; 其它３株 Ａ Ｔ Ｃ Ｃ参考菌株对１３种红细胞均不能发生凝集。４株不动杆菌的粘附实验表明, Ｍ Ｆ１株可以粘附 Ｈ Ｅｐ２细胞, 每细胞粘附菌在２０个以上, 菌体粘附于细胞四周; ３株 Ａ Ｔ Ｃ Ｃ不动杆菌参考株对 Ｈ Ｅｐ２细胞不具粘附特性。以上４株不动杆菌对 Ｅ Ｐ Ｃ细胞 （鲤鱼乳头状上皮瘤细胞系） 均无粘附性。     

聚合物复合材料界面粘合理论研究进展

文章对聚合物复合材料界面粘合理论的研究进展进行了综述,认为各种理论均有一定的合理性及局限性,而在实际的复合材料中,其界面情况要比理论复杂得多,只有灵活运用各种粘接理论,才可加深对界面的理解.同时,文章对粘合理论的研究前景和发展方向进行了展望.