中药成分复方的佐剂作用及其与中药复方的功效比较

分别用淫羊藿多糖(EPS)加蜂胶黄酮(PF)、黄芪多糖(APS)加人参皂甙(GS)制成2个中药成分复方(cCHMI1,cCHMI2),同时用相应的淫羊藿、蜂胶、黄芪和人参的提取物制成相应成分含量相同的2个中药复方(cCHM1,cCHM2).试验1用2个中药成分复方(对照组为生理盐水)分别配合兔瘟灭活苗免疫家兔,于免疫后第0、3、7、10、14、17、21、28、35、42天用血凝抑制试验法测定血清抗体效价的动态变化;试验2将4个复方分别与灭活的新城疫强毒混合制成疫苗免疫雏鸡,以油佐剂苗、无佐剂苗和生理盐水为对照,分别于免疫后第7、14、21、28、35、42天用MTT法和血凝抑制试验法检测外周血淋巴细胞增殖和血清抗体效价的动态变化.结果表明,2个中药成分复方能显著提高家兔血清的兔瘟抗体效价,cCHMI1的效果优于cCHMI2;4个复方均能显著促进雏鸡淋巴细胞增殖和提高血清抗体效价,效果与油佐剂苗相当,中药成分复方稍优于中药复方.     

中药成分复方对兔外周血淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-10的mRNA表达以及兔出血症疫苗免疫效果的影响

 【目的】研究两个中药成分复方（cCHMIs）的免疫增强作用和机理。【方法】选择黄芪多糖、淫羊藿多糖、蜂胶黄酮和人参皂苷4种中药成分组成两个复方，用MTT法和荧光定量RT-PCR法测定它们对兔外周血淋巴细胞增殖和IFN-γ、IL-10 mRNA的表达影响；并将两个复方作为佐剂，配合兔出血症疫苗免疫幼兔，以铝胶苗和无佐剂苗为对照，分别于免疫后7、14、21、35、49 d用MTT法和血凝抑制法测定外周血淋巴细胞增殖和血清抗体的动态变化，于免疫后63 d测定免疫器官指数和攻毒保护率。【结果】两个复方在体外均可以显著促进淋巴细胞增殖，提高淋巴细胞IFN-γ、IL-10 mRNA的表达；作为佐剂，两个复方可以显著提高免疫兔的血清抗体效价，促进体内淋巴细胞增殖，显著促进圆小囊、肠淋巴结等免疫器官的发育，有较高的攻毒保护效果。【结论】两个复方中药成分具有较强的免疫增强作用，可被开发成新型的免疫增强剂。     

硫酸化多糖复方和中药成分复方的鸡新城疫疫苗免疫增强效果比较

为了筛选增强免疫效果最好的硫酸化多糖复方和中药成分复方,以前期筛选出的硫酸化黄芪多糖sAPS60、硫酸化淫羊藿多糖sEPS5和硫酸化香菇多糖sLNT2组成4个复方:复方1(sEPS-sAPS)、复方2(sEPS-sAPS-sLNT)、复方3(sAPS-sLNT)、复方4(sEPS-sLNT),以及前期筛选的2个中药成分复方--复方5(EPS-PF)和复方6(APS-GS),在14日龄雏鸡接种新城疫苗时注射,分别于免疫前和免疫后7、14、21 d,每组随机抽取6羽雏鸡翼下静脉采血,用β-微量法检测血清HI抗体效价;于免疫后14、21 d每组随机抽取4羽心脏采血,用MTT法测定外周血淋巴细胞增殖;于免疫后23 d各组用新城疫病毒攻毒,攻毒后14 d统计发病率、死亡率和免疫保护率,并测定血清抗体效价.结果表明,各复方均能明显或显著提高新城疫疫苗的免疫应答,提高血清HI抗体效价,促进淋巴细胞增殖,降低攻毒后的发病率和死亡率,提高免疫保护率.复方1和复方5的作用最为显著,可分别作为硫酸化多糖复方和中药成分复方免疫增强剂的候选方.     

中药成分复方对免外周血淋巴细胞增殖、IFN-Y和IL-10的mRNA表达以及兔出血症疫苗免疫效果的影响

[目的]研究两个中药成分复方(cCHMIs)的免疫增强作用和机理.[方法]选择黄芪多糖、淫羊藿多糖、蜂胶黄酮和人参皂苷4种中药成分组成两个复方,用MTT法和荧光定量RT-PCR法测定它们对兔外周血淋巴细胞增殖和IFN-y.IL-10 mRNA的表达影响;并将两个复方作为佐剂,配合兔出血症疫苗免疫幼兔,以铝胶苗和无佐剂苗为对照,分别于免疫后7、14、21、35、49 d用MTT法和血凝抑制法测定外周血淋巴细胞增殖和血清抗体的动态变化,于免疫后63 d测定免疫器官指数和攻毒保护率.[结果]两个复方在体外均可以显著促进淋巴细胞增殖,提高淋巴细胞IFN-Y、IL-10mRNA的表达;作为佐剂,两个复方可以显著提高免疫兔的血清抗体效价,促进体内淋巴细胞增殖,显著促进圆小囊、肠淋巴结等免疫器官的发育,有较高的攻毒保护效果.[结论]两个复方中药成分具有较强的免疫增强作用,可被开发成新型的免疫增强剂.     

复方中药成分与IL-2的免疫协同作用及对鸡细胞因子表达的影响

以淫羊藿多糖加蜂胶黄酮（方1）、人参皂苷加黄芪多糖（方2）组成2个复方，各加IL-2配合新城疫苗免疫雏鸡，分别于免疫后第7、14、21和28d用微量法检测血清抗体效价的动态变化；同时将2个复方各分3种剂量加入到培养的鸡外周血T淋巴细胞中，分别培养7和24h后用半定量RT-PCR方法检测淋巴细胞IL-2和IFN-γ的mRNA表达的变化。结果表明，2个复方单用或与IL-2合用均能显著提高抗体效价，而复方与IL-2的免疫协同作用不明显；方1的3个剂量和方2的高剂量能显著促进IL-2的基因表达，而2个复方的3个剂量能显著促进IFN-γ的基因表达，解释了复方中药成分与IL-2免疫协同作用不明显的原因。     

几种中药成分与IL-2免疫协同作用的比较

将420羽罗曼雏鸡随机均分为14组，14日龄时用新城疫Ⅳ系苗免疫，并分别肌肉注射当归多糖（CAPS）、黄芪多糖（APS）、板蓝根多糖（IRPS）、淫羊藿多糖（EPS）、蜂胶黄酮（PF）和人参皂苷（GS）6种中药成分加白介素2（IL-2），每天1次，连用3d。分别在不同时间点检测新城疫病毒HI（NDV-HI）抗体效价，并计算免疫器官指数。结果表明，APS、IRPS、EPS、PF和GS加IL-2在免疫后7～14d都能显著提高抗体效价，APS、IRPS和EPS加IL-2在免疫后4周显著促进免疫器官发育。提示，中药成分与IL-2合用有一定的免疫协同作用。     

几种中药成分与IL-2免疫协同作用的比较

将420羽罗曼雏鸡随机均分为14组,14日龄时用新城疫Ⅳ系苗免疫,并分别肌肉注射当归多糖(CAPS)、黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、淫羊藿多糖(EPS)、蜂胶黄酮(PF)和人参皂苷(GS)6种中药成分加白介素2(IL-2),每天1次,连用3 d.分别在不同时间点检测新城疫病毒HI(NDV-HI)抗体效价,并计算免疫器官指数.结果表明,APS、IRPS、EPS、PF和GS加IL-2在免疫后7～14 d都能显著提高抗体效价,APS、IRPS和EPS加IL-2在免疫后4周显著促进免疫器官发育.提示,中药成分与IL-2合用有一定的免疫协同作用.     

蜂胶免疫佐剂的研究

用蜂胶作为免疫佐剂制成鸡新城疫（ＮＤ）蜂胶灭活苗，与含有相同抗原的油乳剂苗、氢氧化铝胶苗和无佐剂灭活苗，对鸡进行ＮＤ免疫效果比较。结果表明，蜂胶苗的抗体上升速度比油乳剂苗快；与氢氧化铝苗和无估剂灭活苗相比，蜂胶苗的抗体水平较高、维持时间较长。经安全试验、证明蜂胶无毒、无刺激性。是一种值得研制和开发的新型免疫佐剂。     

中药复方对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

通过对试验鸡的免疫器官指数和不同日龄新城疫(ND)抗体水平进行检测,探讨3个不同中药复方对鸡群免疫功能的影响。选取7日龄健康蛋公雏鸡500只,随机分为10组,并于7、21日龄用La Sota活苗免疫,1～9组从7日龄开始分别用3个不同中药复方按饲料量的0.5%、1.0%、1.5%添加,第10组为不添加任何药物的对照组。用药组连续给药15 d,各组分别于21、28、35、42、49、56、63日龄采血测定新城疫血凝抑制(HI)抗体水平以及免疫器官指数的变化。结果显示,3个不同中药复方对雏鸡的ND抗体水平和免疫器官指数均有一定的提高作用,其中复方Ⅰ(1.0%剂量)的效果为最佳。     

复方中药合剂对肉仔鸡疫苗免疫抗体效价的影响

为探讨自拟复方中药合剂对疫苗免疫后抗体效价的影响。以AA肉仔鸡为研究对象,重点考察复方中药合剂分别与新城疫(ND)Clone-30疫苗、ND油乳剂灭活苗和传染性法氏囊病(IBD)冻干苗联用后,肉仔鸡血清中ND、IBD抗体效价的变化规律。结果显示,试验组鸡血清中的ND和IBD抗体效价均高于对照组。说明,该复方中药合剂可增强肉仔鸡的疫苗免疫效果,具有显著的免疫增强作用。     

Enhancement of the Immune Response to Rabbit Hemorrhagic Disease Vaccine in Young Rabbits by Advanced Vaccination and Chinese Herbal Adjuvants

Experiments were conducted to determine the effects of advanced vaccination and Chinese herbal adjuvants （CHA）, containing astragalus polysaccharides （APS） and ginsenosides （GS） on the immune response to rabbit hemorrhagic disease （RHD） vaccine in young rabbits. In experiment 1, 5 New Zealand rabbits of each group at 30, 35, 40, or 45 days of age were injected with 2 mL of inactivated RHD vaccine, respectively. The dynamic changes of antibody titers were tested by the hemagglutination inhibition （HI） method. In experiment 2, 30 New Zealand rabbits at 35 days of age were randomly assigned to 5 treatment groups, representing inoculation with 3 mL of non-adjuvant RHD vaccine, CHA-RHD vaccine, CHA-HA vaccine （half dose antigen）, aluminium adjuvant-RHD vaccine, and PBS, respectively. The dynamic changes of peripheral lymphocyte proliferation and serum antibody titers were tested by the MTT method and the HI method. The results showed that the titer of maternal HI antibody in the 35-day-old rabbits was lower than the protective level of 3 log2, while on days 7 to 49 after the vaccination, the antibody titers were higher than 3 log2. The CHA promoted the lymphocyte proliferation and enhanced the serum antibody titer （P〈 0.05）. These findings from the two experiments suggested that advanced vaccination and Chinese herbal adjuvants significantly enhanced the immune response to vaccine against RHD, and effectively protected the young rabbits against RHD challenge.     

10种中药成分对单层鸡胚成纤维细胞增殖的影响

将安全浓度范围内的黄芪多糖、当归多糖、蜂胶多糖、淫羊藿多糖、板蓝根多糖、黄芪黄酮、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮、黄芪皂苷和人参皂苷等 10种中药成分分别加入已培养 2 4h、刚形成单层的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,在加药后12 ,2 4 ,36 ,4 8和 6 0h用MTT法测定它们对CEF增殖的影响。结果表明 ,黄芪皂苷、黄芪多糖、板蓝根多糖和蜂胶黄酮主要表现为促进增殖 ;淫羊藿多糖主要具抑制效应 ;其他 5种中药成分在某些浓度和时间点能促进增殖 ,而在某些浓度和时间点则抑制增殖 ,并有一定的量效和时效关系。     

中药成分与新城疫病毒感作后对病毒感染活性的影响

将5种浓度的当归多糖、黄芪多糖、板蓝根多糖、淫羊藿多糖、蜂胶多糖、淫羊藿黄酮、蜂胶黄酮、黄芪皂苷和人参皂苷分别与新城疫病毒La Sota株混合感作144 h和272 h后,加到已培养36 h的鸡胚成纤维细胞(CEF)中，继续培养72h，采用中性红染料吸收法测定CEF增殖变化,判定中药成分对病毒感染活性的影响。结果表明，所有中药成分几乎所有浓度均影响或显抑制病毒的感染活性，且与感作时间有一定的相关性。     

兔病毒性出血症4种灭活疫苗的研制及效果比较

[目的]研制兔病毒性出血症新型疫苗.[方法]分别以黄芪多糖、蜂胶、铝胶、生理盐水为佐剂,研制兔病毒性出血症黄芪多糖佐剂、蜂胶佐剂、铝胶佐剂以及常规灭活疫苗,并从安全、免疫效果等方面对这4种疫苗进行比较.[结果]4种疫苗均有良好的安全性.免疫后7d4种疫苗产生的特异性抗体效价均逐步升高,攻毒保护率均达到100％.免疫后14 d黄芪多糖佐剂抗体效价显著高于蜂胶佐剂、铝胶佐剂以及常规灭活疫苗.免疫后180 d黄芪多糖佐剂疫苗的保护率达75％,蜂胶佐剂与铝胶佐剂可达到50％,常规灭活疫苗的保护率达25％.[结论]这4种疫苗均具有良好的安全性和免疫原性,其中黄芪多糖灭活苗的免疫效果最好.     

半定量RT-PCR测定中药成分对小鼠脾T细胞IL-2mRNA水平的影响

 应用半定量RT-PCR方法，测定了9种中药成分对小鼠脾脏T细胞IL-2mRNA水平的影响。结果显示，体内注射黄芪多糖、淫羊藿多糖、当归多糖、蜂胶黄酮和黄芪皂甙能够使ConA诱导的小鼠脾T细胞IL-2mRNA水平显著升高，蜂胶多糖、板兰根多糖、人参皂甙、淫羊藿黄酮不能影响细胞内IL-2mRNA丰度；中药成分体外诱导时与体内应用时的作用效应相同，但与对照相比较，蜂胶多糖在体外能够显著促进IL-2mRNA的诱生，与体内不同。     

Effect of a Chinese herbal formula Astragalus immunomodulator on immune function of chickens

In order to investigate the immunomodulatory effects and the mechanism of a Chinese herbal medicine, Zengmiansan (Astragalus immunomodulator), on immune function of chickens, three hundred 1-day-old chickens were assigned randomly into 5 groups, i.e., the blank control group, the Chinese herbal medicine Zengmiansan (ZMS)-treated group, the cyclophosphamide group, the cyclophosphamide plus levamisole group, the cyclophosphamide plus ZMS group and the control group. All chickens were immunized with Lasota vaccine by nosedrip or eye-drop at the age of 6 days. Newcastle Disease (ND) antibody titers, growth indexes of the spleen, thymus and bursa of Fabricius, the concentrations of CD₄ ⁺ lymphocytes and CD₈ ⁺ lymphocytes in spleen, thymus and peripheral blood, and the apoptosis of splenocytes, thymocytes and bursa of Fabricius cells were observed at the ages of 14, 21, 28 and 35 days, respectively. Our results indicated that the NDV antibody titers of chickens in the Chinese herbal medicine ZMS-treated group at the ages of 14 and 21 days were significantly higher than that of the other groups (P<0.01). The growth indexes of immune organs, the concentrations of CD₄ ⁺ lymphocytes and the ratio of CD₄ ⁺/CD₈ ⁺ T lymphocytes of chickens in the Chinese herbal medicine ZMS- treated group at the ages of 14, 21 and 28 d were significantly higher than those of the other groups (P<0.01). The apoptotic splenocytes, thymocytes and bursa of Fabricius cells of chickens in the ZMS-treated group were significantly lower than the other groups (P<0.01) at the ages of 14, 21 and 28 days.     

中药合剂对雏鸡免疫功能的影响

研究了中药合剂对雏鸡免疫功能及干扰素产生的影响。检测了试验组和对照组28,30,34,41,48,55日龄雏鸡血液T淋巴细胞对丝裂原ConA刺激的反应性;CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群及CD4+/CD8+T淋巴细胞比值;ND抗体效价及胸腺、脾脏和法氏囊指数。结果表明,34~41日龄时中药合剂组雏鸡血液T淋巴细胞对丝裂原ConA刺激的反应性明显高于对照组(P<0.05);CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群无明显变化,30~34日龄时能明显提高CD4+/CD8+淋巴细胞亚群比值(P<0.05);34~41日龄时试验组雏鸡HI抗体效价显著高于对照组(P<0.05);可使胸腺、脾脏和法氏囊指数增加,41日龄时法氏囊指数明显高于对照组(P<0.05);中药合剂对IFN具有明显的诱生作用(P<0.01),与NDV诱生组水平相当;同时可明显促进NDV对IFN的诱生(P<0.01)。结果显示中药合剂具有增强机体免疫功能及诱生IFN的能力,为该中药合剂抗NDV提供了理论依据。     

从中药方剂中提取的复合多糖对雏鸡免疫功能的影响

 480只7日龄健康罗曼雏鸡随机分为4组，每组120只。分别于8日龄注射中药复合多糖加环磷酰胺、中药复合多糖、环磷酰胺、生理盐水。分别在试验前、试验后第8、13、21、29、37天采血（每组15只）并涂片，测定淋巴细胞百分率及ANAE+ 淋巴细胞百分率；分别在用药前和停药后采血（每组12只）测定中性粒细胞吞噬力；分别在鸡18、25、32日龄（每组12只）测定腹腔巨噬细胞的吞噬功能；分别在NDⅡ系疫苗首免后7、14、21 d，二免后7、14、28 d采血（每组15只）分离血清，测定ND-HI抗体效价；分别在鸡4、6、9周龄（每组12只）时，测定法氏囊、胸腺、脾的重量；分别在用药前和停药后第4、8天采血（每组15只）测定红细胞免疫功能。试验结果表明：中药复合多糖可使淋巴细胞百分率和ANAE+ 淋巴细胞百分率、外周血中性粒细胞吞噬率和吞噬指数、腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数、首免和二免后ND-HI抗体效价、法氏囊和胸腺及脾重量、红细胞-C3b 花环率和红细胞-IC花环率明显升高。环磷酰胺可使上述指标明显下降，中药复合多糖加环磷酰胺组与环磷酰胺组之间上述指标差异显著，中药复合多糖加环磷酰胺组，上述指标接近或略高于生理盐水对照组。     

左旋咪唑对雏鸡新城疫灭活苗的免疫增强作用

对加入０．５ｇ／Ｌ左旋咪唑的ＮＤ灭活油乳剂苗试验组,和未加左旋咪唑的对照组分别以０．１,０．２和０．４ｍＬ／羽的剂量接种４日龄雏鸡,同时设置Ⅱ系活苗免疫组,于接种后３,６,９,１６,２３ｄ测定各组鸡血清中抗ＮＤＶＨＩ抗体,于免疫后２５ｄ,用ＮＤＶ强毒攻击,观察各组的保护情况。结果表明,无论接种剂量为０．１,０．２或０．４ｍＬ／羽的灭活苗试验组,还是与Ⅱ系活苗同时使用的免疫组,加有左旋咪唑的灭活苗产生的ＨＩ抗体比未加左旋咪唑的灭活苗有显著差异（Ｐ＜０．０１）,强毒攻击保护率为１００％．