甜瓜半粒干种子DNA提取方法的优化

【目的】优化甜瓜半粒干种子DNA提取方法,为甜瓜相关分子研究提供技术支持。【方法】以甜瓜半粒干种子为材料,比较改良CTAB法、SDS法、高盐低pH法和尿素法4种提取方法的DNA提取效果,并对改良CTAB法中的提取液CTAB浓度、裂解时间、苯酚抽提次数等进行优化,以琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分别检测DNA的质量和纯度。最后通过SSR分析验证优化后改良CTAB法提取DNA的效果。【结果】4种提取方法中,改良CTAB法提取的DNA提取率最高,且DNA质量和纯度均高于其他提取方法。优化得到改良CTAB法的最佳提取条件为:提取液CTAB浓度2%,裂解时间20 min,苯酚抽提1次[先用苯酚/氯仿/异戊醇(25∶24∶1)抽提1次,再用氯仿/异戊醇(24∶1)抽提1次]。在此条件下,提取的甜瓜半粒干种子DNA质量和纯度较好,以此为模板进行SSR分子标记分析时,电泳条带稳定、清晰,基本无杂带,可清楚区分品种间的差异。【结论】优化后的改良CTAB法提取甜瓜半粒干种子DNA效果较好,可满足甜瓜种子分子标记和遗传多样性分析等分子实验需求。     

茶树DNA的快速抽提法

使用简化改良的CTAB法抽提茶树(Camellia sinensis)鲜叶DNA,通过电泳和PCR检测所提取DNA的质量.实验结果表明,改良的CTAB法提取茶树DNA,步骤减少、抽提过程简单、时间短、效率高,用嫩叶和成熟叶均能抽提出高质量的DNA.     

不同破壁方法对大肠杆菌DNA提取的影响

为了解不同细胞破壁方法对大肠杆菌总DNA提取效果的影响,分别采用CTAB/溶菌酶/蛋白酶K法、溶菌酶/SDS法、CTAB/SDS法对大肠杆菌进行破壁提取DNA,比较了3种方法从大肠杆菌中提取DNA的效果.结果表明:3种方法都可以从大肠杆菌中提取到分子量大于21.2 kb的DNA片段,1 mL菌液DNA的提取量为14.3～43.6 μg,不同方法间在DNA产量及纯度等方面存在较大差异.     

啤酒酵母泥中酵母多糖提取方法研究

【目的】比较不同方法对啤酒酵母泥中多糖的提取效果,旨在为啤酒酵母泥的高效利用提供依据。【方法】采用传统热水浸提法、超声波处理技术、微波辅助提取法、冻融法和酶法从啤酒酵母泥中提取多糖,比较提取效果,并研究了其中提取效果较好的2种方法对酵母多糖提取的协同作用。【结果】传统热水浸提法的酵母多糖提取率为12.8mg/g,酵母细胞破壁率为38%;采用超声波处理技术提取时,时间应控制在30min内,酵母多糖提取率最高达17.6mg/g,酵母细胞破壁率为54%;采用微波辅助提取法提取时,时间应不超过3.5min,酵母多糖提取率最高达16.6mg/g,酵母细胞破壁率达48%;采用冻融法处理啤酒酵母泥,反复冻融5次时,酵母多糖提取率最高可达13.7mg/g,酵母细胞破壁率达42%;采用酶法处理时,当木瓜蛋白酶用量为200IU/g、温度为50℃、时间为15h时,酵母多糖提取率为18.0mg/g,酵母细胞破壁率为58%;采用超声波处理技术与酶法相结合处理啤酒酵母泥时,酵母多糖提取率可达24.5mg/g,酵母细胞破壁率达75%。【结论】采用超声波处理技术与酶法提取酵母泥中的多糖时,二者具有协同作用,且提取效果较好。     

1种提取产紫杉醇内生真菌高质量核酸的方法

介绍1种从产紫杉醇真菌中快速提取高质量DNA和RNA的方法.该方法由传统CTAB法改进而来,包括抽提液试剂浓度的提高、纯化步骤的改进和离心力的增加等,有效保证了细胞杂质的清除和核酸质量的提高.使用该方法能在24h内提取高质量的核酸,为进一步开展产紫杉醇真菌的分子生物学研究奠定了基础.     

牡丹根系RNA提取方法的比较研究

【目的】探索牡丹根系RNA提取的最佳方法。【方法】以牡丹(Paeonia suffruticosa)'凤丹'5a生实生苗的根系为材料,首次比较研究了改良Trizol法、改良CTAB法、改良异硫氰酸胍法及Column Plant RNAout试剂盒法提取RNA的效果。【结果】改良Trizol法及改良异硫氰酸胍法均不能从牡丹根系中提取出高质量RNA。而改良CTAB法及试剂盒法提取RNA的电泳结果可见清晰完整的28S rRNA1、8S rRNA及5S rRNA条带,其中28S rRNA与18S rRNA的亮度比约为2∶1;浓度及纯度检测表明这2种方法提取的RNA纯度较高,且改良CTAB法提取的RNA浓度(269.50μg.g-1)是试剂盒法(82.14μg.g-1)的3倍。【结论】结合RNA的提取质量和成本,改良CTAB法更适宜于牡丹根系RNA的提取。     

(木奈)基因组DNA的提取与纯化

以(木奈)嫩芽为材料,对Dellaporta等用CTAB制备植物基因组DNA的方法进行改良,结果表明,加入质量分数ω=10% PVPP与材料充分研磨,将提取缓冲液的β-巯基乙醇体积分数降低为1%,能有效地去除材料中的多酚类物质;用氯仿/异戊醇(24∶ 1)抽提裂解液2次所获得的上相,加入1/10体积的65 ℃的NaCl/CTAB溶液混匀,再用氯仿/异戊醇(24∶ 1)连续抽提2次,并在DNA粗提液中加入适量高浓度NaCl和无水乙醇沉淀DNA,可以有效地去除多糖的干扰,获得比较纯净的DNA样品;PCR特异性扩增的结果表明,以改良法的DNA为模板可获得PPO基因保守区约600～800 bp特异条带,且扩增条带较亮、无引物二聚体出现.     

橡胶白粉菌(Oidium heveae Steinmann)基因组DNA的提取方法

比较了2种菌源、3种方法提取橡胶树白粉病病原真菌橡胶白粉菌(Oidium heveae BA.Steinmann)基因组DNA的效果。结果表明:无论采用单斑分离法收集还是直接收集橡胶白粉菌菌体,无论采用石英砂振荡破壁法、氯化苄法还是尿素法提取,均能获得满足常规分子生物学操作要求的基因组DNA;在基因组DNA的提取产率、完整性方面,各种方式之间略有差异,但无显著差别;2种来源菌体的基因组DNA的ITS序列分析结果一致,说明在无法进行单斑分离的情况下,可以利用直接收集的菌体提取基因组DNA。     

小麦DNA提取方法的比较

目的 用4种方法 对小麦DNA进行提取,从中选取最好的方法 ,满足小麦材料进行分子标记的检测.方法 以小麦幼叶为材料,采用CTAB法1、CTAB法2、CTAB法3和NaOH法,提取小麦基因组DNA.结果 NaOH法提取DNA用时短,方法 简单,但常有DNA样品扩增不出PCR产物的情况;CTAB法提取的DNA质量较高,而且CTAB法3在省略了65℃温浴并将两次氯仿∶异戊醇抽提改为一次抽提,缩短了试验时间,降低了试验成本,提取的DNA可以满足实验需要.结论 试验表明,用CTAB法3提取小麦DNA,既缩短了时间又满足进行分子标记检测的需要.     

葡萄基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化

【目的】建立适合该地区部分葡萄品种RAPD扩增反应体系。【方法】采用阿克苏地区部分葡萄品种(系)为试材,采用改良的CTAB法提取葡萄基因组DNA,对影响葡萄RAPD反应的Mg2+、Taq酶、dNTPs、引物、模板DNA浓度进行优化。【结果】其最佳反应体系为:模板DNA 100 ng,dNTPs 0.1 mmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,引物0.3μmol/L,Taq酶1.5 U,反应体系总体积为20μL。【结论】改良的CTAB法具有步骤少、费用低、效率高等特点,比较适用于葡萄基因组DNA的提取。优化后的体系,扩增产物稳定,条带清晰,重复性好。     

一种野山参微量DNA的提取方法

[目的]通过优化CTAB提取法从少量的野山参须根提取DNA,使其保持野山参形态的完整。[方法]综合比较CTAB提取法及其他3种DNA提取法,筛选出较为适合少量药材DNA的提取方法。[结果]从5 mg人参根须提取DNA,栽培参DNA浓度为200~1 000ng/μL,野山参为50~100 ng/μL,电泳可检测到清晰的条带,满足浓度和纯度的要求。[结论]该研究采用改进的高盐SDS法能从5 mg微量人参须根材料中提取高质量DNA,满足浓度和纯度的要求,可作为其他药材微量组织提取DNA的参考方法。     

4种高梁基因组DNA快速提取方法的比较

[目的]寻找快速、简单、成本低的高粱基因组DNA提取方法。[方法]首先,分别使用液氮研磨法、缓冲液研磨法、烘干研磨法和直接研磨法这4种方法从高粱叶片中提取基因组DNA,然后,通过凝胶电泳、SSR分析和SRAP分析检测所提DNA的浓度和纯度。[结果]采用4种方法提取高粱基因组DNA时的产量相差不大;采用前2种方法提取的DNA降解少、纯度高,可进行有效的SRAP-PCR和SSR-PCR,但缓冲液研磨法的SRAP-PCR结果稍差;而采用后2种方法提取的DNA降解严重、纯度低,但可进行有效的SSR-PCR。[结论]采用4种方法均可在短时间内提取到足够几十次PCR反应的高粱基因组DNA,液氮研磨法和缓冲液研磨法所提取的DNA应用范围更大,而烘干研磨法和直接研磨法所提取的DNA只能用于对片段较小的目的DNA进行特异性PCR。     

4种高粱基因组DNA快速提取方法的比较

[目的]寻找快速、简单、成本低的高粱基因组DNA提取方法。[方法]首先,分别使用液氮研磨法、缓冲液研磨法、烘干研磨法和直接研磨法这4种方法从高粱叶片中提取基因组DNA,然后,通过凝胶电泳、SSR分析和SRAP分析检测所提DNA的浓度和纯度。[结果]采用4种方法提取高粱基因组DNA时的产量相差不大;采用前2种方法提取的DNA降解少,纯度高,可进行有效的SRAP-PCR和SSR-PCR,但缓冲液研磨法的SRAP-PCR结果稍差;而采用后两种方法提取的DNA降解严重,纯度低,但可进行有效的SSR-PCR。[结论]采用4种方法均可在短时间内提取到足够几十次PCR反应的高粱基因组DNA,液氮研磨法和缓冲液研磨法所提取的DNA应用范围更大,而烘干研磨法和直接研磨法所提取的DNA只能用于对片段较小的目的DNA进行特异性PCR。     

4种镰刀菌基因组DNA提取方法的比较研究

[目的]寻找一种简便、高效的基因组DNA提取方法,为进一步开展镰刀菌等丝状真菌的分子生物学研究提供科学基础。[方法]采用改良的CTABS、DS、高盐沉淀和SDS-CTAB 4种方法提取8个镰刀菌菌株的基因组DNA,并对其进行质量测定及PCR分析,比较不同提取方法的效果。[结果]4种提取方法均可提取到基因组DNA,其抽提质量优劣依次为SDS、SDS-CTAB法、高盐沉淀法和CTAB法。其中采用SDS法可成功提取到所有供试菌株基因组DNA,而且DNA浓度和纯度均较高,RNA及其他杂质污染少。而高盐沉淀法和CTAB法提取到的基因组DNA不够完整或浓度较低。[结论]SDS法更适合于镰刀菌等丝状真菌基因组DNA的提取。     

生豆浆基因组DNA不同提取方法的比较研究

[目的]探讨适宜生豆浆的基因组DNA提取方法。[方法]以市售豆浆为材料,分别采用热解法、异丙醇沉淀法、CTAB法、SDS法、高盐低pH和异硫氰酸胍法以及它们的改良方法提取基因组DNA,并比较了以上方法的提取效果。[结果]除异丙醇沉淀法外,其他方法提取的基因组DNA均可满足PCR检测要求。同时,综合考虑基因组DNA的纯度和浓度,生豆浆基因组DNA提取方法的优劣依次为：改进高盐低pH法、高盐低pH法、改进CTAB法、改进异丙醇沉淀法、异硫氰酸胍法和改进热解法。[结论]这几种生豆粉基因组DNA提取方法均具有操作简单、耗时短、利于快速检测的优点。     

一种简易有效的提取真菌DNA化学改良方法

[目的]探索适合真菌基因组DNA提取的有效方法。[方法]以酵母茵（Hansenula sp.HS07A）和青霉菌（Penicillium sp.HS07）为供试菌株，分别采用煮沸裂解法、石英砂研磨法、研磨和反复研磨冻融法和化学改良法提取其基因组DNA，比较这4种方法的提取效果。[结果]化学改良法提取基因组DNA，除去了机械破壁过程，减少了机械力对DNA造成的破坏，运用阴离子去污剂SIB提取DNA安全、价廉，能有效、完整地提取高质量的基因组DNA，凝胶电泳条带清晰、无弥散，以此基因组DNA作为目的片段的PCR扩增模板，扩增效果优于改良前的方法，并且这种方法也适合多种真菌和细菌基因组DNA的提取。[结论]化学改良法是提取真菌基因组DNA的有效方法。     

生豆浆基因组DNA不同提取方法的比较研究

[目的]探讨适宜生豆浆的DNA提取方法。[方法]以市售豆浆为材料,分别采用热解法、异丙醇沉淀法、CTAB法、SDS法、高盐低pH和异硫氰酸胍法以及它们的改良方法提取基因组DNA,并比较了以上方法的提取效果。[结果]除异丙醇沉淀法外,其他方法提取的基因组DNA均可满足PCR检测要求。同时,综合考虑基因组DNA的纯度和浓度,生豆浆基因组DNA提取方法的优劣依次为：改进高盐低pH法、高盐低pH法、改进CTAB法、改进异丙醇沉淀法、异硫氰酸胍法和改进热解法。[结论]这几种豆粉基因组DNA提取方法均具有操作简单、耗时短、利于快速检测的优点。     

马齿苋多糖的乙醇分级纯化及抗氧化研究

[目的]研究马齿苋各级分多糖的抗氧化作用。[方法]以热水浸提马齿苋,采用35%、55%、75%和95%的乙醇分级醇沉马齿苋多糖提取物,得马齿苋各级分多糖POP1、POP2、POP3和POP4,分析其对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用。[结果]醇沉马齿苋多糖量的比例为POP1∶POP2∶POP3∶POP4为0.83∶1.25∶1.82∶2.16;各级分多糖抗氧化能力随多糖浓度的上升而增强,呈现良好的量效关系,并且在等浓度条件下其抗氧化能力也表现出明显的差异,清除能力为POP4>POP3>POP2>POP1。[结论]乙醇浓度95%醇沉的马齿苋多糖具有较强的抗氧化作用。     

血水草基因组DNA提取方法的优化

[目的]优化血水草（Eomecon chionantha Hance）基因组DNA提取方法。[方法]采用常规CTAB法和改良CTAB法提取血水草基因组DNA。[结果]常规CTAB法提取的DNA含杂质多、难溶解、易降解;而改良的CTAB方法适合血水草基因组DNA的提取,采用鲜嫩叶样品和-80℃硅胶干燥嫩叶样品均可能获得完整性较好、纯度较高的基因组DNA。[结论]为血水草遗传多样性研究奠定了基础。     

青梅果超氧化物歧化酶粗酶的提取及活性研究

[目的]测定青梅果超氧化物歧化酶（SOD）活性，筛选青梅果SOD粗酶提取最有效的方法。[方法]以重庆綦江青梅果为原料，采取不同料液比提取青梅SOD粗酶，以Sevage法除去杂蛋白，硫酸铵分级沉淀。同时对各步骤所得S0D粗酶活性、蛋白量、比活的检测结果进行比较。[结果]H3P04缓冲液的用量对SOD粗酶的提取有直接影响。当H3PO4缓冲液与梅果的比例为3：1时，测得酶的比活最高，为25．34U／mg蛋白；粗酶液按3：1体积比加入的氯仿-乙醇混合液除去杂蛋白效果明显；粗酶液添加（NH4）2SO4至90％饱和度沉淀SOD效果好，比活较提取液上升51．43U／mg蛋白。[结论]青梅果SOD粗酶提取的最佳条件：H3PO4缓冲液与青梅比例为3：1，温度为25～30℃，pH值为7．8，Sevage法除去杂蛋白，（NH4）2SO4盐析从35％添加至90％饱和度沉淀SOD。该条件下，总蛋白为215．13mg，酶总活力为5415．74U／mg蛋白，比活为25．34U／mg蛋白。