一种新抗冻剂DMF在淡水鱼类精液超低温保存上的应用

本文首次报导了一种新的抗冻剂——N-N-二甲基甲酰胺(Dimethyl Formamide，DMF)对淡水鱼类精液超低温冷冻保存具有明显效果，冻精的受精效果优于二甲亚砜(DMSO)。团头鲂、鲤、草鱼、鲢、鳙使用139／ODMF抗冻剂，精液液氮保存3-4周，受精率分别为76%、54．03％、68．6％、37．9％和40．60%，而用13%DMSO作为抗冻剂时，则分别为69．1％、42．6％、67．6％、19．4％和37．4％。结果表明10-159／DMF作为抗冻剂，含0．5％NaCl的稀释液稀释精液，精液与稀释液按1：4比例混合冷冻；2％NaCl作为激活剂，以10倍体积激活剂稀释解冻精液进行授精为宜。     

一种新抗冻剂DMF在淡水鱼类精液超低温保存上的应用

本文首次报导了一种新的抗冻剂——N-N-二甲基甲酰胺(Dimethyl Formamide，DMF)对淡水鱼类精液超低温冷冻保存具有明显效果，冻精的受精效果优于二甲亚砜(DMSO)。团头鲂、鲤、草鱼、鲢、鳙使用139／ODMF抗冻剂，精液液氮保存3-4周，受精率分别为76%、54．03％、68．6％、37．9％和40．60%，而用13%DMSO作为抗冻剂时，则分别为69．1％、42．6％、67．6％、19．4％和37．4％。结果表明10-159／DMF作为抗冻剂，含0．5％NaCl的稀释液稀释精液，精液与稀释液按1：4比例混合冷冻；2％NaCl作为激活剂，以10倍体积激活剂稀释解冻精液进行授精为宜。     

大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存方法的优化

【目的】优化大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存方法。【方法】以解冻后的精子活力为参数,调控试验条件,筛选最佳精液稀释液和最佳抗冻剂,优化抗冻剂体积分数和精液稀释比例。【结果】5种稀释液中,稀释液Ⅳ效果最好,冻精活力为35.5(±2.7)%;甘油(GLY)、甲醇(METH)、二甲基亚砜(DMSO)等3种抗冻剂中,5%(V/V)DMSO处理的冻精活力为40.7(±2.5)%,显著高于5%GLY和METH处理的冻精活力;优化DMSO的体积分数发现,10%终浓度的DMSO对精液保护效果较好,冻精活力为54.6(±1.5)%;优化稀释液Ⅳ与精液稀释比例发现,稀释液Ⅳ与精液以3∶1体积比稀释时能达到良好效果,冻精活力可达65.4(±2.3)%。【结论】精液稀释液Ⅳ与精液体积比为3∶1,终浓度10% DMSO为抗冻剂,对大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存的效果最佳。     

鸭精液液态保存的研究

试验用单人背腹式按摩采精法收集纯净的鸭精液。对不同稀释液(1％NaCl液、Lake液、pH 7.1Lake缓冲液BPSE和BNP—2)(精液:稀释液,v/v)稀释的鸭精液在不同温度(2—5℃、8—10℃和25℃)下的保存效果和以pH 7.1Lake缓冲液按不同稀释比例(1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9和1:10)稀释的鸭精液在2—5℃温度下的保存效果进行了研究。结果表明:鸭精液液态保存的最适温度为2—5℃;以PH 7.1Lake缓冲液的稀释保存效果最佳;按1:2、1:3、1:4和1:5稀释比例稀释鸭精液均可取得良好的保存效果。     

萨福克羊精液低温液态保存效果的研究

[目的]为了提高萨福克羊精液低温液态保存的效果。[方法]用葡萄糖、柠檬酸钠、乳糖、卵黄为主要成分配制了5种萨福克羊精液稀释液,分别4、81、21、6倍稀释精液并5℃保存,通过观测精子存活时间、有效存活时间、生存指数等指标,筛选出精液保存时适宜的稀释液、渗透压、pH值及稀释倍数。[结果]4倍稀释不利于精液保存,8、121、6倍稀释精液保存效果好(P<0.01),结合母羊受胎率稀释保存倍数以8倍为宜;以葡萄糖3.0 g、柠檬酸钠2.0 g、卵黄10 ml为主要成分的稀释液保存效果优于其他4种稀释液(P<0.05)。稀释液pH值和渗透压与精液越接近保存效果越好。[结论]调整稀释液成分、稀释倍数、pH值、渗透压,可以提高萨福克羊精液低温液态保存效果。     

美洲鲥鱼精子超低温冷冻保存技术初探

对美洲鲥鱼精液的超低温冷冻保存技术进行了研究。以解冻后精子的活力为参数,探讨了鱼用任氏液为稀释液、不同体积分数甲醇为保护剂、不同冻前平衡时间以及不同精液稀释比对美洲鲥鱼精液进行超低温冷冻保存的保护效果。结果显示,以鱼用任氏液和体积分数为10%的甲醇组成抗冻保护剂,精液稀释比(精液与抗冻保护剂的体积比)为1∶3,于4℃冰箱平衡20 min,液氮面上方6 cm处平衡10 min,然后在液氮面上平衡5 min,最后投入液氮中的保存方式,保存60 d后检查精子活力,存活率可达80%。研究结果为保护淡水鱼类的种质资源提供了理论基础。     

高体革鯻精子超低温保存方法研究

[目的]对高体革鯻（Scortum barcoo）精子的超低温保存技术进行研究。[方法]首先,用精子活力为标准确定稀释液中NaCl和KCl的最佳浓度;然后,使用二甲亚砜和甘油分别作为抗冻剂,进行超低温保存试验,测定高体革鯻精子复活率和活力。[结果]稀释液中含0.750%NaCl和0.025%KCl时,效果最佳。当二甲亚砜浓度为10%,葡萄糖为5%时,精子复活率和活力分别达到了68.2%和60.7%,保存效果最佳。[结论]稀释液中NaCl和KCl的浓度,对精子活力有明显影响;使用二甲亚砜作为抗冻剂进行低温保存的效果优于甘油;在抗冻保护剂中加入适量葡萄糖会提高保存效果。     

抗冻剂对鸡精液冷冻效果的影响

通过添加不同浓度的甘油、乙二醇、二甲基亚砜(DMSO)和N,N-二甲基乙酰胺(DMA)作为抗冻剂,研究单一抗冻剂和联合抗冻剂对鸡精液冷冻的影响.每个抗冻剂设置4个浓度梯度进行添加--甘油、DMSO和乙二醇为2%、4%、6%、8%;DMA为6%、8%、10%、12%,然后将冷冻效果较好的抗冻剂组合,研究联合抗冻剂对鸡精液冷冻的影响.试验结果表明,这4种抗冻剂中以浓度为6%的甘油对冷冻过程中鸡精子的保护效果最好,其冻后活力达到0.68,精子复苏率达到97.5%,极显著地高于其他各组(P<0.01);抗冻剂组合甘油+DMSO、甘油+乙二醇和甘油+DMA中,甘油+DMSO组精子的冻后活力和复苏率比其他2组略好一些,但差异不显著(P>0.05).     

湖羊精液稀释液及冷冻保护剂的筛选

试验旨在研究不同稀释液对湖羊精液的4℃保存效果,同时探讨不同种类及浓度的冷冻保护剂对湖羊精液冷冻保存效果的影响。选择6种常见的绵羊精液稀释液配方,检测湖羊精液稀释后精子活力变化,分析精子存活时间及生存指数;另选取6种常见的精子冷冻保护剂,分3组浓度(5%、10%、15%)添加,检测细管冻精解冻后的精子活率。结果表明,6种稀释液对湖羊精液的4℃保存效果存在显著差异,其中F稀释液保存效果最佳。冷冻保护剂的种类和添加比例对湖羊精液的冷冻保存效果都存在影响,稀释液中添加5%的丙三醇对湖羊精液的冷冻保存效果最佳。     

冷冻稀释液渗透压、抗冻剂和平衡时间对鸡颗粒冻精冻后活率的影响

4个不同渗透压水平(280、320、360、400 mOsm)的鸡精冷冻稀释液,以甘油(GL)、二甲基亚砜(DMSO)和N,N二甲基乙酰胺(DMA)分别作为抗冻剂进行了冷冻试验.结果表明,添加8%甘油、4%DMSO和11%DMA的冷冻稀释液,4个不同渗透压间冻后精子活率均有显著差异(P<0.05),而且精子活率随冷冻稀释液渗透压的升高而升高;添加5%和10%甘油的冷冻稀释液,渗透压对解冻精子活率影响不显著;在400 mOsm渗透压条件下,8%甘油组冷冻后精子活率高于其他抗冻剂组;3种抗冻剂4个渗透压水平冷冻,平衡时间长短(30 min和90 min)对解冻后精子活率没有影响.     

不同品系小鼠精子冷冻及冻融精子体外受精的研究

采用小鼠精子冷冻、冻融精子体外受精的方法,进行小鼠保种、引种、生物净化及品系标准化的可行性研究,并初步探究小鼠精子冷冻的影响因素。实验选用同一年龄5种不同品系小鼠分别进行精子冷冻、复苏,并比较各品系冷冻效果及冻融精子的体外受精(IVF)率。结果显示,冷冻后各品系小鼠精子复苏存活率约在15%～50%之间;冻融小鼠精子体外受精结果随遗传背景的不同差异显著,受精率分别为:KM小鼠68.4%、ICR小鼠30.3%、DBA/2J小鼠47.2%、C57BL/6J小鼠6.8%、BALB/cA小鼠25%。冻融精子IVF得到的胚胎可以耐受体外培养。     

南美白对虾精子超低温冷冻保存技术研究

【目的】建立一种南美白对虾精子超低温冷冻保存方法,为南美白对虾优良种质的长期保存奠定基础。【方法】利用胰蛋白酶消化法获得游离的南美白对虾精子,分别使用灭菌天然海水、无钙人工海水、3％等渗NaCl溶液和0．9％生理盐水作为基础液,并以不同浓度的二甲基亚砜（DMSO）、甘油、甲醇及其与海藻糖的混合溶液作为抗冻剂,在4种不同降温程序下超低温冷冻保存南美白对虾精子,然后在不同的温度下复苏冷冻精子,以伊红-苯胺黑染色法检测精子存活率。【结果】使用1．00g／L胰蛋白酶消化精荚5min能获得大量游离的南美白对虾精子,以灭菌天然海水为基础液,以10％DMSO和0．25mol／L海藻糖为抗冻剂,在P．1降温程序（4℃平衡30min,以．5℃／min的速率降至-20℃;-20℃平衡5min,以-10℃／min的速率降至-80℃;-80℃平衡5min,然后置于液氮中保存）下超低温冷冻保存南美白对虾精子,经37℃水浴复苏后精子存活率最高。【结论】建立的南美白对虾精子超低温冷冻保存方法具有可行性,为南美白对虾精子冷冻保存库的建立提供了技术支撑。     

不同浓度的NaCl、KCl和葡萄糖对彩鲫精子活力的影响

利用NaCl、KCl、C6H12O6各配制成8个不同浓度的溶液,彩鲫精子在4g／LNaCI溶液、3．5g／L KCl溶液、1．5g／L C6H12O6溶液中的活力最强,寿命最长。在NaCl、KCl溶液中,彩鲫精子快速运动时间和变化规律基本上一致。葡萄糖溶液在低浓度下有效延长精子寿命,表明彩鲫精子具有利用外源性葡萄糖的能力,但在5g／L C6H23O6溶液时,就完全抑制精子的活动。     

黑龙江银鲫(Carassius auratus gibelio Bloch)精子生物学研究

测量了黑龙江水域比较有代表性的两个银鲫种群——方正银鲫和扎龙湖银鲫的染色体数量和精子密度 ,以及精子在天然水体中的泳动能力、精子的寿命、精子头部的直径和体积 ,结果表明 ,两种银鲫的遗传基础截然不同 ,方正银鲫的体细胞具有 15 0±条染色体 ,扎龙湖银鲫的体细胞具有 10 0条染色体 ;其精子的直径、体积和精子密度也反映了这一点 ,方正银鲫精子头部的直径平均为 2 .81︼m,体积平均为 11.83︼m3,尾长为 4 5 .2 6 ︼m;扎龙湖银鲫精子头部直径平均为 2 .34︼m,体积平均为 6 .83︼m3,尾长为 38.39︼m;方正银鲫的精子密度为 0 .5 7× 10 1 0 / m L～ 0 .90× 10 1 0 / m L,平均为 0 .73× 10 1 0 / m L;扎龙湖银鲫为 0 .94× 10 1 0 / m L～ 1.70× 10 1 0 / m L,平均为 1.38× 10 1 0 / m L。其他测量内容没有明显的区别 ,方正银鲫和扎龙湖银鲫精子的泳动能力分别为 4 9.16 s和 4 9.15 s,寿命分别为 3min2 4 s和 3m in16 s,两个群体之间的差异不显著 (P >0 .0 5 )。两种鲫鱼的授精力没有明显的区域。本项研究进一步证明方正县双丰水库具有 15 0±条染色体的银鲫 ,其雄性具有正常的性别发育和生产精液的能力 ,所产生的精子与倍性正常的鱼类的精子在形态结构、泳动能力和受精能力等方面没有明显的区别?     

精子膜蛋白在异精雌核发育银鲫中的作用

通过对雄性银鲫的新鲜精液进行分级抽提得到精子的不同组份，包括精浆、精头的膜、鞭毛和脱膜精头等，在荷包红鲤和雌性银鲫杂交时加入其中的可溶性精头膜蛋白组分，研究精子膜蛋白在雌核发育银鲫异源受精中的作用。研究发现，加入同源精子膜蛋白后的雌核发育银鲫异源受精卵的孵化率比对照组低很多，并且在子代培育过程中，发现了生长速度快、表型和父本相似、基因型基本和父本基因型相同的特殊子代。在某种程度上表明：精子膜蛋白可能是雌核发育银鲫卵子进行雄核发育的关键因素。     

运用RAPD技术鉴别建鲤雌核发育后代的研究

用紫外线灭活红鲫Carassius auratusvar. red精子,诱导建鲤Cyprinus carpiovar. jian进行人工雌核发育,共获得241尾雌核发育子一代鱼。经形态特征初步分类后,取10尾进行RAPD分析,以鉴别雌核发育鱼。用筛选的10种随机引物,均可扩增出建鲤和红鲫的特征条带。扩增结果发现:部分子一代仅出现建鲤特征条带,未发现红鲫特征条带,为雌核发育鱼;部分子一代既有建鲤特征条带,也出现红鲫特征条带,为鲤、鲫杂交鱼。本试验结果表明,采用RAPD技术可高效、准确地鉴别出异源精子诱导的雌核发育鱼。     

精子膜蛋白在异精雌核发育银鲫中的作用

通过对雄性银鲫的新鲜精液进行分级抽提得到精子的不同组份，包括精浆、精头的膜、鞭毛和脱膜精头等，在荷包红鲤和雌性银鲫杂交时加入其中的可溶性精头膜蛋白组分，研究精子膜蛋白在雌核发育银鲫异源受精中的作用。研究发现，加入同源精子膜蛋白后的雌核发育银鲫异源受精卵的孵化率比对照组低很多，并且在子代培育过程中，发现了生长速度快、表型和父本相似、基因型基本和父本基因型相同的特殊子代。在某种程度上表明：精子膜蛋白可能是雌核发育银鲫卵子进行雄核发育的关键因素。     

四种冷冻保护剂对鸡精液冷冻效果的比较

采用浓度为12%的甘油、二甲基亚砜(DMSO)、二甲基乙酰胺(DMA)、二甲基甲酰胺(DMF)作为冷冻保护剂,分别添加到A液(乙酸钠、柠檬酸钠、谷氨酸钠、磷酸氢二钾、果糖、TES);B液(氯化镁、乙酸钠、柠檬酸钠、谷氨酸钠、果糖、EDTA-Na2)2种基础液中,进行常温保存和冷冻试验.常温保存结果发现:甘油对精子毒害作用最大,在A、B 2种基础液中精子生存指数分别为(8.40±0.114),(8.30±0.055)(P<0.01);其次是DMF,而DM-SO及DMA对精子的毒害作用最小.冷冻保存结果发现,以DMSO和DMA作为冷冻保护剂,精子解冻后活率优于DMF和甘油(P<0.01).     

人体精子冷冻前后超微结构的变化

将１０例正常生育男性的精液标本进行冷冻保存、复温后电镜观察。结果,冷冻精子复温后精子超微结构发生了不同程度的改变,其主要改变为精子顶体肿胀,顶体内、外膜分离,外膜形成波浪状皱褶,有的核局部出现凹陷,线粒体改变呈基质密度降低,结构模糊等。但是,精子基本结构保持完整。研究结果表明：冷冻精子超微结构改变的主要原因是在冷冻过程中,由于冰晶形成的影响,水分内移,细胞肿胀,因而造成其活动率的明显下降。但并不影响授精能力。     

鲢人工雌核二倍体群体的产生及其遗传分析

选用遗传失活兴国红鲤的精子作为雌核发育激活源 ,成功地诱导了鲢雌核发育并获得 3个自然加倍的雌核发育二倍体群体。鲢的单倍体诱导率最高达 96 .9% ,自然加倍率最高达 0 .4 4 3%。经分析鉴定 ,雌核发育单倍体胚胎具有 2 4条染色体。而鲢的染色体为 4 8,兴国红鲤为 10 0。雌核二倍体鲢都具有 2套完整的母本染色体 (2n =4 8) ,外部形态性状与亲本鲢完全相同。这些结果表明 ,雌核发育后代的遗传物质来源于母本 ,无父本遗传物质参与。