闽江流域福州过境段大肠杆菌毒素基因的定性定量分析与季节性变化

分别于不同季节在闽江流域福州过境段的洪山桥和解放大桥断面采集水样,进行大肠杆菌的分离、鉴定,用多元PCR方法对不同季节分离的大肠杆菌毒素基因的时空分布进行定性与定量分析。从分离的2 015株粪大肠杆菌中发现840株潜在的致病性大肠杆菌,分别属于肠出血性大肠杆菌（EHEC）、肠聚集性大肠杆菌（EAEC）、肠致病性大肠杆菌（EPEC）和肠产毒性大肠杆菌（ETEC）;检出的10种毒素基因中,以扩散性黏附素基因（aidA-1）、热稳定性肠毒素基因（astA）和耐药性因子（sepA）为最多;细菌总量、大肠杆菌总数和致病性大肠杆菌总数在冬季较少,春季较多,夏秋季节达到全年数量的高峰;潜在的致病性大肠杆菌毒素基因的种类和数量也是在冬季最少,春夏季上升,秋季最多。     

微生物发酵床对猪舍大肠杆菌病原生物防治作用的研究

 【目的】通过调查微生物发酵床养猪基质垫层大肠杆菌及其毒素基因的数量分布变化动态,分析微生物发酵床对猪舍大肠杆菌的生物防治作用。【方法】分离不同使用时间、不同层次基质垫层的大肠杆菌,利用PCR特异性扩增UdiA基因来鉴定、检测大肠杆菌,并对大肠杆菌12种毒素基因进行多重PCR检测。构建大肠杆菌种群分布的动态模型,分析微生物发酵床对大肠杆菌病原的生防效果。【结果】从不同使用时间不同层次基质垫层分离鉴定出大肠杆菌419株,并从这些菌株中检测出59株携带毒素基因,毒素基因类型为8种。其中1个月基质垫层的毒素基因阳性检出率最高,为22.47%,其次是7个月基质垫料,为16.5%,最低的是9个月基质垫料,为4.23%。大肠杆菌在微生物发酵床基质垫层种群数量时间变化规律为：随着使用时间的增加种群数量逐步减少;种群数量空间变化规律为：表层（第1层0—10 cm） 和底层（第4层60—70 cm）分布量最大,第2层（20—30 cm）分布量最少。大肠杆菌毒素基因的分布规律与之类似。从构建的大肠杆菌种群分布动态模型可以看出,基质垫层第1层（y=169.67x-1.0137）和第3层（y=313.11x-2.1885）大肠杆菌种群数量随使用时间呈指数线性方程分布;第2层（y=0.1006x3-2.3733x2+16.094x-22.454）和第4层（y=0.3159 x3+6.0913x2-35.634x+79.513）大肠杆菌种群数量随使用时间呈一元三次方程分布,基质垫层能明显抑制大肠杆菌的生长。基质垫层使用后期（第9个月）比使用初期（第1个月）大肠杆菌种群数量明显减少,降低幅度在67.45%—96.53%,说明微生物发酵床对猪舍大肠杆菌能起到显著的生物防治作用。【结论】微生物发酵床能抑制大肠杆菌特别是携带毒素基因大肠杆菌的生长,且对大肠杆菌的生防效果随使用时间的延长而增加。     

不同生物制剂对猪致病性大肠杆菌的体外抑菌试验

 考察抗菌药物、中药、益生菌对河南规模猪场致病性大肠杆菌的抑菌效果,为利用不同生物制剂防治猪大肠杆菌病提供依据。本研究采用纸片扩散法或牛津杯法,分别进行87株猪致病性大肠杆菌对15种抗菌药物、14种中药、7株猪源乳酸杆菌与芽孢杆菌益生菌株的敏感性试验。结果表明：（1）猪致病性大肠杆菌对15种抗菌药呈多重耐药,耐药3-13种,可分为31种耐药图谱,八重耐药菌株比例高达27.59%;其中对诺氟沙星、四环素耐药率高达到95.4%,对多黏菌素B（92.0%）、头孢噻呋（86.2%）、阿米卡星（74.7%）较为敏感。（2）除青蒿外,13种中药对猪致病性大肠杆菌都有不同程度抑菌作用,抑菌效果较好的是石榴皮（89.7%）、黄芩（82.7%）、黄连（80.5%）;抑菌率不到20%的是鱼腥草（19.5%）、板蓝根（12.6%）、穿心莲（9.2%）。（3）各益生菌对猪致病性大肠杆菌都表现出较好抑菌效果,除巨大芽孢杆菌抑菌率为88.5%外,其余抑菌率都在90%以上,其中乳酸杆菌-2与枯草芽孢杆菌强抑菌率分别高达94.3%与92.0%。本研究说明了河南规模猪场致病性大肠杆菌耐药严重,所筛选抗菌药可以指导临床合理用药;所筛选的中药、益生菌具有较好的抑菌活性,可进行防治猪大肠杆菌病的生物制剂研制。     

新疆塔城地区不同来源大肠杆菌的耐药性调查

掌握新疆塔城地区不同来源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药情况,可以为今后塔城地区建立细菌耐药数据库提供信息。采集新疆塔城地区某养殖场饮用水样（12份）、饲料样（49份）、牛粪样（56份）和养殖户家羊粪样（20份）,分离大肠杆菌。采用琼脂稀释法对分离的大肠杆菌进行耐药性检测,通过卡方检验比较不同来源大肠杆菌耐药性的差异。结果表明：饮用水源菌对恩诺沙星、环丙沙星、阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林耐药率达100%;饲料源菌对阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林的耐药率分别为61.2%和51.0%;牛源菌对阿莫西林/克拉维酸和环丙沙星的耐药率均为14.3%;羊源菌对阿莫西林/克拉维酸和环丙沙星的耐药率分别为40.0%和35.0%。饮水源大肠杆菌对恩诺沙星、环丙沙星、阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林的耐药率显著高于牛源菌、羊源菌和饲料源菌（P<0.05）。此外,不同来源大肠杆菌对头孢噻呋、阿米卡星、庆大霉素、安普霉素和氟苯尼考均敏感。多药耐药结果显示：饲料源菌以0耐（38.8%）和4耐（38.8%）为主;牛源菌以0耐（786%）为主;羊源菌以0耐（50.0%）为主;饮水源菌以4耐（100%）为主。上述结果表明不同来源大肠杆菌对被检抗菌药物的耐药情况差异显著,共性之处为不同来源大肠杆菌对被检药物的中介率均较高,暗示如不改变用药方案,近期耐药菌株数有迅速增长的风险。     

狼毒大戟水浸液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌体外杀菌效果的研究

[目的]通过对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的体外药效试验,研究有毒植物狼毒大戟的杀菌效果。[方法]取多年生狼毒大戟的根制成水浸液,用24孔板和平坂培养法对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌进行药效试验。[结果]狼毒大戟对全黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIC）为0.7 g/ml;最小杀菌浓度（MBC）为1.17 g/ml。对大肠杆菌的最小抑菌浓度（MIC）为1.17 g/ml;最小杀菌浓度（MBC）为1.75 g/ml。[结论]狼毒大戟对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有明显的抑杀菌作用。     

鸡大肠杆菌病

鸡大肠杆菌病赖平安，门常平（北京农学院牧医系，北京１０２２０６）随着养禽业的发展，集约化程度越来越高，大肠杆菌病在特定的饲养环境下（如空气污浊、有害气体浓度过高、相对缺氧或继发于新城疫（ＮＤ）、法氏囊（ＩＢＤ）、霉形体等传染病）使鸡体对致病性大肠杆菌...     

芒果皮萃取物在抗食品病源微生物中的应用

对芒果皮萃取物在抗食品病源微生物中的应用进行研究。结果表明，培养基中芒果皮的85％乙醇萃取物在浓度为2mg/mL时，常见的食品病源微生物中，沙门氏菌（NICPBP50115－12）、金黄色葡萄球菌（MIG1．55）、大肠杆菌（ATCC8739）、大肠杆菌（MIG1．42）不能生长，其中对大肠杆菌（MIG1．42）的最小抑制浓度（MIC）为0.5mg/mL；对志贺氏菌（NICPBP51592－7）生长有抑制作用；而对乙型溶血性链球菌（NICPBP32210）、毛霉菌（As3.25)没有抑制作用。在相应的浓度和培养条件下，常用的食品防腐剂苯甲酸钠和山梨酸钾都未表现出上述食品病源微生物抑制活性。     

5个品种白羽肉鸡大肠杆菌耐药差异分析

【目的】通过开展5个品种白羽肉鸡养殖过程中大肠杆菌流行病学研究及耐药性差异情况调查,了解不同品种肉鸡大肠杆菌耐药现状及其差异,为科学指导肉鸡相关疾病诊治和兽药监管提供参考依据。【方法】选用5个品种白羽肉鸡（2个为江苏养殖量较大的国外引进品种, 3个为我国自主选育配套系）为研究对象,分别采集0日龄胎粪样品及4、 8、 12、 16、 20、 24、 28、 32、 36和40日龄的泄殖腔棉拭子,经麦康凯培养基分离大肠杆菌后进行PCR鉴定,并采用Kirby-Bauer （K-B）法进行药敏试验。【结果】从1075份样品中共分离获得978株大肠杆菌,总分离率为91.0%。其中,广明2号（A品种）和圣泽901（C品种）的大肠杆菌分离率最高,均为93.0%; WOD168（E品种）的分离率最低,为88.4%。5个品种白羽肉鸡的胎粪样品分离率、 2个重复的分离率、 5个品种白羽肉鸡大肠杆菌总分离率及不同日龄的分离率均无显著差异 （P>0.05）。5个品种白羽肉鸡大肠杆菌对氨苄西林 （AMP）、阿莫西林 （AML）、红霉素 （E）、四环素 （TE）和氯霉素 （C）已产生较强的耐药性,对阿米卡星 （AK）、磷霉素 （FOS）、阿奇霉素 （AZM）和头孢曲松 （CRO）仍然较敏感;5个品种白羽肉鸡大肠杆菌分离株产生明显的多重耐药,但不同品种的优势耐药谱有所差异。【结论】不同品种白羽肉鸡大肠杆菌耐药情况受用药习惯、饲养方式及条件状况等环境因素的多重影响,但其多重耐药性具有一定的遗传稳定性。因此,在实际生产中应从动物饲养的源头抓起,鼓励和发展集约化养殖,加强饲料安全检测,改善饲养和防疫条件,严格进行合理规范用药,减少同一药物的使用频率,降低细菌耐药性,有效保障动物产品安全及维护人类健康。     

一例鹌鹑大肠杆菌病的诊治

对鹌鹑疑似大肠杆菌病进行实验室确诊。通过药敏试验筛选敏感药物,并应用综合性防治措施。该致病性大肠杆菌对头孢噻肟（CTX）、头孢曲松钠（CFX）、庆大霉素（GM）和头孢他啶（CED）极度敏感,对氟苯尼考（FF）高度敏感,对阿莫西林（AMX）、氨苄西林（SU）、卡那霉素（K）、泰乐菌素（TL）、硫红霉素（E）、利福平（RA）、氧氟沙星（OFL）、诺氟沙星（NOR．）、环丙沙星（CIP）、恩诺沙星（ENR）耐药。采取交替使用头孢噻肟、头孢曲松钠、庆大霉素、头孢拉啶和氟苯尼考对该病进行治疗．临床效果显著。     

蛭弧菌对草鱼片大肠杆菌生长的控制研究

[目的]研究噬菌蛭弧菌BDYJAL对新鲜草鱼片大肠杆菌生长的控制作用。[方法]进行了蛭弧菌BDYJAL对32株潜在致病菌的裂解试验;并通过设置3个组别：蛭弧菌低浓度组（蛭弧菌∶宿主=1∶1）、蛭弧菌高浓度组（蛭弧菌∶宿主=10∶1）和非添加蛭弧菌对照组,进行了蛭弧菌BDYJAL对草鱼片大肠杆菌的生长控制试验。[结果]蛭弧菌BDYJAL对32株潜在致病菌的裂解率达到了93.8%;鱼片大肠杆菌控制试验中,与对照组相比2个试验组对大肠杆菌的消除控制存在显著差异（P〈0.05）,但这2个试验组在0~36 h内的消除效果无显著差异（P〉0.05）。[结论]蛭弧菌BDYJAL能有效控制新鲜草鱼片的大肠杆菌生长。     

白花曼陀罗和白屈菜水浸液杀菌效果研究

[目的]研究药用植物白花曼陀罗（Datura metel L.）和白屈菜（Chelidonium majus L.）对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌水浸液的杀菌效果。[方法]取当年生成熟白花曼陀罗和白屈菜植株,用沸水浸提法制成药液,以双黄连口服液为对照,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌进行杀菌研究。[结果]白花曼陀罗对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均无明显抑杀作用;白屈菜对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有明显的抑杀作用,但对金黄色葡萄球菌抑杀作用比对大肠杆菌的更强。[结论]白屈菜水浸液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有明显的抑杀作用,而白花曼陀罗水浸液无杀菌作用。     

32种中草药抑菌活性的比较研究

[目的]研究连翘（FRUCTUS FORSYTHIAE）、黄连（RHIZOMA COPTIDIS）和刺五加（RADIX ET RHIZOMA SEU CAULIS ACAN-THOPANACTS SENTICOSI）等32味中草药提取物的抑菌作用。[方法]利用95%乙醇提取药物的有效成分,以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌,采用牛津杯法测定中草药提取物的抑菌作用。[结果]32种中草药中,虎杖等26种中草药提取物对金黄色葡萄球菌具有抑制作用;连翘等23种中草药提取物对大肠杆菌具有抑制作用,且抑菌效果在一定浓度范围内随药液浓度的增大而增强。其中,连翘和黄连对大肠杆菌的最低抑菌浓度分别是4和10 mg/ml,对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度分别是6和8 mg/ml。[结论]虎杖和连翘分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有较好的抑制效果。     

牛粪堆肥中添加抑菌剂对大肠杆菌杀灭效果的研究

[目的]研究牛粪堆肥中添加抑菌剂（石灰氮）对大肠杆菌的杀灭效果,为牛粪的无害化处理提供理论依据。[方法]试验组添加2.0%的抑菌剂,对照组不加抑菌剂,分别在不同的温度（20、303、75、06、0℃）条件下进行堆肥试验,确定适宜堆肥温度;并在30℃条件下添加不同剂量（0、2.0%、2.5%、3.0%）的抑菌剂,确定抑菌剂的最适添加量。[结果]305、0、60℃是杀灭大肠杆菌较理想的温度;在30℃条件下,添加2.5%和3.0%的抑菌剂可在堆肥48 h时检测不到大肠杆菌,说明为达到杀灭牛粪中大肠杆菌的目的至少要在牛粪堆肥中添加2.5%的抑菌剂。[结论]在堆肥（特别是冬季堆肥）中添加石灰氮对提高牛粪中大肠杆菌杀灭效果具有重要意义。     

生长猪胃肠道乳酸菌、双歧杆菌和大肠杆菌的数量和分布规律

本研究采用严格的厌氧微生物培养方法，对5头生长猪进行了测定。结果表明，在生长猪的胃肠道内容物中和粘膜上均有相当数量的乳酸菌、双歧杆菌和大肠杆菌分布，但乳酸菌的数量显著高于其他2种菌（P＜0．01）。3类菌在内容物中的分布为：乳酸菌在猪后肠内容物中的数量分布显著高于胃和小肠（P＜0．01）；双歧杆菌在盲肠内容物中数量最高（P＜0．01）；而盲肠和结构内容物中大肠杆菌的数量分布大于其他部位（P＜0．01）。粘膜的分布为：乳酸菌在结肠，双歧杆菌和大肠杆菌在盲肠粘膜上的数量分布显著高于其他各区段（P＜0．05）。猪胃肠道各区段中，除直肠内容物中双歧杆菌的数量显著高于大肠杆菌外（P＜0．01），其他各区段中2种菌的数量统计差异不显著（P＞0．05）；结肠和直肠粘膜上双歧杆菌的数量显著高于大肠杆菌（P＜0．05）。     

竹红菌素光敏反应抑菌效果研究

[目的]初步研究天然光敏剂竹红菌素（Hypocrellins）光敏反应对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）和大肠杆菌（Escherichia coli）的抑菌效果。[方法]采用滤纸片法观察不同浓度竹红菌素在光照或无光照条件下对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌产生的抑菌圈。[结果]竹红菌素光敏反应对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌这2种革兰氏阳性细菌具有明显的抑菌效果,其中金黄色葡萄球菌比枯草芽孢杆菌敏感。竹红菌素光敏反应对革兰氏阴性细菌大肠杆菌没有抑菌作用。[结论]竹红菌素光敏反应的抑菌活性有望使其发展成为一种新型、天然、无害、无污染的消毒剂。     

豆粕和芸薹饲粮中非淀粉多糖水解产物防御仔猪肠毒性大肠杆菌

传染性腹泻是儿童和仔猪中的主要难题。肠毒性大肠杆菌（ETEC）感染导致小肠中液体和电解质流失。试验旨在研究肠毒性大肠杆菌感染时,豆粕饲粮（SBM）和芸薹饲粮（CM）中非淀粉多糖（NSP）水解产物对液体和溶质净吸收的影响。通过混合糖酶培养豆粕饲粮和芸薹饲粮,产生非淀粉多糖水解产物。两饲粮培育后,离心浆体,在上清中添加无水乙醇可产生两种产品类型：80%乙醇可溶性豆粕产物（ES）和80%乙醇不溶性芸薹产物（EI）。在两个独立试验中研究豆粕饲粮产物（ES）和芸薹饲粮产物（EI）,试验设两因素：产品类型（EI,ES）和肠毒性大肠杆菌感染时间（灌注前、后）。取成对的小肠段,一段为非感染,另一段被肠毒性大肠杆菌感染;用两种产品同时灌注小肠肠段7.5h。测定液体和溶质的净吸收。在两个试验中,与SBM和CM产物相比,灌注对照物（盐）的ETEC感染肠段对液体和溶质的净吸收更低（P≤0.05）。对SBM产物而言,产品类型和感染时间对液体吸收的交互作用显著（P≤0.05）;与灌注前ETEC感染相比,感染前灌注ES产品液体吸收更高,灌注前感染和感染前灌注对液体的吸收分别为（428±34）,（735±22）μL·cm^-2结论：豆粕饲粮和芸薹饲粮非淀粉多糖水解产物,尤其是来源于豆粕饲粮的ES,对维持ETEC感染期液体平衡有益,可见其具有控制ETEC诱导仔猪腹泻的潜能。     

新疆多源喹诺酮类耐药大肠杆菌耐药基因检测及分析

【目的】了解新疆不同动物源喹诺酮类耐药大肠杆菌携带质粒介导的喹诺酮耐药因子（plasmid mediated quinolone resistance,PMQR）的流行现状,及其与主要的β-内酰胺酶基因和 16S rRNA 甲基化酶基因的共存情况。【方法】通过 PCR 方法对猪源（79 株）、牛源（8株）和羊源（96株）喹诺酮类（环丙沙星,诺氟沙星和恩诺沙星）耐药大肠杆菌进行 PMQR（qnrA, qnrB, qnrC, qnrD, qnrS, qepA, oqxA, oqxB, aac(6’)-Ib-cr）、β-内酰胺酶基因（bla_TEM, bla_CTX-M, bla_SHV, bla_KPC, bla_CMY-2, bla_LAP-1）及16S rRNA（armA, rmtB）等基因检测,对目的条带进行DNA测序,确定阳性菌株,对检出携带 β-内酰胺酶基因和16S rRNA 甲基化酶基因的大肠杆菌进行β-内酰胺类及氨基糖苷类药敏试验,分析其携带的基因型与耐药表型之间的关系。【结果】猪源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS（5/79,6.33%）,oqxA（35/79,44.30%）,oqxB（40/79,50.60%）和aac(6’)-Ib-cr（4/79,5.06%）,检出的β-内酰胺酶基因为bla_TEM（79/79,100%）,检出的16S rRNA 基因为rmtB（3/79,3.80%）;牛源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS（1/8,12.50%）,oqxA（1/8,12.50%）,oqxB（1/8,12.50%）和aac(6’)-Ib-cr（1/8,12.50%）和qepA（1/8,12.50%）,检出的β-内酰胺酶基因为bla_TEM（8/8,100%）和bla_SHV（1/8,12.50%）;羊源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS（6/96,6.25%）,oqxA（32/96,33.3%）,oqxB（37/96,38.5%）和aac(6’)-Ib-cr（22/96,22.91%）,检出的β-内酰胺酶基因为bla_TEM（96/96,100%）和bla_CTX-M（2/96,2.08%）,检出的16S rRNA 基因为rmtB（2/96,2.08%）;未检出qnrA,qnrB,qnrC,qnrD,bla_KPC,bla_CMY-2和bla_LAP-1被检基因。不同动物源大肠杆菌中存在基因共存现象,携带β-内酰胺酶基因和16S rRNA 甲基化酶基因的喹诺酮类耐药大肠杆菌对β-内酰胺类和氨基糖苷类药物耐药呈一定的相关性。【结论】不同动物源喹诺酮类耐药大肠杆菌中存在PMQR因子,可与主要的 β-内酰胺酶和/或16S rRNA 甲基化酶基因共存。此外,首次在羊源大肠杆菌中检出PMQR 因子、β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶基因。     

中西药联用对禽源大肠杆菌的体外抑菌效果研究

[目的]探讨中西药联用对禽源大肠杆菌的体外抑菌效果.[方法]采用微量肉汤稀释法测定2种临床常用西药（氟苯尼考、恩诺沙星）和4味中药（黄连、黄芩、金银花和板蓝根）对大肠杆菌多重耐药菌株的MIC值,探讨2种西药和4味中药联用对禽源大肠杆菌多重耐药菌株的体外抑菌活性.[结果]6种药物对大肠杆菌标准菌株和多重耐药菌株均具有抑菌活性.在8种中西药联用药物组合中,氟苯尼考/黄芩、恩诺沙星/黄连、恩诺沙星/黄芩3组药物组合联用具有相加作用,其他5组中西药物组合均呈现无关作用.[结论]该研究可为进一步筛选有效药物组合防治禽大肠杆菌病提供重要指导.     

冷暴露对虎纹蛙非特异性免疫应答的影响

[目的]探讨冷暴露对虎纹蛙非特异性免疫应答的影响。[方法]将体重为（47.76±1.10）g的虎纹蛙分别在22℃和10℃条件下暴露10d,比较脾巨噬细胞呼吸爆发强度、血清补体活力、胃溶菌酶活力3项免疫指标在注射灭活大肠杆菌（Escherichia coli）12h后的应答情况。[结果]注射大肠杆菌前,10℃处理组血清补体活力显著低于22℃对照组（P〈0.05）,而2组间脾巨噬细胞呼吸爆发强度及胃溶菌酶活力无显著性差异;注射大肠杆菌后,10℃处理组的3项免疫指标对大肠杆菌刺激的应答能力变化均不显著,而22℃对照组则变化显著（P〈0.05）。[结论]冷暴露会导致虎纹蛙非特异性免疫应答降低。     

拟南芥热激因子HSF1的表达与纯化

1材料与方法 1．1材料大肠杆菌Escherichia coli M15（pQE32／His6-HSF1,pREP4）和大肠杆菌E．coli TG1（PQE30空载体）。