药用植物马蔺的内生真菌分离及其抑菌活性的研究

[目的]研究药用植物马蔺内生真菌资源的多样性及其抑菌活性特征。[方法]通过组织块法对内生真菌进行分离,并选择小麦全蚀病菌、枸杞黑果病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌和黄瓜立枯病菌5种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌4种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性。[结果]从马蔺不同组织器官中分离出32株内生真菌,以根部的最多,茎叶次之;经形态学初步分类鉴定其属于3个目,3个科,4个属。其中,有22株内生真菌对2种或2种以上的植物病原真菌指示菌有不同程度的抑制作用,占菌株总数的68.8%;有12株内生真菌对2种或2种以上的供试细菌指示菌具有不同程度的抑制作用,占分离菌株总数的37.5%;有7株内生真菌对3种以上的植物病原真菌指示菌具有明显的抑制作用,占菌株总数的21.9%;有2株内生真菌对2种供试细菌指示菌有明显的抑制作用,占分离菌株总数的6.3%。马蔺内生真菌对供试植物病原真菌指示菌和供试细菌指示菌有明显抑制作用,且抑制植物病原真菌的范围较宽;2株高活性菌株来源于马蔺叶部,对5种供试真菌指示菌具有明显抑制作用;2株高活性菌株来源于马蔺根部,对2种供试细菌指示菌具有明显抑制作用;1株高活性菌株对4种供试真菌指示菌和1种供试细菌指示菌有明显抑制作用。这5株高活性内生真菌菌株属于束丝菌属、镰孢霉属、梭孢霉属和组丝核菌属。[结论]药用植物马蔺具有丰富的内生真菌资源,并具有明显的抑菌活性。     

一株拮抗棉花枯萎病菌产铁载体内生细菌的筛选

[目的]以盆栽控病效果良好的一株植物内生细菌为材料,通过对铁载体的研究,探索其对棉花枯萎病的拮抗机制。[方法]通过蔗糖-天冬氨酸（Modified Sugar-Aspartic Acid,MSA）平板初步判断菌株是否产铁载体及其荧光特性;根据特定波长下吸光度值测定各菌株在液体MSA培养基内产铁载体活性;不同铁离子浓度下,比较其铁载体对棉花枯萎病的抑制作用;结合形态、生理生化等特征对其进行初步鉴定。[结果]该内生细菌在MSA培养基中高产的荧光铁载体对棉花枯萎病原真菌——尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）具有抑制作用,随着铁离子浓度的提高对病原真菌的抑制作用减弱;初步分析确定该内生菌株属于芽孢杆菌属（Bacillus）。[结论]芽孢杆菌可以通过分泌铁载体竞争铁的吸收而抑制尖孢镰刀菌的生长。     

一株拮抗棉花枯萎病菌产铁载体内生细菌的筛选(英文)

[目的]以盆栽控病效果良好的一株植物内生细菌为材料,通过对铁载体的研究,探索其对棉花枯萎病的拮抗机制。[方法]通过蔗糖-天冬氨酸(Modified Sugar-Aspartic Acid,MSA)平板初步判断菌株是否产铁载体及其荧光特性;根据特定波长下吸光度值测定各菌株在液体MSA培养基内产铁载体活性;不同铁离子浓度下,比较其铁载体对棉花枯萎病的抑制作用;结合形态、生理生化等特征对其进行初步鉴定。[结果]该内生细菌在MSA培养基中高产的荧光铁载体对棉花枯萎病原真菌——尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)具有抑制作用,随着铁离子浓度的提高对病原真菌的抑制作用减弱;初步分析确定该内生菌株属于芽孢杆菌属(Bacillus)。[结论]芽孢杆菌可以通过分泌铁载体竞争铁的吸收而抑制尖孢镰刀菌的生长。     

两株油樟内生真菌抗真菌活性与降解纤维素研究

为了研究两株油樟内生真菌对植物病原真菌的抑制作用,并对其生防能力做出评价,采用对峙生长法研究了油樟内生真菌YY6、YG48对辣椒疫霉病原真菌（Phytophthora Capsici）、杨树溃疡病原真菌（Dothiorella gregaria）、苹果炭疽病原真菌（Glomerella cingulata）、棉花枯萎病原真菌（Fusarium oxysporum）、玉米大斑病原真菌（Fusarium graminea-ru）、水稻纹枯病原真菌（Corticium sasakii）的抗菌活性,同时采用滤纸酶活测定法检测其发酵液的纤维降解能力。发现油樟内生真菌YY6对辣椒疫霉、杨树溃疡、苹果炭疽、棉花枯萎及玉米大斑这5种常见植物病害的病原真菌具有明显抑制作用,其发酵液的滤纸酶活性可达0.327 U/mL,YG48对辣椒疫霉病原菌、玉米大斑病原菌及水稻纹枯病原菌具有明显抑制作用,很难降解利用纤维素。因此,YY6具备开发为多种植物病害生防菌的潜力。     

油樟内生细菌的多样性及抑制植物病原菌初步研究

从油樟（Cinnamomum longepaniculatum）根茎叶中分离得到203株内生细菌,通过形态观察选出形态特征不完全相同的68株内生细菌（根56株、叶9株、茎3株）,初步显示油樟中内生细菌具有多样性和器官特异性的特点。通过平板拮抗的方法,对选择出的68株内生细菌进行抑制植物病原真菌试验。68株内生细菌中有17株（全部分离自根部）对辣椒疫霉菌（Phyto phthora capsici）、胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）、禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）、大斑凸脐蠕孢菌（Exserohilum turcicum）等4种植物病原真菌中的至少1种有抑制作用。这些内生细菌对辣椒疫霉菌的抑制效果最好,对胶孢炭疽菌的抑制效果最差。     

山苍子内生细菌的分离及抑菌活性研究

[目的]探讨山苍子内生细菌的抑菌活性及生防效果。[方法]从山苍子的根、茎、叶和果中分离出内生细菌52株(其中根23株、茎8株、叶7株、果实14株),采用对峙生长法检测其对植物病原真菌的抑制效果。[结果]5株来自叶和果的内生细菌分别对杨树溃疡病菌、小麦纹枯病菌、番茄灰霉病菌、小麦赤霉病菌、苹果炭疽病菌和辣椒疫霉病菌有较好的拮抗作用。田间试验结果表明,1株16S rD-NA序列(序列号为JN252095)与Bacillus megaterium最为接近的山苍子叶内生细菌对辣椒疫霉病的防治效果较好,且可促进辣椒植株生长。[结论]山苍子内生细菌作为农作物生防细菌效果明显,值得进一步研究。     

油樟内生细菌的多样性及抑制植物病原茵初步研究

从油樟(Cinnamomum longepaniculatum)根茎叶中分离得到203株内生细菌,通过形态观察选出形态特征不完全相同的68株内生细菌(根56株、叶9株、茎3株),初步显示油樟中内生细菌具有多样性和器官特异性的特点.通过平板拮抗的方法,对选择出的68株内生细菌进行抑制植物病原真菌试验.68株内生细菌中有17株(全部分离自根部)对辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、大斑凸脐蠕孢菌(Exserohilum turcicum)等4种植物病原真菌中的至少1种有抑制作用.这些内生细菌对辣椒疫霉菌的抑制效果最好,对胶孢炭疽菌的抑制效果最差.     

内生细菌ZJ1105的分离及其抗真菌机制研究

按照常规方法从5种常见的园艺植物茎、叶组织中共分离获得101株内生细菌,其中36株的代谢产物至少对1种或几种植物病原真菌的生长有明显的抑制作用,菌株ZJ1105的抑制活性最强。根据菌落特征、显微观察、生理生化反应和16s rDNA分析结果,初步鉴定ZJ1105为不动杆菌(Acinetobacter sp.)。进一步的研究表明,该菌的活性成分在正丁醇萃取部分,其作用机制可能与破坏真菌的细胞壁有关。     

油茶炭疽病拮抗内生细菌的筛选

从健康的油茶叶中分离得到内生细菌菌株156株,经平板对峙法初筛,筛选到油茶炭疽病菌菌丝生长有抑制作用的有25株,再通过发酵法复筛,筛选到1株具有较强拮抗作用的菌株Y13,其抑菌直径达10mm以上．对Y13进行形态学和生理生化指标分析,初步鉴定为芽孢杆菌．抗菌谱测定表明,该菌对黄瓜枯萎病菌、水稻纹枯病菌、番茄早疫病菌、油茶叶枯病菌等4种病原真菌也具有较强的抗菌活性．     

杜仲内生真菌对植物病原真菌的抑菌活性研究

为了研究杜仲内生真菌对植物病原真菌的抑制作用,以苹果腐烂病菌(Cytospora sp.)、番茄灰霉病菌(Botrytis cintrea)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium f.sp.cucumerinum)、玉米大斑病菌(Helminthos porium turcicum)和白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)为供试菌种,对49株杜仲(Eucommia ulmoides Oliv)内生真菌及其次生代谢物进行了抑菌活性试验。结果表明,有22株内生菌至少对3种测试菌有抑制作用,9株内生菌对6种测试菌都有抑制作用;11株内生菌的次生代谢产物至少对3种测试菌有抑制作用,4株内生菌的次生代谢产物对6种测试菌都有抑制作用。说明从杜仲内生真菌中可以选择出对植物病原真菌具有良好抑制作用的菌种。     

拮抗细菌对部分水果产后病原真菌的抑制及防腐作用

研究了桔抗细菌即地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)W10和多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)W3、Y2对苹果轮纹病菌、柑桔炭疽病菌和柑桔青霉病菌的抑制作用。结果表明,拮抗细菌对病菌菌丝生长、产孢和芽管伸长均有显著的抑制作用,其中W10菌株抑菌作用最强。显微镜观察显示,车抗细菌可引起病菌菌丝异常,即菌丝扭曲,菌丝细胞畸形,菌丝颜色变淡,菌丝断裂离解等。离体果实接种试验表明,菌株W10能明显推迟水果发病,降低果腐率,抑制病斑扩展。     

银杏内生真菌拮抗灰霉菌的初步研究

从银杏枝条和叶片中分离到77个真菌菌株,以作物重要病原菌灰葡萄孢(Botrytis cinereaPers.)为指示菌,筛选拮抗菌株。平板对峙测定结果表明:46个菌株对灰霉菌有拮抗作用,占总菌株数的59.7%,其中有7个菌株拮抗性较强,占总菌株数的9.1%。不同内生菌株发酵液离体测定中,2-18和2-9菌株防治离体月季叶片和花瓣灰霉病的效果较稳定,抑制率保持在80.8%~100%。初步鉴定结果表明,2-18和2-9菌株为毛壳菌属真菌(Chaetom iumsp.)。     

广西地不容内生真菌DBR-12和DBR-23代谢产物的抑菌活性

研究从广西地不容块根中分离出的DBR-12和DBR-23两株内生真菌的抑菌活性,为其在抗菌剂领域的开发利用提供依据。首先用液体培养基对内生真菌进行发酵培养,采用两相溶剂液液萃取法对发酵产物进行初步分离,然后用菌丝生长速率法和带毒平板法分别测定发酵产物对10种植物病原真菌和15种动物致病菌的抑菌活性。结果表明,DBR-12和DBR-23发酵产物乙酸乙酯萃取物对植物病原真菌均有较好的抑菌活性。DBR-12对玉米小斑病菌等6种病原真菌的抑制效果较好,有效中浓度(EC50)为0.010 4~0.079 7 g/L,其中对玉米大斑病菌的毒力最高;DBR-23对除玉米小斑病菌外的9种病原真菌抑制效果较好,EC50为0.020 6~0.174 6 g/L,其中对甘蔗凤梨病菌的毒力最高。DBR-12发酵产物正丁醇萃取物对玉米大斑病菌等5种植物病原真菌的抑制效果较好,EC50为0.107 8~0.646 9 g/L,其中对金橘砂皮病菌的毒力最高。DBR-23发酵产物乙酸乙酯萃取物对痢疾志贺氏菌等12种动物致病菌有抑菌活性,最低抑菌浓度(MIC)为1~2 g/L;DBR-12发酵产物对动物病原菌无抑菌活性。综上,广西地不容内生真菌DBR-12和DBR-23有较好的抑菌活性,在抗菌剂领域有较好的开发应用前景。     

橡胶树不同种群炭疽菌对杀菌剂的敏感性

为了解国内主要植胶区炭疽菌复合种菌株对不同杀菌剂的敏感性,采用生长速率法室内测定乐东炭疽(Colletotrichum.ledongense)、果生刺盘孢(C. fructicola)、暹罗炭疽(C. siamense)、版纳炭疽(C. bannanense)、C.laticiphilum、新种群和华南炭疽(C. australisinense)9株胶孢炭疽病菌(C.glocosporioides Penz.)和8株尖孢炭疽菌(C. acutalum Simmons)对8种杀菌剂的敏感性,并在此基础上进行二元复配评价。结果表明:供试的17株橡胶树炭疽病菌对咪鲜胺最敏感、EC₅₀值为0.001 1～0.218 7 mg·L?1,平均为0.085 3 mg·L?1;咪鲜胺、多菌灵、氟硅唑、戊唑醇、己唑醇、咪鲜胺·三唑酮6种药剂对炭疽菌菌丝生长有显著抑制作用,腈菌唑和粉唑醇对病原菌菌丝抑制效果较差;多数以三唑类为代表的麦角甾醇生物抑制剂对病原菌菌丝生长有明显的抑制效果,尖孢复合种内的新种群对粉唑醇、腈菌唑觉和多菌灵3种药剂敏感性性差;咪鲜胺与戊唑醇的比例分别在7∶3和4∶6时对橡胶树炭疽菌优势种群暹罗炭疽和华南炭疽的抑制效果最优。     

植物病原真菌产漆酶菌株的筛选

 【目的】从常见植物病原真菌中筛选具有漆酶活性的病原菌,对相对酶活力较高的菌株进行漆酶致病力测定,为深入研究漆酶在植物病原真菌致病过程中所发挥的作用及病菌的扩展机理奠定基础。【方法】以2,2’-连氮-双[3-乙基苯并噻唑-6-磺酸](ABTS)为底物,通过平板显色反应筛选得到产漆酶的病原菌,同时利用苯胺蓝(Azure-B)脱色法确定目标菌株降解木质素作用,采用分光光度计法在420 nm下测定漆酶活性,最后利用组织病理学分析漆酶对病原菌致病力的影响。【结果】从20种重要植物病原真菌中筛选得到10种产漆酶的病原菌,且均具有降解木质素的作用,对其中6种颜色变化不同的病原菌进行漆酶活力测定,发现玉米大斑病菌的胞内漆酶活力最高,为18.984 U?mL-1,小孢拟盘多毛孢的胞外漆酶活力最高,为0.919 U?mL-1。致病力测定表明,在玉米大斑病菌的致病过程中,漆酶可以氧化玉米叶片并能够促进病原菌在寄主组织中的扩散。【结论】在产漆酶的植物病原真菌中,漆酶大多以胞内酶形式存在,并具有降解木质素的作用,漆酶可以促进玉米大斑病菌在寄主组织中扩展。     

西红花茎腐病致病真菌的分离与鉴定

  目的  真菌性病害是西红花Crocus sativus的主要病害。分离鉴定西红花茎腐病致病菌可为西红花茎腐病科学防控及特效杀菌剂开发提供科学依据。  方法  以‘番红花1号’C. sativus ‘Saffron No. 1’为供试材料，采用组织分离法从感病球茎中分离获得致病真菌。通过PCR扩增、测序与进化树构建对真菌保守内部转录间隔区序列(ITS)和RNA聚合酶 Ⅱ 亚家族(RPB2)基因序列进行同源性比对与进化分析。对感病球茎进行致病菌再分离并回接到植株，验证真菌在种球种植模式下的致病特性。  结果  所分离获得的球茎致病真菌与黑曲霉Aspergillus niger的形态特征高度相似；候选致病真菌的ITS和RPB2保守序列与其他植物来源的黑曲霉同一DNA序列同源性高达99.6%，与黑曲霉处在同一进化分支上；基质种植模式下，接种黑曲霉菌液极显著(P＜0.01)增加了西红花球茎的发病率。  结论  黑曲霉是引起西红花种球腐烂的真菌病害之一。图7参32     

毛白杨和河北杨锈菌交叉接种的研究

通过交叉接种试验和病原菌形态及越冬场所的观察,证实了毛白杨锈病和河北杨锈病是由同一种病原菌—杨栅锈菌(Melampsora rostrupii Wagner)引起。采集鉴定了河北杨枝干病害的7种病原真菌,其中3种是国内新纪录。     

生防外生菌根真菌的筛选及其生长和发酵条件优化

为了筛选具有广谱拮抗活性的外生菌根真菌,采用平板对峙法(初筛)和生长速率法(复筛)测定了6种外生菌根真菌对5种常见植物病原真菌的抑制活性,通过单因素试验对抑制效果较好的生防菌进行生长及发酵条件优化。结果表明,彩色豆马勃Pt01在初筛试验中对植物病原真菌的抑菌率为40.1%~49.7%,在复筛试验中抑菌率为78.5%~91.8%,抑菌作用整体高于其他外生菌根真菌。条件优化后发现,Pt01在28℃、p H值为7.0、碳源为乳糖、氮源为硝酸钾时生长最好;其最佳发酵条件:温度为30℃,初始p H值为6.0,碳源为乳糖,氮源为酵母膏,时间为5 d,转速对不同病原真菌抑菌率各有不同影响,需要单独考虑最佳转速。彩色豆马勃菌株Pt01对5种受试病原真菌均有明显的抑制作用,优化其生长和发酵条件为其在植物病害防治上的应用提供了理论依据。     

Preliminary Studies on Antifungal Activity of Xanthium sibiricum and the Endophytic Fungi

[Objective] The study was aimed to provide theoretical foundation for developing a new fungicide with high activity,low toxicity and low residua.[Method] Based on the plant growth rate and inhibition zone methods,the antifungal activity of extracts of every organ of Xanthium sibiricum,the fermentation liquid of endophytic fungi MC4-23,and the extract of mycelium were tested with six kinds of pathogenic fungi and three kinds of pathogenic bacteria respectively.[Result] The extract of every organ of Xanthium sibiricum,the fermentation liquid of endophyic fungi MC4-23,and the extract of mycelium all had antifungal activities.The acetone extracts of Xanthium sibiricum had stronger antifungal activities than the ethanol extracts of Xanthium sibiricum.The extracts of leaf have the strongest antifungal activities against fungi and bacteria.The inhibition rates of the six pathogenic fungi were all above 47.8%,and the inhibition diameters of the three pathogenic bacteria were all above 0.5 centimeter.The fermentation liquid of endophytic fungi also had strong activities against the fungi and bacteria.The inhibition rates of the six pathogenic fungi were all above 68.1%.The extracts of root of Xanthium sibiricum and the mycelium of endophytic fungi were all had antifungal activities.[Conclusion] Xanthium sibiricum and endophyic fungi MC4-23 had great value of development and utilization.     

苍耳提取液与植物内生真菌抗菌活性研究(英文)

[Objective] The study was aimed to provide theoretical foundation for developing a new fungicide with high activity,low toxicity and low residua.[Method] Based on the plant growth rate and inhibition zone methods,the antifungal activity of extracts of every organ of Xanthium sibiricum,the fermentation liquid of endophytic fungi MC4-23,and the extract of mycelium were tested with six kinds of pathogenic fungi and three kinds of pathogenic bacteria respectively.[Result] The extract of every organ of Xanthium sibiricum,the fermentation liquid of endophyic fungi MC4-23,and the extract of mycelium all had antifungal activities.The acetone extracts of Xanthium sibiricum had stronger antifungal activities than the ethanol extracts of Xanthium sibiricum.The extracts of leaf have the strongest antifungal activities against fungi and bacteria.The inhibition rates of the six pathogenic fungi were all above 47.8%,and the inhibition diameters of the three pathogenic bacteria were all above 0.5 centimeter.The fermentation liquid of endophytic fungi also had strong activities against the fungi and bacteria.The inhibition rates of the six pathogenic fungi were all above 68.1%.The extracts of root of Xanthium sibiricum and the mycelium of endophytic fungi were all had antifungal activities.[Conclusion] Xanthium sibiricum and endophyic fungi MC4-23 had great value of development and utilization.