3种磷酸二酯酶对小鼠卵母细胞自发成熟的影响

为探讨和比较磷酸二酯酶(PDE)3、4和5对小鼠卵母细胞体外自发成熟的影响,将小鼠卵丘卵母细胞复合体(COCs)和裸卵(DOs)分别培养在含有或不含有PDE 3、4和5特异性抑制剂的M-199培养液中。结果表明:PDE3的特异性抑制剂cilostamide和PDE5的特异性抑制剂zaprinast均能显著抑制小鼠COCs和DOs的自发成熟,且其抑制效应不随培养时间的延长而减弱,但却是可逆的;而PDE4的特异性抑制剂rolipram对小鼠COCs和DOs没有影响。上述结果提示,不同亚型的PDE在小鼠卵母细胞减数分裂过程中具有不同的调节作用。     

磷酸二酯酶抑制剂对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响

哺乳动物有腔卵泡中的卵母细胞在体外会自发恢复减数分裂,适当延迟减数分裂的自发恢复,能促进核与胞质成熟的同步化,有利于后续胚胎的发育。本试验研究了磷酸二酯酶3(PDE 3)特异性抑制剂milrinone对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响。结果表明,milrinone抑制山羊卵母细胞体外成熟的时间为6 h,其最佳剂量为100μmol/L,经milrinone处理体外培养28 h成熟的山羊卵母细胞用于孤雌激活,能显著提高孤雌激活胚的卵裂率及囊胚率。说明成熟培养液中添加适当剂量的milrinone,能显著提高体外成熟的山羊卵母细胞的质量。     

牛磺酸对大鼠血压及相关因子的影响

通过检测补充不同水平牛磺酸和β-丙氨酸(牛磺酸转运抑制剂)大鼠的血压和心肌中环一磷酸腺苷(Cyclic 3',5'-adenosinemonophosphate,cAMP),环一磷酸鸟苷(cyclic 3',5'-guanosine monophosphate,cGMP)和血清中Ca2 和Na 的含量,探讨牛磺酸对高血压发生的预防作用.试验结果表明:补充牛磺酸可使大鼠尾部动脉血压降低的同时,心肌中cGMP的含量提高44.2%(p<0.05),而对心肌中cAMP和血清Ca2 、Na 的含量变化均不显著(p>0.05)     

囊素对杂交瘤细胞内第二信使物质的影响

以分泌抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞为对象,通过免疫试验测定了囊素对其第二信使物质的影响.结果表明,囊素处理对杂交瘤细胞内cAMP浓度的影响不明显(P>0.05),而对cGMP浓度的影响与囊素作用的时间和剂量有关.分别用50μg/mL和500μg/mL囊素处理5 min后,两组细胞cGMP浓度均显著下降(P<0.05),导致cAMP/cGMP值明显上升(P<0.05),10 min后,前者的cGMP浓度不再变化,而后者的cGMP浓度继续下降.提示囊素可能以cGMP浓度或cAMP/cGMP值的变化为介导而起作用.     

牛蒡子苷对小鼠原代骨骼肌细胞磷酸二酯酶活性及细胞生长的影响

 【目的】以茶碱为参照，观察中药成分牛蒡子苷对原代骨骼肌细胞磷酸二酯酶（Phosphodiesterase，PDE）活性及蛋白质合成的影响，探讨中药通过抑制PDE促进肌肉生长的作用及机理。【方法】分离1～3日龄ICR小鼠四肢肌肉用于骨骼肌原代细胞培养，在培养至第5～6天时向培养基中添加不同浓度的牛蒡子苷和茶碱，以不含牛蒡子苷和茶碱的培养基为阴性对照，继续培养24 h，采用HPLC、ELISA以及考马斯亮蓝法分别测定骨骼肌细胞cAMP PDE的活性、细胞内cAMP水平以及细胞总蛋白质合成。【结果】牛蒡子苷终浓度达到2.5 μg•ml-1、茶碱终浓度为20 μg•ml-1时均能极显著抑制原代培养骨骼肌细胞cAMP PDE的活性(P＜0.01），显著提高细胞内cAMP水平（P＜0.05），极显著促进肌细胞总蛋白质的合成（P＜0.01）。【结论】中药成分牛蒡子苷具有通过调节骨骼肌细胞内PDE的活性和cAMP水平，增加肌细胞蛋白质合成，促进骨骼肌细胞生长的作用。结果提示对PDE有抑制作用的中药有望成为促进动物生长的新型饲料添加剂。     

外源CNT对哈白兔体内CNT和GH及瘦素动态变化的影响

【目的】研究外源性环核苷酸(CNT)对动物血浆中内源环鸟苷酸(cGMP)和环腺苷酸(cAMP)、生长激素(GH)及瘦素动态变化规律的调控作用。【方法】以哈白兔为试验动物,设置对照组(注射生理盐水)、cGMP组、cAMP组和cGMP+cAMP组,后3个处理组分别外源注射cGMP、cAMP及其等量混合物的腹腔注射液,在注射后1,3,6,10,15,21,28,36,45,55,65,75,85,95h采集血样,分别运用放射免疫法测定动物内源cGMP、cAMP、瘦素及GH的含量。【结果】单独注射cGMP可以显著提高内源性cGMP的水平,而且在注射后45h以内效果最佳;单独注射cAMP可以显著提高内源性cAMP的水平,而且在4d或者更长时间会持续有效;无论单独注射cAMP或cGMP,还是混合注射cAMP+cGMP,内源性cAMP总有优于内源性cGMP 6%的优势。此外,cGMP对血浆瘦素水平有较小的正调控作用,cAMP对血浆瘦素水平有负调控作用,cGMP+cAMP对血浆瘦素的调控作用介于以上两者之间,而且cAMP的作用相对较为明显;注射cAMP后的55h以内,瘦素质量浓度明显降低,以后趋于正常;cGMP、cAMP及cGMP+cAMP对血浆GH质量浓度均有显著的正向调控作用,而且以cGMP的优势更为明显。【结论】探讨了外源CNT作用下内源cGMP、cAMP、瘦素及GH的动态变化规律,为通过外源CNT来调节动物体生理水平提供了理论依据。     

艾灸盒温灸对阳虚体质者症状及血清cAMP/cGMP比值的影响

目的 观察艾灸盒温灸疗法对阳虚体质者症状及血清环磷酸腺苷（cAMP）/环磷酸鸟苷（cGMP）比值的影响,探究阳虚体质与cAMP/cGMP比值的相关性。方法 将90例阳虚体质受试者随机分为灸盒组、参附液组、肾气丸组,每组30例,3组均以7 d为1个疗程,连用4个疗程。根据治疗后受试者阳虚质判定评分量表的得分情况评价疗效,同时观察治疗前后血清cAMP/cGMP比值变化情况。结果 治疗后,3组受试者阳虚体质转化分均较前显著下降（P<0.01）,灸盒组下降程度高于参附液组和肾气丸组（P<0.05）;3组受试者血清cAMP/cGMP比值均较前下降（P<0.05）,其中灸盒组下降幅度最高（P<0.05）;灸盒组总有效率为53.3%,参附液组总有效率为43.3%;,肾气丸组总有效率40.0%,3组整体疗效相当（P>0.05）。结论 艾灸盒温灸能显著改善阳虚体质,cAMP/cGMP与阳虚体质存在一定的相关性。     

磷酸二酯酶亚型抑制剂与细胞周期蛋白抑制剂对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

选用磷酸二酯酶3（PDE3）特异性抑制剂Milrinone和PDE4特异性抑制剂Rolipram以及细胞周期蛋白依赖性激酶（cdk）抑制剂Roscovitine（ROSC）对绵羊卵丘卵母细胞复合物（COCs）的体外自发成熟进行研究，拟建立一种模拟体内卵泡环境的绵羊卵母细胞体外培养模型。以M-199为基础培养液，绵羊COGs在含有50μmol／L的Milrinone、Rolipram、ROSC或不含上述任何抑制剂的培养液中分别培养24h。COCs在含有50μmol／LROSC的培养液中培养24h，转移到含有20IU／L FSH的培养液继续培养24h检查核相。结果表明：COGs在M-199基础培养液和含有Rolipram的培养液中都可以自发恢复减数分裂，但是在含有Milrinone或ROSC的培养液中减数分裂受到阻滞；并且ROSC对绵羊COCs体外自发成熟的抑制作用要远高于Milrinone（P〈0．05）。当COGs从ROSC转移到含有20Iu／LFSH的培养液继续培养24h后．90．4％卵母细胞恢复到第2次减数分裂中期（MⅡ）。上述结果表明PDE3和cdk在绵羊减数分裂恢复中具有重要的作用。     

ZD制剂对小鼠巨噬细胞cAMP、cGMP、PDE含量及cAMP/cGMP的影响

ZD制剂由川椒、茵陈、白芨等12味中草药经研磨、煎煮、浓缩再配以适当佐剂制成,是治疗马属动物肢蹄软组织损伤的经典处方,具有确实的临床疗效。cAMP和cGMP是真核细胞内的炎症反应调节因子,许多致炎因子通过破坏或改变炎症细胞内cAMP/cGMP的值起到致炎或抗炎作用。此次实验,目的:探讨ZD制剂对炎症过程中巨噬细胞中cAMP、cGMP、PDE含量及cAMP/cGMP比值的影响。方法:用脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞,构建炎性细胞模型。用5种不同浓度的ZD制剂进行实验。采用ELISA法检测ZD制剂干预前后细胞cAMP、cGMP及PDE的变化,并计算cAMP/cGMP比值的变化。结果:ZD制剂可抑制模型细胞中PDE的表达并提高cAMP含量及cAMP/cGMP的比值;对cGMP未见明显影响。表明ZD制剂抗炎机制与抑制PDE表达,高cAMP含量及cAMP/cGMP比值密切相关。     

猪中性粒细胞磷酸二酯酶基因表达及活性研究

 【目的】通过对猪中性粒细胞磷酸二酯酶（PDE）基因表达、活性及特异性抑制剂实验检测，研究其存在的主要PDE亚型及在体外的活性，为探讨PDE在中性粒细胞的分布、活性变化及对cAMP、cGMP调节与中性粒细胞功能关系提供依据。【方法】采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测PDE基因在猪中性粒细胞的表达，以高效液相色谱（HPLC）检测环核苷酸在PDE反应前后的含量变化，计算PDE活性。【结果】在检测的18个PDE亚型中，PDE1B、2A、3A、3B、4A、4B、4C、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A、11A 共15个PDE mRNA在猪中性粒细胞表达，特异性抑制剂实验表明PDE4、PDE5分别为水解cAMP、cGMP的主要PDE亚型；cAMP/cGMP-PDE在10～40 μl范围内，与其活性存在良好的线性关系（r＝0.9929/0.9992）。【结论】猪中性粒细胞至少存在15个PDE亚型，其中PDE4、PDE5为主要存在的2个亚型，PDE样品量在一定范围内与其活性存在良好的线性关系，可作为筛选PDE型中性粒细胞功能调节剂的方法。