猪精液预处理稀释液与冷冻基础液的配伍效应

采用6种预处理稀释液对猪精液进行预处理,然后用3种冷冻基础液冷冻保存,研究精液预处理稀释液和冷冻基础液对精子冷冻保存效果的影响,以及其间的配伍效应。结果表明,不同的预处理稀释液对解冻后精子活力的影响差异显著(P<0.05),而3种冷冻基础液对冻后精子活力的影响差异不显著(P>0.05)。不同的预处理稀释液与冷冻基础液之间存在明显的配伍效应,并且用含甘油的稀释液对平衡不同时间的精液冷冻时,其配伍效应又有所不同。猪精液中去除精清可显著提高精子冻后活力和顶体完整率(P<0.05),有利于提高精液品质。     

猪精液颗粒冷冻技术的研究

为提高猪冻精质量,加速猪冻精在生产上的应用,本试验以解冻后的精子活率、顶体完整率和体外受精(IVF)结果作为判定指标,探讨了冷源和Equex.STM对猪精液颗粒冷冻效果的影响。手握法采集成年、健康种公猪精液,分别采用含有Equex.STM的稀释液和普通稀释液进行两步法稀释,然后以干冰或液氮为冷源进行精液冷冻。结果表明,以干冰为冷源滴冻精液冻后活率为0.487833±0.046761,顶体完整率为0.782±0.039704,而以液氮为冷源的方法冻后活率为0.3334±0.055734、顶体完整率为0.5578±0.068482,前者在这两项指标上均显著优于后者(P<0.05)。另外,在稀释液中添加Equex.STM,以干冰为冷源进行滴冻,可使冻精顶体完整率极显著提高(P<0.01)。以含有Equex.STM的稀释液采用干冰滴冻的冻精进行IVF,胚胎卵裂率、囊胚率分别为0.5316±0.125582和0.216±0.053198。结果表明,采用Equex.STM作为冷冻保护剂并以干冰作为冷源可以获得高质量的猪冷冻精子。     

不同稀释剂对猪冷冻精液的影响

手握法采集12月龄大约克种公猪精液,在37℃下离心,弃去精清,收集浓缩段富含精子部分,用7种不同的稀释液进行稀释,应用液氮熏蒸法制作颗粒冻精。结果表明,在7种稀释液中,7号稀释液优于其他6种稀释液(p<0.05);与其他的冷冻保护剂相比,甘油的冷冻保护性能较好(p<0.01),其适宜浓度为2~4ml/l;干解冻(40~45℃)效果优于湿解冻,解冻后精子活率达0.46~0.49(p<0.05);稀释液中添加安钠咖可有效地延长精子的冻后存活时间(p<0.01)。     

实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响

【目的】探索实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响。【方法】采用实时精子分离系统对精液进行分离优选,液氮冷冻法制作细管冻精,以未分离精液为对照,检测实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响。【结果】分离优选精子解冻后,精子活率、顶体完整率、质膜完整率、正常染色质率均明显高于对照组(P<0.01);分离组精子的正常形态率也显著高于对照组,且未受冷冻-解冻过程的影响(P>0.01);分离过程对精子密度也未产生显著影响(P>0.01)。【结论】实时精子分离系统可以显著改善猪冷冻精液的品质。     

湖羊精液稀释液及冷冻保护剂的筛选

试验旨在研究不同稀释液对湖羊精液的4℃保存效果,同时探讨不同种类及浓度的冷冻保护剂对湖羊精液冷冻保存效果的影响。选择6种常见的绵羊精液稀释液配方,检测湖羊精液稀释后精子活力变化,分析精子存活时间及生存指数;另选取6种常见的精子冷冻保护剂,分3组浓度(5%、10%、15%)添加,检测细管冻精解冻后的精子活率。结果表明,6种稀释液对湖羊精液的4℃保存效果存在显著差异,其中F稀释液保存效果最佳。冷冻保护剂的种类和添加比例对湖羊精液的冷冻保存效果都存在影响,稀释液中添加5%的丙三醇对湖羊精液的冷冻保存效果最佳。     

白萨福克羊细管冷冻精液试验

采用4种冷冻稀释液制作白萨福克羊细管冻精,结果表明,解冻后的精子活率以Tris卵黄组解冻后精子活率最高,与其他3组相比差异极显著(P<0.01),其中对照组(柠檬酸钠糖类)为生产中应用的配方;以Tris奶粉组解冻后精子活率最低,但与对照组和EDTA组相比差异不显著(P>0.05)。     

山羊精液冷冻保存技术研究

[目的]探索山羊精液的冷冻方法。[方法]以甘油为冷冻保护剂,采用细管法冷冻保存山羊精液,探讨甘油浓度和添加时间、冻结方法和解冻温度对山羊精液冷冻效果的影响。[结果]在稀释液中添加6%和7%甘油的处理组中,冻后精子活率与复苏率均显著高于添加3%、5%甘油的处理组。配液时添加6%甘油的处理组中冻后精子活率与复苏率均显著低于在4℃平衡后添加的处理组。把平衡的山羊精液分别在离液氮面3 cm处熏蒸9 min和-80℃冰箱中冻结9 min,前者的精子复苏率显著低于后者。在解冻温度分别为40、45和50℃的处理组中精子冻后活率与复苏率显著高于解冻温度为55和60℃的处理组,说明解冻温度以40～50℃为宜。[结论]在山羊精液冷冻保存中,甘油的最佳添加时间为4℃平衡后冻结前。     

十二烷基磺酸钠对山羊精液冷冻效果的影响

在山羊冷冻精液稀释液中添加浓度分别为0.05%、0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%的十二烷基磺酸钠(SDS),探讨SDS对山羊精液冷冻品质的影响。结果表明,在冷冻精液稀释液中添加SDS可显著提高山羊精子活率、顶体完整率和质膜完整率,添加量为0.10%时精子活率最高,为73.90%;添加量为0.20%时顶体完整率最高,为58.46%;添加量为0.10%时精膜完整率最高,达54.13%。随着SDS添加浓度的增加,冻后精子质量也随之改善,但添加量至0.20%时,冻后精子质量显著下降(P<0.01)。本次试验SDS的最佳添加量为0.10%。     

黑山羊精液冷冻稀释液配方的筛选

为筛选出提高黑山羊冷冻精液质量的最佳冷冻稀释液配方,试验分别用4个不同的稀释液配方,对15只湘东黑山羊进行精液的冷冻处理,通过观测平衡后精子活率、解冻后精子活力、顶体完整率、精子畸形率等几个特征性指标,可以看出稀释液配方Ⅳ效果最好,是用于黑山羊精液冷冻的最佳稀释液配方。其配方Ⅳ冷冻保存精液解冻后活力平均为0.3627、冻后顶体完整率为42.93%、精子畸形率为12.93%。     

添加V_(B_(12))、V_E、V_C对无角道塞特绵羊精液冷冻效果的影响

探讨在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加VB12、VE、VC对精子冷冻品质的影响。在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加不同质量浓度的VB12、VE、VC制作细管冻精,解冻后观察精子的成活率和顶体完整率等指标。结果显示,VB12添加0.003 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P0.05)和精子顶体完整率(P0.05);VE添加2.5 g/L时,能够极显著提高解冻后的精子活率(P0.01)和顶体完整率(P0.01);VC的添加4.4 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P0.05),但对冷冻后精子的顶体完整率无影响。在稀释液中添加VB12、VE和VC能使解冻后精子品质得到提高。VE添加后能够极显著提高冷冻精子的顶体完整率,应该优先考虑添加。     

不同抗氧化剂对金华猪精液冷冻保存效果的影响

为了观察冷冻稀释液中添加不同浓度的抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)、绿茶多酚(GTPs)、维生素E(VE)和超氧化物歧化酶(SOD)对金华猪精液冷冻保存效果的影响,分别在冷冻稀释液中添加0.125、0.25、0.5 mmol.L-1的GSH,10、15、20 mmol.L-1的GTPs,1、2、4 mg.mL-1的VE和1 000、2 000、4 000 I U的SOD,采集活率较高的金华猪精液,用上述含抗氧化剂的冷冻稀释液稀释后进行冷冻保存,分别检测4个处理组精子4℃平衡后的活率和解冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率。结果表明,在金华猪精液的冷冻稀释液中分别添加15 mmol.L-1GTPs、2 mg.mL-1VE、4 000 I U SOD可显著提高猪精子4℃平衡后的活率、解冻后精子活率和质膜完整率(P0.05)。     

6种鸡精液冷冻稀释液以及冻后保存条件比较

为探究不同稀释液对鸡精液冷冻保存效果的影响,选择LR、Lake’s、BPSE、Modified Sasaki、Beltsville和Nabi共6种稀释液对霞烟鸡精液进行冷冻,解冻后分别在37或4 ℃条件下短时间保存,分析不同冷冻稀释液和保存条件对精子活率、活力、功能完整性和抗氧化指标的影响。结果表明,6种稀释液中Lake’s稀释液的冻后活率、活力和顶体完整性最高,分别为48.20%、45.70%和45.26%;LR稀释液虽然获得了48.16%的冻后活率,但其活力显著低于Lake’s稀释液。解冻后4 ℃保存更适合鸡精子的短时间保存,Lake’s和Nabi稀释液在4 ℃条件下保存45 min后活力仍达30 %以上。虽然Nabi稀释液解冻初始时的精子活率和活力低于LR和Lake’s稀释液,但随着保存时间的延长,其冻后精子存活能力表现最佳。随着冻后保存时间的延长,LR、Lake’s和Nabi稀释液冻后精子的线粒体活性、质膜完整性和抗氧化能力均呈现下降趋势,且37 ℃保存时下降更为明显,同时LR稀释液在这些指标上表现出较差的耐受性。综上所述,Lake’s和Nabi冷冻稀释液对鸡精子冷冻保存的效果最佳;解冻后4 ℃保存可延长冻精的体外存活时间;LR稀释液虽获得了较高的冻后活率,但其活力和冻后耐保存性能较差。     

大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素对山羊冻精效果的影响#br#

为研究大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素（proanthocyanidin，PC）对山羊精子的冷冻保护作用，以20％卵黄为对照（EY组），分别在大豆卵磷脂为基础稀释液的冻精稀释液中添加最终浓度为0、10、20、40、60 μg·mL-1的PC（分别命名为SL0、SL1、SL2、SL3、SL4组），冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、抗氧化和凋亡指标进行检测。结果表明，当大豆卵磷脂稀释液中PC添加浓度为40 μg·mL-1（SL3组）时，解冻后精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高，分别达58.49%、53.45%、50.46%、55.37%和55.16%，显著高于其他PC添加组和EY组（P<0.05）。SL3组解冻后精子的超氧化物歧化酶（SOD）（224.87 U·mL^-1）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量（129.6 U·L^-1）最高，总caspase凋亡率（54.33%）和TUNEL凋亡率（41.36%）最低，与EY和SL0组差异显著（P<0.05）。当PC的添加浓度提高至60 μg·mL^-1（SL4组）时，解冻后精子质量显著下降，表现为对精子毒性作用。综上，在山羊精液冷冻中，大豆卵磷脂稀释液中添加PC浓度为40 μg·mL^-1可降低精子氧化损伤和细胞凋亡，提高冻精品质。该研究改善了无动物源稀释液在山羊精液冷冻中的应用效果，提高了山羊冻精的生物安全性和应用前景     

波尔山羊个体精子抗冻性研究

为了加速贵州省地方山羊品种改良,2000年9月试验采用常规的精液冷冻解冻方法,通过鲜精活力、畸形率、冻精活力、解冻后4 h存活指数、顶体完整率、谷草转氨酶(GOT)释放量等指标研究了3只波尔山羊精子的抗冻性,结果3只试验公羊精子抗冻性存在明显差异,968号公羊生存指数显著高于2022和098号(P<0.05),098号公羊谷草转氨酶释放量显著低于2022和968号(P<0.05),但其鲜精品质全部达到常规制作冻精的要求,配种试验,65.77 %(146/222)的受胎率也验证了3只公羊适宜制作冻精。     

猪精子冷冻技术的研究

 采用手握法采集健康成年的长白公猪猪精子，室温离心后，采用液氮熏蒸法细管冷冻猪精子。以精子活力为判定指标，比较了平衡时间和甘油浓度对猪精子冷冻的影响。结果表明:(1)Ⅱ组精子冷冻复苏后精子活力（35.83±5.38）%要高于其他组（P＜0.05）；(2)Ⅰ组和Ⅱ组冷冻复苏精子的活力［（29.75±4.38）%，（28.40±8.55）%］要高于其他组（P＜0.05），由此得出最佳平衡时间和甘油浓度。     

超低温保存对藏獒犬精子质量及超微结构的研究(英文)

[目的]该研究旨在观察超低温保存对藏獒犬精子质量及超微结构的影响。[方法]通过精子运动度、膜完整率及顶体完整率评价4种冷冻保护剂、冷冻时距液氮面3种不同高度及添加物(SDS和Vc)对精子超低温冷冻效果的影响;在此基础上,在扫描电镜和透射电镜下观察超低温冷冻对精子超微结构的影响。[结果]试验1表明,EG作为冷冻保护剂获得了最好的冷冻效果,解冻后精子运动度、膜完整率及顶体完整率分别为36.3%、38.0%和42.0%。但EG和甘油作为冷冻保护剂并无显著差异存在(P>0.05)。试验2表明,距离液氮面5cm冷冻时冷冻效果最好。但除顶体完整率外,冷冻高度2和5cm间不存在显著差异(P>0.05)。试验3表明,稀释液中单独或共同添加十二烷基磺酸钠(SDS)和维生素C(Vc)均能改善精子冷冻-解冻效果。单独添加SDS或Vc时,除单独添加Vc组表现精子冷冻-解冻后运动度更低外(P<0.05),其它指标并无显著差异存在(P>0.05)。共同添加SDS和Vc时,精子冷冻效果最好,精子解冻后运动度、膜完整率和顶体完整率分别为44.1%、48.0%和48.2%。超微结构显示超低温保存引起藏獒犬精子不同程度的损伤,顶体损伤更严重,如顶体肿胀、囊泡化,甚至顶体消失。[结论]冷冻保护剂EG、距液氮面5cm高度及共同添加SDS和Vc可提高精子超低温保存效果,但超低温对精子超微结构仍具有一定损伤作用。     

双糖对冻融后猪精子质量的影响

在传统的Tris—柠檬酸—葡萄糖(TCG)稀释液基础上,分别添加0.1 mol/L乳糖、蔗糖、海藻糖,并采用细管法对精液进行冷冻,研究不同双糖对冻融后猪精液质量的影响。结果表明:0.1 mol/L的海藻糖和蔗糖相对于对照组和0.1 mol/L的乳糖TCG稀释液能够显著改善冻融后猪精子质量,其冻融后精子的活率、顶体完整率、低渗膨胀率、平均路径速度、运动线速度、平均侧摆幅度和平均鞭打频率均明显提高(P0.05),分别达到42.14%和40.56%,51.48%和49.84%,46.20%和43.01%,32.8μm/s和33.2μm/s,60.80%和59.00%,1.70μm和1.62μm,7.68 Hz和7.62 Hz。TCG稀释液中添加0.1 mol/L海藻糖和蔗糖的猪冷冻精液体外受精的受精能力明显高于0.1 mol/L乳糖组和对照组,其卵裂率分别为41%和38%。     

猪精液0.5 ml细管快速冷冻和解冻方法的优化

 【目的】优化冷冻-解冻方法，提高0.5 ml细管快速冷冻保存猪精液的质量。【方法】冷冻方法：分别将细管水平置于液氮面上方3、5、7、9和11 cm处，每一水平位置细管分别熏蒸3、5、10、15和20 min后投入液氮保存，37℃×30 s水浴解冻，确定最优冷冻方法;在选择最优冷冻方法的基础上，分别采用37℃×30s(对照组)、42℃×25 s、47℃×20 s、52℃×15 s、57℃×10 s和62℃×5 s共6种方法水浴解冻，确定最佳解冻方法。【结果】采用3 cm×10 min冷冻方法，解冻0、8 h精液中精子活率、质膜完整率和顶体完整率均最高。采用相对“高温短时”解冻，精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体膜电位均较高，同时丙二醛浓度降低;57℃×10 s和62℃×5 s解冻的精子各项指标无显著差异（P＞0.05），但前4项指标显著高于对照组（P＜0.05），丙二醛浓度显著降低（P＜0.05）。【结论】优化猪精液0.5 ml细管快速冷冻的冷冻和解冻方法可以显著提高解冻质量，采用3 cm×10 min冷冻、57℃×10 s或62℃×5 s解冻方法效果最佳。     

德国牧羊犬精液冷冻保存的研究

以德国牧羊犬为实验动物,用两种不同的冷冻方法和剂型对犬的精液进行冷冻,以冻精解冻后的活率作为评定指标,提高犬精液利用效率和扩大犬精液的使用范围。采集4条公犬的精液40次,分别在四种稀释液中稀释,冷冻成两种剂型,根据冻后活率比较优劣。结果表明,稀释液2颗粒冻精的冻后活率显著高于稀释液1、稀释液3和稀释液4(P0.05);对犬的精液进行炸熏法和程序冷冻法冷冻,炸熏法冷冻的精液冻后活率均显著高于程序冷冻法冷冻的精液(P0.05)。