甜茶总多酚的纯化及其抗氧化活性

为提高甜茶的综合利用价值,从提取甜茶甙废液中回收甜茶多酚并采用大孔树脂纯化的方法研究甜茶总多酚的纯化工艺条件;采用紫外分光光度法对甜茶多酚含量及其抗氧化活性进行测定。结果表明:所筛选的HPD826树脂为甜茶总多酚纯化的最佳树脂;当上样液的浓度为3.65mg/mL、上柱液体积为50mL、流速为1BV/h时,吸附率为94.25%,用30%的乙醇解吸后其甜茶总多酚的纯度可达56.68%;纯化过的甜茶总多酚对·OH和DPPH·自由基均有较好的清除作用,其IC50值分别为517.9μg/mL和45.9μg/mL。     

瓜蒌皮多酚纯化工艺及抗氧化活性

以瓜蒌皮为研究对象,采用大孔吸附树脂法纯化瓜蒌皮中的多酚类化合物,对纯化工艺参数进行筛选,对纯化产物的抗氧化活性进行检测。结果表明:AB–8大孔吸附树脂对瓜蒌皮多酚具有良好的吸附和解吸性能,最佳吸附工艺参数为提取液中多酚质量浓度0.60 mg/mL,料液pH值3.0,上样流速2 BV/h,上样体积4 BV;最佳洗脱工艺参数为洗脱液乙醇的体积分数60%,体积6 BV,洗脱流速2 BV/h;纯化后产品中多酚的含量达49.52%,较纯化前提高57倍;瓜蒌皮多酚纯化前后对DPPH+自由基清除作用的IC50分别为2.01mg/mL和0.53mg/mL,对ABTS+自由基清除作用的IC50分别为0.62 mg/mL和0.13 mg/mL,纯化后抗氧化活性增强了4～5倍。     

胭脂李多酚纯化工艺及其黄嘌呤氧化酶抑制活性

比较4种不同极性大孔树脂对胭脂李果实多酚的静态吸附和解吸性能,筛选最佳纯化树脂;优化动态吸附与解吸条件参数,分析纯化前后多酚的黄嘌呤氧化酶抑制活性。结果表明:最佳纯化大孔树脂为HP-20,其静态吸附6h达到饱和,静态解吸2h后基本达到平衡;动态纯化最佳工艺条件为上样浓度1.0mg·mL~(-1),上样速度2.0mL·min~(-1),80%乙醇溶液作为洗脱剂,洗脱流速2.0 mL·min~(-1);纯化后胭脂李多酚纯度由25.47%提高至74.89%,黄嘌呤氧化酶抑制活性IC50从179.21μg·mL~(-1)降到72.35μg·mL~(-1),黄嘌呤氧化酶抑制活性提高了2.47倍。     

基于体外酪氨酸酶抑制活性的枇杷花醇提纯化工艺优化及活性成分初步鉴定

为了探究枇杷花的美白功效及其功能因子,以酪氨酸酶活性抑制率为指标,通过单因素和正交实验对枇杷花具有抑制酪氨酸酶活性的物质的醇提工艺进行了优化;通过静态吸附-解析和动态吸附-洗脱实验分别确定D101大孔树脂纯化工艺中吸附-解析平衡时间和最佳纯化工艺;对纯化物进行HPLC-MS分析,初步鉴定出主要化合物。结果表明,最佳的提取工艺为在料液比(m∶V)1∶20、50℃和50%乙醇体积分数条件下,进行重复3次,每次1 h,提取枇杷干花具有抑制酪氨酸酶活性的物质,粗提物得率为30.01%;D101树脂对粗提物的最佳吸附平衡时间为4.5 h,解析平衡时间为3.5 h;最佳纯化工艺为：上样浓度40 mg·mL^-1,上样流速3 BV·h^-1,洗脱剂为60%乙醇体积分数,洗脱速度4 BV·h^-1,纯化物得率为4.39%;纯化物中共鉴定出137种成分,分为黄酮类物质、肉桂酸及其衍生物、苯及其衍生物等26个大类。对比中外文献报道,筛选出槲皮素、异鼠李素、对香豆酸等12种具有酪氨酸酶抑制活性的化合物。本研究为枇杷花在美白方面的应用提供理论基础。     

桑尺蠖多酚氧化酶的分离纯化

多酚氧化酶是昆虫初生新表皮硬化过程中的关键酶。为了研究桑尺蠖(Phthonandria atrineata)多酚氧化酶的功能与性质,探讨了桑尺蠖多酚氧化酶的分离纯化方法。以桑尺蠖五龄幼虫为材料,用磷酸盐缓冲液提取多酚氧化酶粗提液,再经80%饱和度硫酸铵沉淀、透析及SephadexG-100凝胶过滤进一步分离纯化,得到了部分纯化的多酚氧化酶,其酶纯化倍数为6.28倍,酶得率为3.34%,酶比活力为812.8 U/mg。     

超声波技术对地榆根中多酚的提取及稳定性测定

应用超声波技术对地榆根中多酚的提取及稳定性研究,并将超声波提取和传统提取方法进行比较。研究表明超声波提取的最佳工艺条件为:以体积分数60%的乙醇作为溶剂,在超声功率为400W、料液比1∶14、原料粒度为60～80目、超声浸提3次,每次20min,多酚的提取率可达到11.71%,超声波法提取比传统法的提取率高出37.28%;对地榆提取物稳定性研究结果表明:地榆提取物适合弱酸或中性条件下使用;对光热稳定性较差,并具有很强的抗紫外线能力,氧化剂对地榆提取物稳定性影响较大,还原剂对地榆提取物影响不大,其他添加剂对其稳定性几乎没有影响。通过UV和FTIR光谱分析,超声波浸提没有使地榆根中有效成分的结构发生改变。     

乌贼墨中多酚氧化酶的分离及纯化

用pH7.2磷酸提取缓冲液从乌贼墨汁澡提取多酚氧化酶，提取的粗酶液经30%-80%饱和度硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-SepharoseCL-6B柱层析和SephadexG-150柱层析后，得到纯化的多酚氧化酶，纯化们数为10.78，纯化后的酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳，分别采用银染色和多酚氧化酶活性染色均显示一条电泳带。     

乌贼墨中多酚氧化酶的分离及纯化

用pH7.2磷酸提取缓冲液从乌贼墨汁澡提取多酚氧化酶，提取的粗酶液经30%-80%饱和度硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-SepharoseCL-6B柱层析和SephadexG-150柱层析后，得到纯化的多酚氧化酶，纯化们数为10.78，纯化后的酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳，分别采用银染色和多酚氧化酶活性染色均显示一条电泳带。     

高温和强光对蛹虫草子实体成分和酪氨酸酶抑制活性的影响

以蛹虫草子实体为研究对象,研究高温和强光对蛹虫草培养后期子实体中多糖、核苷含量和酪氨酸酶抑制活性的影响。结果表明,在蛹虫草子实体培养后期,提高温度和增加光照强度,可显著提高蛹虫草子实体多糖、尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、腺苷和虫草素等核苷类物质的含量(P0.05),尤其是多糖、腺苷和虫草素的含量较常规培养子实体分别提高0.77、1.76倍和3.58倍。另外发现经过高温和强光胁迫蛹虫草子实体抑制酪氨酸酶活性也有所增强,并且从子实体甲醇提取物中分离到酪氨酸酶抑制活性纯品物质,结果显示该物质对单酚酶活性的IC50为27.8386μg·m L~(-1),二酚酶活性的IC50为38.1432μg·m L~(-1)。     

香樟(Cinnamomum camphora)果实酪氨酸酶的分离纯化及特性分析

[目的]检测并分离香樟果实中的酪氨酸酶。[方法]从香樟成熟果实中分离和纯化出酪氨酸酶,研究该酶的酶活、蛋白质含量、最适pH值、最适温度、动力学特性和稳定性,并分析了不同金属离子、化合物和中药对其酶活的影响。[结果]经分离和纯化,获得43 kD的酪氨酸酶。该酶的最适pH值和最适温度分别为7.5和50℃。以L-DOPA为底物,测得Km和Vmax分别为12.83 mmol/L和180.65U/mg。该酶在pH值4~7和较高温度时均较为稳定。Al3+和Cu2+对该酶活性具有抑制作用,而Zn2+、Mg2+等则有激活作用。250mmol/LEDTA对该酶有激活作用,抗坏血酸和1 mmol/Lβ-巯基乙醇有完全抑制作用。中药女贞对其有强激活作用,乌梅对其抑制作用最明显。[结论]香樟果实中酪氨酸酶同工酶的存在为该酶的纯化带来一定难度。     

无患子总皂苷提取工艺优化及其对酪氨酸酶的抑制活性

为了探究无患子总皂苷提取、富集工艺及其对酪氨酸酶的活性抑制,通过正交试验法优化无患子总皂苷提取工艺,将提取液浓度、提取时间和料液比作为考察因素,以无患子总皂苷含量作为评价指标,筛选无患子总皂苷最佳提取工艺。无患子提取物纯化后,对各组分体外酪氨酸酶活性抑制作用进行考察,评价其美白效果。研究结果表明,无患子总皂苷优化后的提取工艺为:以60%乙醇为提取溶剂,料液比1 g∶30 mL,提取时间1.5 h。经D101大孔树脂70%乙醇富集后的无患子提取物Y-3(70%乙醇)体外酪氨酸酶抑制活性较强,纯化效率较高,与同浓度阳性对照熊果苷抑制活性相接近。综上,经试验优化所得提取、纯化工艺稳定可靠,按此方法提取的无患子总皂苷提取物再经进一步纯化富集后有更好的酪氨酸酶抑制作用和更好的美白效果。     

茶树多酚氧化酶同工酶的分离纯化

以龙井43号茶树鲜叶为材料,通过硫酸铵分级沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析等方法对茶树多酚氧化酶同工酶进行分离纯化,最终分离出1个单一同工酶(PPO V),该同工酶亚基大小约为80ku。     

肥城桃多酚氧化酶的部分纯化及其特性

经（ＮＨ４）２ＳＯ４分级沉淀、透析等步骤，使肥城桃多酚氧化酶部分纯化，纯化倍数为５．１１倍。该酶对邻苯二酚、焦Ｐｅｉ酚和ＤＬ－二羟基苯丙氨酸显示活性，其中焦Ｐｅｉ酚是最佳底物。这种多酚氧化酶的最适ＰＨ值为６．８，在３５℃下放置３０ｍｉｎ基活性不会降低。     

藤椒冷榨油饼粕中多酚的纯化及体外抗氧化活性

为对藤椒果皮的冷榨油饼粕(以下简称饼粕)中多酚类物质进行分离纯化,并研究其体外抗氧化活性,通过正交试验设计得到微波辅助提取饼粕多酚的最佳工艺条件为:料液比1∶25,微波处理360s,乙醇φ=50%,微波功率400W,提取温度60℃,在此条件下的多酚得率为6.83mg/g;进一步优化多酚纯化工艺得到条件是采用AB-8树脂填料柱色谱,将质量浓度为1.50mg/mL,pH 4的样品以1.00mL/min的流速上样,吸附平衡1h,用φ=60%乙醇以1.00mL/min的流速进行洗脱,最终饼粕多酚的纯度由35.70%提高到76.30%。采用典型体外抗氧化体系对比分析饼粕多酚、藤椒多酚和2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)的体外抗氧化活性表明,饼粕多酚和藤椒多酚在还原力(较低质量浓度下)和清除超氧阴离子自由基(O-2·)能力的表现上优于BHT,但在清除2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS+·)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)能力的表现上相对较弱。藤椒冷榨油饼粕中含有一定量的多酚类物质,具有一定的抗氧化活性及开发潜力。     

鸭梨果肉多酚氧化酶的活性研究与纯化

对鸭梨(Pyrus bretschneideri Rehd.)果肉多酚氧化酶的活性进行研究并对其进行纯化。以鸭梨果肉为试材,采用邻苯二酚为底物测定氧化产物的方法,就pH值、温度、热稳定性、抑制剂、不同成熟期及果肉不同部位等因素对PPO活性的影响进行了研究;酶粗提液经30%硫酸铵沉淀去杂和80%饱和度硫酸铵析出、Sephadex G200柱层析及HiPrepTM16/10 QXL离子柱层析等步骤进行了纯化,经SDS-PAGE进行了验证。结果表明:鸭梨果肉中的PPO最适pH值为6.4;最适温度为25℃;20～25℃时热稳定性较高;不同成熟期的活性不同;34 mmol/L的NaCl为较好的抑制剂;果肉近果心处活性最高,中部活性最低。经纯化,获得均一的PPO,分子量约43 kD。为鸭梨果肉PPO的性质研究以及控制梨果PPO酶促褐变提供了依据。     

大孔树脂纯化金银花总黄酮及其对α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究

为进一步开发和利用金银花资源,筛选出降血糖的活性成分,比较了五种大孔树脂对金银花总黄酮的静态吸附-解吸性能,优选出NKA-2大孔树脂,并对其动态的纯化工艺条件进行探讨;采用不同极性有机溶剂对NKA-2大孔树脂纯化后的金银花总黄酮进行萃取,测定了各相萃取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明:NKA-2大孔树脂优化的动态工艺参数为上样液质量浓度1.12 mg/m L、上样液体积50 m L、上样流速3 BV/h、洗脱剂乙醇体积分数70%、洗脱液体积160 m L、洗脱流速3 BV/h;在此优化条件下,金银花总黄酮的平均纯度和平均得率分别达到86.3%和5.12%;金银花总黄酮各相萃取物质量浓度与α-葡萄糖苷酶的抑制率具有正相关性,但是在相同质量浓度下,乙酸乙酯相萃取物对α-葡萄糖苷酶具有最强的抑制率。经过NKA-2大孔树脂纯化后的金银花总黄酮,其乙酸乙酯相萃取物具有良好的药用开发价值。     

甘薯叶多酚氧化酶的分离纯化和部分性质研究

经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,从甘薯叶中得到多酚氧化酶(PPO)电泳纯制品.酶比活力为50 075.43 U/mg,纯化倍数为597.99,回收率为0.48%,相对分子质量约为6.44×104,最适pH值为6.5,最适温度为35℃,且在25～55℃内较稳定.有机溶剂甲醇、乙醇、异丙醇对多酚氧化酶均有一定抑制作用,其抑制作用由强到弱顺序为异丙醇、乙醇、甲醇.低浓度的抗坏血酸和亚硫酸钠对多酚氧化酶有强烈的抑制作用,柠檬酸次之,EDTA-2Na的抑制效果较弱.     

笼目海带多酚的分离纯化及其抗氧化活性研究

为高效分离纯化笼目海带Kjellmaniella crassifolia Miyabe多酚及其抗氧化活性,采用大孔树脂对笼目海带多酚进行分离纯化,经静态吸附解吸和动态洗脱试验,确定最适分离条件,并通过测定分离组分对DPPH自由基、羟基自由基(·OH)的清除能力、铁离子还原力(FRAP)、氧自由基吸收能力(ORAC),评价其体外抗氧化活性。结果表明:大孔树脂XDA-1为最适分离树脂,其分离最适条件为15 mg/mL的样液以1 mL/min的流速进样100 mL,用70%乙醇洗脱200 mL(2 BV),在此条件下得到两个分离组分P1、P2,其多酚含量分别为粗多酚的15.7倍和3.7倍;通过对各组分的DPPH自由基清除能力、·OH清除能力及FRAP、ORAC值测定发现,笼目海带多酚各组分均有较强的抗氧化活性,其中P2组分表现出较高的抗氧化活性,与多酚其他组分相比,其·OH清除能力、FRAP值和ORAC值具有显著性差异(P<0.05),而P1组分对DPPH自由基具有较好的清除能力,且显著优于粗多酚及P2组(P<0.05)。研究表明,经XDA-1树脂分离纯化的笼目海带多酚均具有较强的抗氧化活性,是天然抗氧化剂的良好来源。     

甘薯叶多酚氧化酶的分离纯化和部分性质研究

经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,从甘薯叶中得到多酚氧化酶(PPO)电泳纯制品.酶比活力为50 075.43 U/mg,纯化倍数为597.99,回收率为0.48%,相对分子质量约为6.44×104,最适pH值为6.5,最适温度为35℃,且在25~55℃内较稳定.有机溶剂甲醇、乙醇、异丙醇对多酚氧化酶均有一定抑制作用,其抑制作用由强到弱顺序为异丙醇、乙醇、甲醇.低浓度的抗坏血酸和亚硫酸钠对多酚氧化酶有强烈的抑制作用,柠檬酸次之,EDTA-2Na的抑制效果较弱.     

大孔树脂分离纯化槟榔花多酚研究

采用大孔吸附树脂对槟榔花多酚进行分离纯化,确定其分离纯化条件。通过静态吸附试验和动态 吸附解吸试验,考察AB-8、SP700、SP850、XAD-7HP、D101 和HP2MG 等6 种型号树脂对槟榔花多酚的吸附 量和解吸率,筛选出吸附效果最好的树脂,并得出最佳的吸附条件。结果表明,AB-8 树脂的吸附和解吸效果 最好,可以用准二级动力学方程较好地描述AB-8 树脂对槟榔花多酚的吸附。最佳的分离纯化条件为：槟榔花 多酚粗提液pH 为4,上样初始浓度为0.4 mg/mL,洗脱剂乙醇浓度为60%,上样流速和洗脱流速均为3 BV/h。 AB-8 型大孔树脂在所确定的工艺条件下,树脂的吸附—解吸附性能稳定,且能较好地分离纯化槟榔花多酚,多 酚纯度在纯化前为2.7%、纯化后为34.6%。