菠萝蛋白酶降解壳聚糖条件的研究

[目的]为菠萝蛋白酶降解壳聚糖制备壳寡糖提供工艺参数和科学依据。[方法]用DNS比色法测定还原糖的含量,探讨不同条件对菠萝蛋白酶降解壳聚糖的影响。用端基分析法测定壳寡糖的分子量,研究菠萝蛋白酶降解壳聚糖过程中壳聚糖分子量的变化。[结果]菠萝蛋白酶降解壳聚糖的最适pH为7.1,最适温度为53℃,最适酶浓度为0.30 g/L。在最适条件下,降解反应进行6 h以上,可以得到平均聚合度为8,平均分子量为1 306的壳寡糖。[结论]菠萝蛋白酶能有效降解壳聚糖,制备壳寡糖。     

温度和pH对黄金鲈消化酶活力的影响

【目的】研究温度和pH对黄金鲈消化酶活力的影响。【方法】采用酶学分析方法,研究不同温度和pH对黄金鲈蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活力的影响。其中,蛋白酶采用福林-酚法测定,淀粉酶和脂肪酶分别采用淀粉酶试剂盒和脂肪酶试剂盒测定。【结果】在设定的温度和pH范围内,黄金鲈各组织器官消化酶的活力均随着温度和pH的升高呈先升高后下降的变化趋势。其中,胃和肝脏蛋白酶的最适温度为40℃,前肠、中肠和幽门盲囊蛋白酶的最适温度均为50℃;胃、中肠、肝脏淀粉酶的最适温度均为35℃,前肠和幽门盲囊的淀粉酶最适温度为30℃;各组织器官脂肪酶活力最适温度均为40℃。黄金鲈胃、幽门盲囊、前肠、中肠和肝脏蛋白酶的最适pH分别为2.5,8.0,9.0,9.0和6.0,淀粉酶的最适pH分别为6.0,6.0,7.0,7.0和6.0,脂肪酶的最适pH分别为6.0,7.0,7.0,7.0和7.0。黄金鲈不同组织器官的消化酶活力不同。在最适温度下,不同组织器官蛋白酶活力顺序为幽门盲囊前肠胃中肠肝脏,淀粉酶的活力顺序为肝脏前肠中肠幽门盲囊胃,脂肪酶的活力顺序为肝脏胃前肠幽门盲囊中肠。【结论】黄金鲈消化酶活力的最适温度均高于其生长的最适水温。胃蛋白酶在强酸性时活力较高,肝脏蛋白酶活力在偏酸性条件下较高,肠道和幽门盲囊蛋白酶活力在偏碱性时较高;淀粉酶活力在中性偏酸性时较高;脂肪酶在中性时活力较高。     

蛋白酶产生菌的化学诱变及酶学性质

对1株产蛋白酶的枯草芽胞杆菌(Z5)进行化学诱变,筛选得到1株产较高酶活性、大分子质量蛋白酶的菌株。检测该蛋白酶对底物明胶的分解能力,发现该蛋白酶的分子质量约为100 ku,还原剂巯基乙醇对其活性的影响较大。在不同温度、不同pH值处理该蛋白酶后,用茚三酮法测定酶活性,发现该蛋白酶催化反应的最适pH为6,最适温度为50℃,并且该蛋白酶有较好的热稳定性,70℃处理10 min仍能保留50%左右的酶活性。由于此蛋白酶在分子质量及最适pH方面均不同于已报道过的枯草芽胞杆菌蛋白酶,推测其为一种新型的蛋白酶。     

产蛋白酶海洋细菌的筛选及产酶工艺优化

[目的]筛选产蛋白酶的海洋细菌资源。[方法]分别采用2216E培养基和酪蛋白固体培养基,对采自宁波洋沙山和象山海域的海水进行微生物的分离与纯化,采用平板透明圈法初筛和酶活力测定法复筛,采用16S r DNA序列分析进行菌株鉴定,并进行产酶工艺优化研究。[结果]纯化出15株产蛋白酶海洋细菌,从中筛选出1株产蛋白酶活力最高的菌株PB02,经鉴定为交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)。该菌株最适培养温度为20℃,最适装液量为10%,最适接种量为0.5%,最适转速为100 r/min,最适培养基pH为7。酶促反应最适温度为40℃,最适pH为10。[结论]该研究为蛋白酶高产菌株的改造和定向进化奠定了资源基础。     

中华鳖消化组织蛋白酶的初步研究

以酪蛋白为底物测定了中华鳖胰脏、胃、肠等组织蛋白酶活性、最适ｐＨ和最适底物浓度。结果表明：胃、胰组织蛋白酶活性显著高于肠组织蛋白酶活性，且胃＞胰＞前肠＞中肠＞后肠；胃、胰和肠组织蛋白酶最适ｐＨ分别为２．２、６．２、７．６；胃、前肠组织蛋白酶最适底物浓度分别为１．２％、０．８％。     

响应面法优化酶法提取麦麸膳食纤维工艺

研究了酶法提取麦麸膳食纤维工艺.通过氨基态氮含量筛选了最适蛋白酶;可溶性糖含量分析了混合酶配比,最适pH和温度.然后以膳食纤维的持水性、得率为响应值,采用响应面法优化酶法提取麦麸膳食纤维的工艺.结果表明:木瓜蛋白酶为该工艺的最适蛋白酶;混合酶中α-淀粉酶与糖化酶质量最佳比值为1∶3,混合酶最适pH值为3.6,最适温度为45℃;响应面法优化工艺参数为蛋白酶用量0.4%,蛋白酶反应时间60 min,混合酶用量0.5%;混合酶反应时间30 min,持水性达到8.87714 g·g-1,得率达到71.6985%.     

温度和pH对澳洲宝石鱼消化酶活性的影响

通过改变酶反应温度和pH,分析了澳洲宝石鱼Scortum barcoo淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性的变化。结果表明,澳洲宝石鱼肝胰脏、肠道、胃淀粉酶的最适pH均为6.2;肝胰脏、肠道蛋白酶的最适pH分别为7.5、7.0~7.5,胃蛋白酶的最适pH为2.0。说明淀粉酶在中性偏酸性时活性最高,肝胰脏、肠道蛋白酶在中性偏碱性时活性最高,而胃蛋白酶在强酸性时活性最高。肝胰脏、肠道、胃的淀粉酶的最适温度均为30℃,脂肪酶的最适温度分别为40、35、35℃,蛋白酶的最适温度分别为50、50、40℃。在一定温度和pH范围内,3种消化酶的活力均呈先上升后下降的趋势,并在各自最适的温度下,3种消化酶比活力的大小均为肠道>胃>肝胰脏。     

温度和pH对公子小丑鱼幼鱼消化酶活性的影响

研究了温度和pH 对人工养殖下的公子小丑鱼（Amphiprion ocellaris）幼鱼的胃、肝脏、肠道中蛋白酶、淀 粉酶、脂肪酶活性的影响,并对各部位消化酶活性进行比较。结果表明,在胃、肝脏、肠道中均可以检测出蛋白酶、淀 粉酶、脂肪酶的活性,其中蛋白酶活性顺序为胃跃肠道跃肝脏,淀粉酶活性顺序为肠道跃肝脏跃胃,脂肪酶活性顺序为肠 道跃肝脏跃胃。胃、肝脏、前肠、中肠、后肠蛋白酶的最适pH 值分别为2.2、7.5、7.0、7.0 和8.0;淀粉酶肝脏的最适pH 值 为6.0,其余部位均为7.0;脂肪酶肝脏的最适pH 值为7.0,其余部位均为7.5。胃、肝脏、肠道的蛋白酶最适温度均为 40益;胃淀粉酶最适温度为40益,肝淀粉酶最适温度为35益,肠道淀粉酶最适温度为30益;胃、肝脏、肠道的脂肪酶的 最适温度均为40益。     

栉孔扇贝蛋白酶和淀粉酶活力的初步研究

研究了栉孔扇贝两种主要消化酶－－蛋白酶和淀粉酶与温度和ｐｈ值的关系，结果表明，在４．８℃与７５℃之间蛋白酶的最适温度为６０℃，在５℃与６０℃之间淀粉酶的最适温度为２５℃，蛋白酶的最适ｐＨ值有两个，分别是２．６１和７．７７，淀粉酶的最适ｐＨ值为６．５。栉孔扇贝蛋白酶和淀粉酶的活性与酶本身的性质及栉孔扇贝的生理状态有关。     

亚细亚镰孢菌产碱性蛋白酶与致病力的相关性

选择了6个不同致病力的亚细亚镰孢菌菌株,提取纯化碱性蛋白酶,利用蛋白酶活性电泳的方法对其进行特性分析,研究其致病力与其产碱性蛋白酶的相互关系。亚细亚镰孢菌产生的碱性蛋白酶最适反应温度为30~40℃,最适反应pH值为7.5~8.5,属于丝氨酸蛋白酶类型。菌株致病力强弱与其产碱性蛋白酶活性呈极显著正相关。亚细亚镰孢菌产生的碱性蛋白酶可能与真菌的致病力有关。