MTT法测定8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721活性（摘要）

[目的]建立一套适合于实验室的高效、快速的体外抗肝癌活性物质筛选模型。[方法]首先,选用乙醇为溶剂对芸香草、半边莲、蜜蒙花、甘草、地榆、柴胡、旱芹和莪术8种中草药植物材料进行浸提。然后通过MTT法对8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721的活性进行初测。试验采用二甲基亚砜（DMSO）与甘氨酸-NaOH缓冲液作为溶剂,消除剩余培养基对吸光值的影响。为确保细胞株最大吸收峰位置不变,酶标仪采用570 nm波长测定OD值。为验证筛选出的3种物质对癌细胞的抑制作用,以活性物质浓度为横坐标,细胞生长抑制率为纵坐标,描绘肿瘤细胞生长曲线,倒置显微镜观察细胞不同阶段的生长状况。[结果]倒置显微镜下观察3种细胞阶段的形态：正常状态下,细胞的透明度大、折光性强、轮廓不清;当细胞受污染时,折光性变弱,胞质中常出现空泡、脂滴、颗粒样物质,细胞之间空隙加大,细胞变得不规则,失去原有特点;而受活性物质作用细胞尽管仍然贴壁,但其萎缩,边缘清晰化;三者之间存在一定区别。MTT法培养板定性检测显示,柴胡、莪术、甘草细胞培养孔内的液体颜色都较浅且比较均匀,可见,它们对细胞生长具有明显的抑制作用。而半边莲培养孔内液体颜色深浅不一。还有一些培养孔内液体颜色较深,如卤地菌、蜜蒙花、地榆和旱芹,表明它们对细胞生长没有明显的抑制作用。进一步定量计算表明,浓度为1.0～1.5 mg/ml的甘草乙醇浸提液（ESCG）、莪术乙醇浸提液（ESCC）和柴胡乙醇浸提液（ESCB）对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721有较强的抑制增殖作用,抑制率分别为51.6%、48.5%和52.9%。甘草、柴胡和莪术3种物质的抑制作用曲线结果也验证了它们对细胞生长有明显的抑制作用,并且抑制程度与浓度呈正相关。[结论]MTT法筛选可作为重要抗肿瘤的1个基本筛选模型。     

MTT法测定8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721活性

[目的]建立一套适合于实验室的高效、快速的体外抗肝癌活性物质筛选模型.[方法]首先,选用乙醇为溶剂对芸香草、半边莲、蜜蒙花、甘草、地榆、柴胡、旱芹和莪术8种中草药植物材料进行浸提.然后通过MTT法对8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721的活性进行仞测.试验采用二甲基亚砜(DMSO)与甘氨酸-NaOH缓冲液作为溶剂,消除剩余培养基对吸光值的影响.为确保细胞株最大吸收峰位置不变,酶标仪采用570 nm波长测定OD值.为验证筛选出的3种物质对癌细胞的抑制作用,以活性物质浓度为横坐标,细胞生长抑制率为纵坐标,描绘肿瘤细胞生长曲线,倒置显微镜观察细胞不同阶段的生长状况.[结果]倒置显微镜下观察3种细胞阶段的形态:正常状态下,细胞的透明度大、折光性强、轮廓不清;当细胞受污染时,折光性变弱,胞质中常出现空泡、脂滴、颗粒样物质,细胞之间空隙加大,细胞变得不规则,失去原有特点;而受活性物质作用细胞尽管仍然贴壁,但其萎缩,边缘清晰化;三者之间存在一定区别.MTT法培养板定性检测显示,柴胡、莪术、甘草细胞培养孔内的液体颜色都较浅且比较均匀,可见,它们对细胞生长具有明显的抑制作用.而半边莲培养孔内液体颜色深浅不一.还有一些培养孔内液体颜色较深,如卤地菌、蜜蒙花、地榆和旱芹,表明它们对细胞生长没有明显的抑制作用.进一步定量计算表明,浓度为1.0～1.5 mg/ml的甘草乙醇浸提液(ESCG)、莪术乙醇浸提液(ESCC)和柴胡乙醇浸提液(ESCB)对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721有较强的抑制增殖作用,抑制率分别为51.6%、48.5%和52.9%.甘草、柴胡和莪术3种物质的抑制作用曲线结果也验证了它们对细胞生长有明显的抑制作用,并且抑制程度与浓度呈正相关.[结论]MTT法筛选可作为重要抗肿瘤的1个基本筛选模型.     

长春花4种提取物肝癌细胞毒活性的研究

用溶剂萃取法对长春花地上部分的95%乙醇提取物进行分段处理,以肝癌细胞系SMMC-7721为筛选模型,利用MTT法测定各提取物的体外肿瘤细胞毒活性,对长春花的肝癌细胞毒活性部位进行了筛选。结果表明:长春花乙醇总提取物和正丁醇提取物对体外肝癌细胞表现出较强的抑制活性,石油醚提取物﹑乙酸乙酯提取物和水提取物则没有活性。说明正丁醇提取物部分是长春花体外肝癌细胞毒活性部位。     

茜草蒽醌对肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用

目的探讨茜草提取物蒽醌单体对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用.方法采用MTT法、形态学、集落形成法,检测蒽醌对人肝癌细胞增殖的抑制结果.结果MTT法显示各个浓度的蒽醌对肝癌SMMC-7721细胞的增殖均有抑制作用,呈现出与药物浓度、作用时间的依赖性;生长曲线由＂S＂型逐渐变得低平;倒置显微镜下可见药物组细胞数减少,间隙增大,细胞间出现＂接触性抑制＂;集落形成率降低（P〈0.01）,集落中细胞数减少.结论茜草蒽醌对人肝癌SMMC-7721细胞生长具有抑制作用;蒽醌有可能成为抗肝癌新药,为抗癌新药的开发提供理论与实验依据.     

钩枝藤提取物的生物活性

通过观察钩枝藤乙醇提取物治疗感染了伯氏疟原虫小鼠的感染率和存活率判断钩枝藤乙醇提取物的抗疟活性;采用MTT法测定钩枝藤乙醇提取物体外细胞毒活性;采用滤纸片琼脂扩散法测定钩枝藤乙醇提取物抗菌活性;采用Ellman比色法测试钩枝藤乙醇提取物抗乙酰胆碱酯酶活性。结果表明,该提取物能较好地抑制伯氏疟原虫的生长,改善小鼠的存活状况;对人白血病细胞K562、胃癌细胞SGC-7721、肝癌细胞BEL-7402均具有较好的抑制作用;对人体病原菌和农业病原菌表现出较强的抑菌活性;对乙酰胆碱酯酶表现出一定的抑制作用,但不如阳性对照他克林。     

白藜芦醇对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

[目的]探讨白藜芦醇对人肝癌细胞SMMC-7721体外生长的影响和作用机制。[方法]利用MTT法检测不同剂量组的白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,通过Hoechst染色和荧光显微镜观察肝癌细胞SMMC-7721细胞核的形态学变化,流式细胞仪测定各浓度组白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721作用的周期变化与凋亡分析。[结果]白藜芦醇对人体肝癌细胞SMMC-7721的增殖具有抑制作用,且有浓度和时间依赖性;在荧光显微镜下观察到典型的凋亡细胞形态特征;流式方法测定的结果显示,白藜芦醇阻滞肝癌细胞SMMC-7721于S期。[结论]白藜芦醇对人体肝癌细胞SMMC-7721生长具有抑制作用,使其细胞周期阻滞于S期并诱导其凋亡。     

北沙参水提法不同提取物体外抗肿瘤的研究

［目的］研究北沙参水提法不同提取物的体外抗肿瘤活性。［方法］采用MTT法观察北沙参水提法乙醇处理后3种不同提取物对肺癌细胞株（A549）、胃癌细胞株（SGC）、肝癌细胞株（HEP）的体外药理作用。［结果］北沙参水提后醇溶物、水提后醇沉物和水提后滤渣醇溶物的不同浓度在体外对肝癌细胞株（HEP）均具有一定的抑制作用,北沙参水提后醇溶物和水提后醇沉物各浓度间无显著差异,水提后滤渣醇溶物在300.000 μg/ml时抑制率显著高于其他浓度;对肺癌细胞株（A549）,绝大部分浓度具有一定的抑制作用,水提后醇溶物浓度为37.500μg/ml时,抑制率显著高于其他浓度,水提后醇沉物各浓度间无显著差异,水提后滤渣醇溶物浓度为75.000μg/ml和18.750μg/ml时,抑制率显著高于其他浓度 而对胃癌细胞株（SGC）,只有水提后滤渣醇溶物在300.000μg/ml时具有抑制作用,且抑制率仅为6.340%,其他均没有抑制作用。［结论］北沙参水提乙醇处理后的3种提取物对肺癌细胞株（A549）和肝癌细胞株（HEP）在体外均有一定的抑制作用,但对胃癌细胞株（SGC）几乎没有抑制作用。     

花生多酚的提取及抗氧化活性初步研究

采用乙醇溶液提取并对花生多酚提取工艺和体外抗氧化活性进行了研究。选择浸提料液比、乙醇浓度、时间、温度4个因素进行实验,再经过正交实验,确定了花生多酚粗提的最佳工艺为：浸提料液比1：15、乙醇浓度67%、浸提时间1.5h、水浴温度70℃。体外抗氧化活性研究表明,花生多酚对DPPH自由基和羟基自由基有一定的清除能力。     

豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素的体外联合抑瘤作用研究

［目的］研究豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素的降毒增效作用。方法］分别采用6种不同浓度的豆类丝核菌次级代谢产物（苦马豆素含量分别为10.00、5.00、2.50、1.25、0.62、0.31 μg/ml）处理人肝癌细胞HepG2,测量其IC50;然后用此代谢产物与2种不同浓度（60、6 μg/ml）阿霉素（ADR）联合处理HepG2,分析两者的增效作用。结果］豆类丝核菌次级代谢产物可抑制肝癌细胞HepG2生长,其对HepG2细胞作用72 h的IC50为1.25 μg/ml;ADR可显著抑制肝癌细胞HepG2生长,加入豆类丝核菌次级代谢产物后HepG2细胞的形态和存活率变化不大。结论］豆类丝核菌次级代谢产物与阿霉素体外联合不具有增效作用。     

铁椆抗运动性疲劳作用研究

［目的］研究铁椆抗运动性疲劳的作用。［方法］以容县铁椆果实为试材,干燥粉碎后,用浸提法提取其活性物质。将小鼠随机分为高剂量组、低剂量组、对照组,高、低剂量组灌胃铁椆果实含量分别为200、100 mg/ml的浸提液,对照组灌胃蒸馏水。连续灌胃21 d后,检测对比各组小鼠游泳力竭时间和运动后肝糖原含量、乳酸脱氢酶活性和尿素氮含量等,比较不同浓度提取物的抗运动性疲劳作用。 ［结果］与对照组小鼠相比,灌胃铁椆果实高、低剂量组的小鼠游泳力竭时间显著延长,肝糖原含量显著提高,乳酸脱氢酶含量显著降低;高、低剂量组之间也具有显著差异。［结论］铁椆果实中含有某些抗运动性疲劳物质,具有抗运动性疲劳的作用。     

不同林龄凹叶厚朴群落土壤有机碳与氮磷钾分布特征

[目的]阐明不同林龄凹叶厚朴群落土壤有机碳动态变化规律及其与氮磷钾的关系.[方法]以4年生、7年生、11年生凹叶厚朴群落为研究对象,分析土壤有机碳、全氮、全磷和全钾含量的变化规律.[结果]凹叶厚朴群落土壤有机碳、全氮和全磷含量均随林龄的增大而减小,而土壤全钾含量变化规律不明显.各群落土壤养分的大小排序为4年生凹叶厚朴7年生凹叶厚朴11年生凹叶厚朴.[结论]随林龄的增长,凹叶厚朴群落土壤有机碳和肥力水平降低,可对中高林龄的凹叶厚朴群落增施有机肥等提高土壤肥力水平.     

海枫藤花粉块的聚合方式

[目的]揭示海枫藤花粉块的聚合方式。[方法]以海风藤离体花粉块为材料,通过常规石蜡制片技术、花粉离体萌发及扫描电镜技术研究花粉块的聚合方式。[结果]海风藤的花由5个花萼和5个白色花瓣组成,每个花粉囊里有1个花粉块,花粉块中每个花粉母都有独立的花粉壁;扫描电镜观察结果显示,海风藤花粉粒长约100～180μm、宽约50μm,与单粒花粉粒的长与宽基本吻合;海枫藤花粉粒呈不规则形,外壁无明显饰纹,无萌发孔,花粉管从独立花粉上长出,未见到四合花粉。[结论]海枫藤花粉块是由单粒花粉聚合而成的。     

不同氮磷钾施肥水平对厚朴生长的影响

[目的]研究不同氮、磷、钾配比施肥对厚朴植物生长的影响。[方法]以优质厚朴植物为试材,通过田间试验和室内分析,采用氮、磷、钾不同配比施肥试验,对厚朴树高、胸径、氮磷钾含量等指标进行测定,分析施肥与厚朴植物的产量和品质的关系。[结果]氮磷钾肥不同施肥水平能增加树高11.3%~56.5%、增大胸径10.2%~48.4%,提高厚朴氮含量2.6%~22.2%、磷含量1.5%~10.4%、钾含量12.2%~40.0%。且各指标与氮磷钾间存在显著相关性。[结论]适宜的氮磷钾配比有利于厚朴植物的生长,对生长影响较大的N∶P∶K的施入量的比例为1.00∶0.44∶2.67。     

芦笋不同组织水浸提液对辣椒的化感效应

[目的]测定芦笋不同组织浸提液对辣椒的化感效应。[方法]以辣椒为侵体,通过测定芦笋不同部分水浸提液对辣椒种子萌芽和幼苗生长的影响,研究芦笋对辣椒的化感效应。[结果]芦笋地上部和地下部组织水浸提液对辣椒种子发芽率、发芽指数均表现出抑制作用;高浓度芦笋地上部和地下部组织水浸提液对辣椒幼苗的生长及叶绿素含量均具有抑制作用,而低浓度浸提液具有促进作用。芦笋不同组织部位水浸提液的化感作用强弱不同,地上部分水浸提液化感作用明显强于地下部分。[结论]该研究为选择芦笋的间作作物及其秸秆的再利用提供了依据。     

宽叶缬草生物学特性及人工栽培技术研究

[目的]研究宽叶缬草生物学特性及人工栽培关键技术.[方法]通过引种栽培,观察宽叶缬草生态生物学特性及宽叶缬草生长发育规律.[结果]环境条件、田间管理措施等对宽叶缬草生长发育有显著影响.[结论]研究结果可为建设规模化宽叶缬草人工种植基地提供理论依据.     

山茱萸疏松愈伤组织诱导及培养条件优化的研究

以山茱萸的叶片,茎段,种子胚等不同部位材料作为外植体进行了山茱萸不同外植体的离体培养研究,比较了不同培养条件对山茱萸疏松愈伤组织诱导和生长效果的影响,并就继代培养过程中,不同培养基组分及培养条件对其生长的影响情况进行了试验与比较分析。结果表明:KT(3 mg/L)+2,4-D(1 mg/L)对嫩叶的诱导效果最好;在光照强度1 500～2 000 lx,3%蔗糖,pH值为5.8左右时,山茱萸细胞生物量的增长率达到最大;合适的继代周期为20～25 d。     

底肥对川牛膝生长的影响

[目的]考察底肥对川牛膝生长的影响.[方法]选用农家肥、生物菌肥、油枯3种常见的肥料作为底肥,开展川牛膝林下种植试验.[结果]油枯底肥的平均产量145.46 g,平均地径2.61 cm,平均根径2.99cm;混合肥中平均产量106.59 g,平均地径1.61 cm,平均根径2.07 cm;完全不施用底肥中平均产量84.33 g,平均地径1.58 cm,平均根径1.97 cm.施用底肥后,平均产量最高是油枯为底肥的145.46 g,最低的是对照组（84.33 g）.[结论]通过对不同底肥对川牛膝生长及产量的影响分析,确定了林下川牛膝种植底肥为油枯的最佳底肥种类.     

超声波辅助提取芦笋茎中多糖工艺的优化

[目的]优化芦笋老茎中多糖的超声波辅助提取工艺。[方法]利用超声波辅助提取了芦笋老茎中的多糖,并在单因素试验的基础上采用正交试验设计对芦笋茎中多糖的提取工艺进行了优化。[结果]芦笋茎中多糖的最佳提取工艺条件为水料比20∶1（ml/g）、提取温度85℃和提取时间60 min,该提取条件下芦笋多糖的提取率为3.64%。[结论]该研究为芦笋老茎中有效成分的开发利用提供了参考。     

不同生长年份巴戟天挥发性成分的比较

[目的]分析并比较不同生长年份巴戟天的挥发性成分。[方法]采用同时蒸馏萃取法提取巴戟天的挥发性成分并比较其组分及含量。[结果]15年生巴戟天的挥发性成分鉴定出46种,已鉴定化学成分占总离子流图峰面积的89.98% 10年生巴戟天的挥发性成分鉴定出19种,已鉴定化学成分占总离子流图峰面积的70.01% 6~8年生巴戟天的挥发性成分鉴定出14种,已鉴定化学成分占总离子流图峰面积的63.23%。巴戟天的挥发性成分主要包括酸类、醛类、醇类和烯烃类等。其中,有机酸类含量最高,占总挥发性成分的65.28%,十六酸占总挥发性成分的45.75%。[结论]从巴戟天的挥发性成分中鉴定出的物质随生长年份的增加而增加,其中十六酸、油酸等主要成分的含量与巴戟天的生长年份显著相关。