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相似文献
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1.
胸腺肽基因转化生菜及其表达的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
 以4d苗龄的美国大速生生菜无菌苗子叶为外植体,通过根癌农杆菌介导, 将胸腺肽基因(thy)导入生菜。研究结果表明,含有卡那霉素75 mg·L-1的MS1-1培养基(MS+0.1 mg·L-1 6-BA+0.05 mg·L-1NAA+Cb500 mg·L-1) 为最适子叶外植体转化后诱导芽再生的培养基,经抗性筛选,将抗性芽切下于MS1-2培养基(1/2MS + Kan50mg·L-1+Cb100 mg·L-1)上诱导生根。通过PCR和Southern杂交分析证明,胸腺肽基因已经整合到生菜基因组中。RT-PCR  相似文献   

2.
油菜植株再生和农杆菌介导遗传转化的影响因素   总被引:1,自引:1,他引:0  
根据甘蓝型油菜不同品系下胚轴分化能力的不同,选用再生率及苗质均较好的特选4号作为受体材料,研究了各因素对其再生及转化效率的影响.结果表明,6d苗龄的下胚轴分化能力较强.以MS+6-BA(3mg·L-1)+NAA(0.1mg·L-1)+AgNO3(6mg·L-1)作为分化培养基诱导频率最高.培养基中添加5mg·L-1 Kan(卡那霉素)就能筛选出转化芽苗;预培3d的下胚轴在稀释10倍的农杆菌菌液(OD 0.4~0.5)侵染30s后共培2d获得的转化率最高.根据上述条件的优化,建立了以常规种特选4号下胚轴为转化受体的良好的再生及转化体系,转化率可达8%.  相似文献   

3.
桃矮化砧木的组织培养及植株再生   总被引:8,自引:1,他引:7  
以豫农矮砧1号的茎段和茎尖为外植体,进行组织培养试验.结果表明,茎段芽诱导的适宜培养基为MS+6_BA1 0mg·L-1+IBA0 1mg·L-1+GA31 0mg·L-1,茎尖芽诱导的适宜培养基为MS+6_BA0 2mg·L-1+IBA0 01mg·L-1+GA31 0mg·L-1,幼芽形成根的最佳培养基为1/2MS+IBA1 0mg·L-1+IAA1 5mg·L-1,获得了豫农矮砧1号的再生植株,该研究结果为豫农矮砧1号的快速繁育奠定了基础.  相似文献   

4.
大豆农杆菌介导转化系统的优化研究   总被引:12,自引:0,他引:12  
对大豆子叶节再生系统及其农杆菌介导转化的适宜筛选剂浓度进行了优化 ;同时以发芽 5天的大豆无菌苗的下胚轴切段为外植体 ,以抗性愈伤为指标 ,对影响农杆菌介导的大豆转化频率的因子进行了研究。结果表明 :不同大豆品种对选择剂的敏感性存在一定差异。 4种选择剂比较 ,PPT抑制效果最好 ,品种之间比较稳定 ;潮霉素次之 ;卡那霉素的有效浓度最高。 4种选择剂的适宜浓度分别为 :卡那霉素 10 0~ 2 0 0 mg· L-1;G4 185 0~ 75 mg· L-1;潮霉素 2 0~ 30 mg·L-1;PPT5 mg· L-1。农杆菌感染时间和共培养时间均对大豆的转化有明显的影响。感染时间以 8分钟左右为宜 ;共培养时间以 2~ 4天为宜。在农杆菌感染和共培养阶段的乙酰丁香酮浓度和 p H值对大豆转化频率有明显影响。p H值以 5 .4 0~ 5 .6 0为宜 ;乙酰丁香酮的适宜浓度为 10 0 μmol· L-1左右。在感染农杆菌之前 ,让外植体在高渗培养基上预培养一段时间能提高大豆下胚轴切段的转化频率。最适预培养天数为 1d。  相似文献   

5.
以台湾金线兰组培苗的带节茎段为外植体进行工厂化育苗研究,结果表明:最佳增殖培养基为MS+6-BA0.5mg·L-1NAA0.2mg·L-1,最佳生根培养基为1/2MS+6-BA0.1mg·L-1+NAA0.5mg·L-1。栽培基质采用腐殖土+珍珠岩(2∶1),每5d喷1次1/4MS来补充养分,每15d喷1次1000倍氨基酸。  相似文献   

6.
紫花苜蓿愈伤成苗高频再生体系的建立及其影响因子的研究   总被引:33,自引:0,他引:33  
张万军  王涛 《中国农业科学》2002,35(12):1579-1583
 对秘鲁苜蓿等品种的子叶和下胚轴愈伤再生植株过程进行了系统研究。经筛选获得了以改良的SH大量元素 +MS微量元素及铁盐 +水解酪蛋白 +VB19.9mg·L-1+VB69.5mg·L-1+尼克酸 4 .5mg·L-1+琼脂 8g·L-1为基本成分的愈伤成苗高频再生体系。其中 ,诱导愈伤和保持愈伤的培养基加 2 .0mg·L-12 ,4 -D +0 .0 2 5mg·L-1KT ;诱导再生植株分化的培养基加 0 .4mg·L-1KT +2 0g·L-1的蔗糖 ;诱导生根的培养基为 1/ 2MS ,其中蔗糖浓度为 10 g·L-1。秘鲁苜蓿子叶愈伤组织分化率达 10 0 % ,下胚轴愈伤组织分化率达 92 %以上。以该体系完成苜蓿愈伤植株再生具有高效、快速的特点 ,完成植株再生仅需 6 0~ 70d。  相似文献   

7.
魔芋愈伤组织诱导、分化及植株再生的初步研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
采用白魔芋(Amorphophallusalbus)块茎为外植体,以MS培养基为基本培养基,在不同生长调节剂组合的诱导培养基和分化培养基上进行培养。试验结果显示,在MS+0.5mg·L-16 BA+0.5mg·L-1NAA、MS+0.5mg·L-16 BA+0.5mg·L-12,4 D及MS+1.0mg·L-16-BA+1.0mg·L-12,4 D的培养基上容易诱导愈伤组织(诱导效率分别为92%、96%和93%),且愈伤组织容易分化;在分化培养基MS+1.0mg·L-16 BA+0.1mg·L-1NAA及MS+1.0mg·L-16 BA+0.5mg·L-1NAA上,愈伤组织容易分化(分化效率分别为86%和52%)。将在MS+1.0mg·L-16 BA+0.1mg·L-1NAA培养基上分化出的不定根和不定芽转至MS培养基上,30d后培养出完整植株。  相似文献   

8.
以虎耳兰幼嫩叶片为外植体,接种于添加不同激素浓度配比的培养基上,筛选出适宜的不定芽诱导培养基、不定芽增殖培养基和不定根诱导培养基.不定芽诱导培养基为MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1;不定芽增殖培养基为MS+6-BA2.0 mg·L-1 +NAA0.1 mg·L-1+0.2%活性炭(AC);不定根诱导培养基为1/2MS+NAA0.2 mg·L-1 +0.2%AC.试管苗先移入基质(4/7泥炭+2/7珍珠岩+1/7蛭石)中炼苗一周后,再移栽入基质(1/3泥炭+2/3沙壤土)中,成活率可达到100 %.  相似文献   

9.
甜瓜子叶节培养高效再生体系建立   总被引:6,自引:0,他引:6  
对8个甜瓜品种的子叶节进行离体培养,采用3种方法进行诱导,建立了高效的再生体系。其中,启动培养基为MS+BA2.0mg·L-1+IAA1.0mg·L-1,诱导培养基为MS+BA0.5mg·L-1+IAA0.2mg·L-1,通过器官发生途径诱导形成丛生芽,伸长和生根培养基分别为MS+BA0.05mg·L-1+IAA0.02mg·L-1和1/2MS+NAA0.2mg·L-1。以上培养基均含蔗糖35g·L-1,pH5.8。此再生体系每个外植体可获得7.2~12.5个不定芽(>1cm),生根率为91%,驯化成活率大于90%。  相似文献   

10.
以月季良种红衣主教带腋芽茎段为外植体进行离体快速繁殖研究 .结果表明 :在 MS+2 .0 0 - 3.0 0mg· L-16 - BA+0 .10 mg· L-1NAA培养基上进行起始培养 ,其腋芽分化率达 6 3%以上 ;在 MS+2 .0 0 - 3.0 0mg· L-16 - BA+0 .10 mg· L-1NAA+1.0 0 mg· L-1GA3 培养基上进行继代增殖 ,4 5d其增殖倍数达 3.4以上 ,且长成的芽苗比较粗壮 ;增殖后的芽苗在 1/ 2 MS(大量元素和琼脂用量减半 ,呈半液体状态 ) +0 .50 - 1.0 0mg· L-1NAA或 0 .50 - 0 .75mg·L-1IBA培养基上培养 ,根系生长良好 ,30 d小苗发根率达 90 %以上 ;经炼苗后移栽在以沙壤土、砻糖灰和蛭石混合 (体积 1∶ 1∶ 1)基质中 ,成活率达 80 %以上 .当小苗长到 10 cm左右移植于田间栽培 ,90 d后可陆续现蕾 ,180 d后即可正常开花  相似文献   

11.
农杆菌介导水稻转化条件的优化   总被引:1,自引:0,他引:1  
应用TAC(transformation-competition artificial chromosome)载体和pCAMBIA1300分别与农杆菌LBA4404组合转化水稻成熟胚愈伤组织,探索了农杆菌转化的有关因素。结果表明:共培养培养基上铺上1张滤纸有利于控制农杆菌的过度生长;粳稻品种转化率明显高于籼稻;干燥处理能有效杀死农杆菌,并有利于提高转化率,预再生可提高抗性愈伤组织的再生率而提高转化率。  相似文献   

12.
以陆地棉种质系珂字棉312为材料,探讨了在共培养基添加乙酰丁香酮(AS)同时调节pH值对抗性愈伤组织诱导率、正常体细胞胚数以及Kan抗性苗获得率的影响.结果表明,在共培养阶段的乙酰丁香酮浓度与pH均对棉花遗传转化有明显的影响.当乙酰丁香酮的浓度为100μmol/L、pH值为5.6时,棉花的遗传转化率最高.其抗性愈伤组织的诱导率达到72.96%,Kan 抗性苗获得率可达到8.96%;对转化再生植株进行PCR检测,约52.07%的Kan抗性苗呈阳性.  相似文献   

13.
农杆菌介导bar基因转化玉米幼胚的研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
通过农杆菌介导法,采用抗除草剂基因(bar)转化3个玉米自交系的幼胚,并对遗传转化影响因素进行优化。结果表明,2,4-D浓度为2 mg·L-1时,胚性愈伤组织诱导率较高;农杆菌最佳的侵染时间为20 min;乙酰丁香酮(AS)明显提高了幼胚的GUS瞬时表达频率,适宜浓度为200μmol·L-1;温和选择方法适于幼胚转化,不定芽诱导培养基、芽伸长培养基和生根培养基中潮霉素的浓度分别为8、6、2 mg.L-1;获得7株PCR检测以及除草剂抗性试验阳性植株。  相似文献   

14.
丹参是我国传统的大宗药材,被广泛用于治疗心脑血管疾病。随着我国心脑血管疾病发病率的逐年攀升,丹参的种质资源也急需有新的提高,转基因技术作为基因功能研究和转基因育种的重要手段在丰富和优化丹参种质资源方面取得了显著成效。通过利用转基因技术中常用的农杆菌介导法来转入外源基因以及探求丹参有效成分合成代谢相关基因功能,以期获得高产、高抗丹参植株的方法已较为成熟,目前研究工作主要集中于不同遗传转化体系的建立和优化。本文就丹参遗传转化体系构建的转化原理、影响因素和研究现状三方面作出详细综述,为今后丹参基因功能研究和新品种培育提供一定参考。  相似文献   

15.
根癌农杆菌介导的向日葵遗传转化研究进展   总被引:1,自引:1,他引:0  
焦展  刘培  安胜军 《安徽农业科学》2011,39(28):17182-17185
介绍了近年来国内外根癌农杆菌介导的向日葵遗传转化研究的受体系统、研究现状、主要影响因素、发展限制问题和策略,并对今后根癌农杆菌介导的向日葵遗传转化研究的发展和方向进行了展望。  相似文献   

16.
农杆菌介导的玉米转基因研究进展   总被引:1,自引:0,他引:1  
从转基因技术、农杆菌介导的受体以及影响农杆菌转化的因素和玉米转基因的现状等方面,综述了在玉米中农杆菌介导转基因的进展。  相似文献   

17.
为建立低成本、快速、高效的根癌农杆菌介导的致病疫霉转化体系,以菌株 HK0919为材料,从抗生素筛选浓度、共培养转膜方式、乙酰丁香酮(AS)浓度、共培养时间和共培养温度等方面对致病疫霉的转化体系进行了研究。综合各因素优化结果,建立的转化体系条件为:以1.0μg/mL的潮霉素B进行转化子筛选,采用玻璃纸作为共培养介质,AS浓度为200μmol/L,培养6 d,温度为22℃。在此条件下的转化效率为每106个游动孢子获得50~60个转化子。随机选取10个转化子,利用特异性引物对潮霉素抗性基因hph进行PCR扩增,转化子均能扩增出800 bp左右的预期条带;同时,利用根癌农杆菌vir基因特异引物对转化子进行 PCR扩增,排除了转化子被农杆菌污染所致的假阳性;转化子继代培养5代后,仍能在含潮霉素 B的黑麦培养基上生长。说明外源T DNA已成功整合到致病疫霉基因组中,并能稳定遗传。  相似文献   

18.
农杆菌介导稻瘟病菌绿色荧光蛋白(GFP)遗传转化研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
稻瘟病是水稻生产中的主要病害,抗病品种选育和利用是控制稻瘟病最有效措施。研究稻瘟病菌与水稻品种互作机制是培育抗病品种的基础。GFP(Green fluorescent protein)基因因其具有片段小、易与多种不同蛋白质N端或C端融合等特点,广泛应用于病菌与寄主植物互作研究中。研究以pBGgHg作为转化载体,根癌农杆菌C58C1作为转化介体,转化稻瘟病菌的强致病菌株py1022。研究发现,250μg·mL-1潮霉素B能完全抑制稻瘟病菌生长,利用根癌农杆菌介导稻瘟病菌遗传转化的最佳条件为:稻瘟病菌分生孢子浓度为1×105个·mL-1,共培养时间为4 d,共培养AS浓度为200μmol·mL-1,共培养温度为28℃。随机挑取8个转化子分别进行PCR扩增后测序、荧光显微镜下观察、致病力及稳定性测定,结果表明GFP成功转化到稻瘟病菌中,可为稻瘟病菌与水稻品种的互作机制研究提供技术支撑。  相似文献   

19.
上西早生柿ACC氧化酶的转基因研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
为了得到耐贮藏的转基因柿,以上西早生柿叶片为外植体,通过农杆菌介导法,建立了ACC氧化酶的RNAi遗传转化体系。研究了预培养时间、农杆菌菌液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮(AS)浓度和共培养时间等因素对基因转化的影响。结果表明:适宜的壮观霉素浓度为30 mg/L,预培养时间为3 d,用OD600值为0.3的菌液侵染10 min、AS浓度100 mg/L、共培养4 d有利于提高转化频率。经PCR分子检测与GUS组织化学染色,初步确定ACC氧化酶基因已转入上西早生柿组培苗中。  相似文献   

20.
农杆菌介导的水稻高效遗传转化体系的建立   总被引:19,自引:0,他引:19  
选用5个水稻品种(02428,武育粳2号,台北309,Millin和明恢63),通过农杆菌介导的转化方法,从前4个水稻品种中获得了来自309个独立抗性愈伤的的635棵再生植株,包括422株PSAG12-IPT转基因植株和212株PSAG12_GUS转基因植株,经组织化学检测和PCR分析,获得的422株PSAG12-IPT转基因樾株和212株PSAG12-GS转基因植株,经组织化学芳觳夂停校茫曳治觯  相似文献   

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