STR基因座进行奶牛个体识别的应用

 通过分析2份冷冻精液样本和4头可疑种公牛血样的BM1862、BM2113、BM720和TGLA122 STR基因座遗传多样性，旨在判断该2份冷冻精液的种公牛来源，为建立奶牛个识别方法奠定基础。结果表明，应用STR基因座对个体进行识别，鉴别能力达0.9999。说明四个STR基因座可以用于冻精质量监测或奶牛个体识别和亲子鉴定。     

STR基因座在奶牛个体识别中的应用

通过分析2份冷冻精液样本和4头可疑种公牛血样的BM1862、BM2113、BM720和TGLA122 STR基因座遗传多样性,旨在判断该2份冷冻精液的种公牛来源,为建立奶牛个识别方法奠定基础。结果表明,应用STR基因座对个体进行识别,鉴别能力达0.9999。说明四个STR基因座可以用于冻精质量监测或奶牛个体识别和亲子鉴定。     

STR分型技术在牛亲子鉴定中的应用实例

分别以争议小牛和嫌疑母牛的基因组总DNA为模板,运用STR复合扩增技术对TGLA227、BM2113、TGLA53、ETH10、SPS115、TGLA126、TGLA122、INRA23、ETH3、ETH225、BM1824共11个STR(短串联重复序列)基因座进行扩增,扩增产物经遗传分析仪检测,检测结果通过GeneM...     

利用微卫星DNA技术进行绵羊亲子鉴定

利用9个微卫星DNA对9头陶赛特羊DNA进行扩增,每3对微卫星DNA扩增产物混合后经聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测.采用已确定母女关系的2头陶赛特羊和7个嫌疑父亲的耳组织为样本,对1头母本已知的陶赛特羊在嫌疑父本中找出父本,并计算父权概率为99.997%.     

STR分型技术在马亲子鉴定中的应用

利用STR分型技术进行马亲子鉴定。取VHL20、HTG4、AHT4、HMS7、HTG6、HMS6、AHT5、ASB2、HTG7、HMS3、HMS2共11个STR(短串联重复序列)基因座,运用PCR技术对争议小马、嫌疑母马以及无关对照马的DNA进行扩增,扩增产物经遗传分析仪检测,用GeneMap-per片段分析软件对检测结果进行分析。结果表明,争议小马与嫌疑母马无亲子关系,STR基因分型技术能够准确、快速地进行马亲子鉴定,所用的STR位点具有较高的鉴别效率。     

北京荷斯坦母牛7个微卫星基因座遗传多态性研究

利用7个微卫星基因座BM1818、BM1258、BM1443、BM1905、BM302、BM4505和CYP21对240头北京荷斯坦母牛进行遗传检测,用非变性(中性)聚丙烯酰胺凝胶电泳检测微卫星的PCR扩增产物.结果表明BM1818、BM1258、BM1443、BM1905、BM302、BM4505和CYP21的等位基因数/多态信息含量/有效等位基因数/杂合度分别为4/0.3869/1.7693/0.4348、5/0.5923/2.9121/0.6566、8/0.7114/3.9012/0.7437、6/0.5921/2.8244/0.6459、6/0.7122/3.9989/0.7499、6/0.7144/4.0124/0.7508和7/0.6154/2.9805/0.6645.可见BM4505的遗传变异最大,BM1818的遗传变异最小.     

北京褐斯坦奶牛中四个微卫星座位的遗传变异

利用4个微卫星座位BM1818，BM1258，BM1443和BM1905，对240头北京褐斯坦奶牛进行了遗传检测，计算了4个微卫星座位的等位基因频率、多态信息含量、有效等位基因数、杂合度，其中BM1443的遗传变异最大，BM1818的最小。     

河南汉族人群7个Y-STR基因座单倍型分析

分析河南汉族群体7个Y-STR基因座单倍型及其在法医学应用,利用PCR扩增检测7个Y染色体特异性的STR基因座,并用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染显色技术分析单倍型频率分布.结果显示:在河南汉族102名无关男性个体中7个基因座DYS438、DYS446、DYS391、DYS390、DYS458、DYS534、DYS426分别检出5、8、7、4、8、6、7个等位基因,共检出100种单倍型,其中98种为唯一的,单倍型基因多样性为0.999 612。7个Y-STR基因座具有很高的识别能力,对建立Y染色体STR数据库,研究群体遗传学和进行法医学鉴定有重要意义。     

隐性乳房炎奶牛4个微卫星座位的遗传变异分 析

选择牛23号染色体上4个微卫星标记BM1818、BM1443、BM1258和BM1905,用非变性聚丙酰胺凝胶电泳方法对石河子某奶牛场150头进口荷斯坦奶牛进行了遗传变异的检测分析并计算相应的遗传指标,利用SPSS12.0软件分析了4个微卫星座位与进口荷斯坦牛隐性乳房炎的关系,探讨各自座位上不同基因型与奶牛隐性乳房炎之间的相互关系。     

圈养猎豹的微卫星基因座遗传变异研究

本研究利用19个微卫星基因座对52只圈养猎豹进行了遗传多样性检测.通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR扩增产物,计算了19个微卫星座位的等位基因频率、基因杂合度、多态信息含量和有效等位基因数.结果显示,19个基因座的等位基因数为2～11个,共检测到131个等位基因.基因杂合度在0.500～0.904 0之间,平均为0.741 6;多态信息含量在0.375 0～0.895 8之间,平均为0.699 7;有效等位基因数处于2.000～10.440 2之间,平均为4.724 6.结果表明:所选19个微卫星基因座在研究样本中均为中高度多态性基因座,具有比较明显的遗传变异,显示出群体丰富的遗传多样性.     

奶牛隐性乳房炎多重PCR检测方法研究

[目的]建立一种快速、准确和特异性强的奶牛隐性乳房炎检测方法。[方法]采用多重PCR从基因水平上对70份临床疑似奶牛隐性乳房炎感染样本进行检测。[结果]多重PCR方法检测隐性乳房炎阳性样品数为58份,阳性检出率为82.5%;传统生化方法检测阳性样品数为53份,阳性检出率为75.5%,两者的阳性符合率为92%。[结论]成功地建立了一种快速、特异性强的奶牛隐性乳房炎多重PCR检测方法。     

崂山奶山羊微卫星标记与泌乳性状的相关分析

 【目的】探讨微卫星DNA作为崂山奶山羊泌乳性状遗传标记的可行性。【方法】根据比较基因组遗传图谱,选择奶牛6、14、15号染色体上与泌乳性状相关联的微卫星座位（BM1329、BM143、BM302、CSSM66和BMS0812）,对175只崂山奶山羊泌乳母羊进行多态性检测,采用最小二乘方法分析微卫星座位与泌乳性状之间的关联效应。【结果】所选微卫星座位在崂山奶山羊群体中均表现出丰富的遗传多态性,有效等位基因、观察杂合度、多态信息含量和近交系数的平均值分别为3.9924、0.4667、0.6748 和0.347。基因座CSSM66对乳脂率和300 d泌乳量均有显著效应（P＜0.05）,最有利的基因型分别为210/210和194/194,具有正效应的等位基因分别为210和194;BM302对300 d泌乳量有极显著效应(P＜0.01),最有利的基因型为156/150,具有正效应的等位基因为156和150;基因座BM143对乳脂率有显著效应(P＜0.05), 对乳蛋白率有极显著效应(P＜0.01),最有利基因型分别为114/100和100/100,等位基因114和100对乳脂、乳蛋白均有正效应;基因座BM1329对乳脂率有显著效应(P＜0.05),最有利的基因型为182/180。【结论】发现了对崂山奶山羊泌乳性状有显著效应、多态性较高的微卫星基因座,为开展崂山奶山羊的标记辅助选择提供了有价值的遗传标记。     

奶牛新孢子虫病的巢式PCR诊断及ELISA检测

为确定焦作某奶牛场奶牛流产是否与新孢子虫感染有关,对采自该奶牛场流产奶牛的胎牛组织进行新孢子虫Nc5基因巢式PCR检测诊断,并用ELISA方法对该奶牛场不同年龄阶段奶牛血清样品进行新孢子虫抗体检测。结果显示,在4例流产胎牛样本中有3例检出新孢子虫DNA;新孢子虫血清抗体阳性率达44.80%(112/250),其中,经产奶牛阳性率为55.40%(77/139),未经产奶牛或犊牛阳性率为31.53%(35/111);经产奶牛中有流产史的阳性率为73.17%(30/41),其余未发生过流产的阳性率为47.96%(47/98)。综上推断,新孢子虫是导致该奶牛场奶牛流产的主要病原。     

鲢三、四核苷酸重复微卫星标记的筛选及其特征分析

通过磁珠富集法筛选鲢(Hypophthalmichtys molitrix)的三、四核苷酸重复微卫星分子标记。提取鲢血液大片段基因组DNA,用限制性内切酶Sau3AI进行酶切,蔗糖密度梯度离心收集400~900 bp长度的片段,构建鲢全基因组PCR文库,用生物素标记的微卫星探针(TGA)8、(CAG)8以及(AGAT)6进行筛选,磁珠富集含有微卫星序列的DNA片段,获得含有微卫星的单链序列;将这些序列通过PCR扩增,连接pMD 18-T载体,转入感受态大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,获得微卫星文库;再用γ-32P标记的放射性同位素探针进行二次杂交筛选,获得1 758个阳性克隆,选择测序348个克隆序列中,共含有280个微卫星座位,其中完美型167个(59.64%),非完美型28个(10%),混合型85个(30.36%)。Primer 3.0软件设计60对引物,并用珠江水系的野生鲢群体对引物进行多态性位点检测。统计软件分析显示其中22对具有较高的筛选效率和多态性,可作为鲢种质评价等遗传分析的工具。研究亮点:首次利用多碱基(三、四核苷酸重复)探针筛选出微卫星分子标记结合同位素探针进行两次筛选...     

h1-calponin基因对五指山小型猪骨髓间充质干细胞体外成骨分化的影响

【目的】通过碱性调宁蛋白（h1-calponin）基因与五指山小型猪骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BM MSCs）成骨分化关系的研究,探讨成骨分化机制。【方法】添加成骨分化液对BM MSCs进行成骨分化诱导,采用茜素红染色的方法鉴定细胞成骨分化的程度;通过定量PCR分析h1-calponin基因及成骨相关基因骨桥蛋白（osteopotin,OPN）、骨钙蛋白（osteocalcin,OCN）、核心结合因子α1（core binding factor a1,Cbfα1）及核心结合因子β（core binding factor beta,Cbfβ）表达谱。【结果】①随着诱导时间的延长,茜素红染色矿化结节逐渐增多;②成骨标志基因OPN和OCN表达趋势一致：诱导0至14 d,基因表达量呈增长趋势,诱导14 d表达量最高,而后下降;成骨相关基因Cbfα1和Cbfβ表达量于第7天达到最高峰,之后逐渐下降,但仍高于诱导前;③h1-calponin基因表达量随着诱导的延续逐渐下降;诱导14—21 d时,该基因基本不表达。【结论】h1-calponin基因的表达与五指山小型猪骨髓间充质干细胞体外成骨分化存在着负相关,可能是成骨分化的负调控基因。     

猪嗜血支原体诊断方法的比较

[目的]建立猪嗜血支原体的PCR诊断方法,并与常规染色镜检诊断方法进行比较。[方法]对采自新疆阿拉尔垦区的疑似样品分别采用吖啶橙、姬姆萨染色镜检,采用温度法将嗜血支原体从红细胞上解离下来,提取其基因。根据GenBank上发表的猪嗜血支原体16S rRNA基因组序列（U88565）设计1对特异性引物,进行PCR扩增,建立猪嗜血支原体的PCR诊断方法。[结果]比较了3种诊断方法,指出了各自的优劣。所建立的PCR方法为猪嗜血支原体病的快速诊断及流行病学调查提供了新手段。     

奶牛流产病因探究及新孢子虫病PCR检测方法的建立

[目的]探究新疆某奶牛场奶牛流产病因.[方法]采集的19份血清样品和4份牛流产胎儿脑组织进行布氏杆菌病凝集实验、弓形虫PCR检测和新孢子虫病ELISA方法检测,参考GenBank登录的犬新孢子虫种Nc-5序列[1],设计引物,建立新孢子虫病的PCR检测方法.[结果]调查结果显示该牛场布氏杆菌病与弓形虫病感染均呈阴性,新孢子虫病感染率为14.3;(2/19).新孢子虫PCR诊断方法的最佳退火温度为57℃,灵敏度为35 pg/μL.用建立后的PCR方法检测流产胎儿,感染率为50.0;(2/4).[结论]新孢子虫病是导致该厂奶牛流产的重要原因之一,为今后新疆地区有效预防和治疗新孢子虫病提供了一定的科学依据.