绵羊胚胎冷冻保存及移植的研究

本研究的目的在于建立绵羊胚胎的慢速冷冻和玻璃化快速冷冻保存方法,为绵羊胚胎移植技术应用于生产提供保证。结果:慢速冷冻保存,解冻后正常胚胎占72％,移植受体的受胚率33％、产羔率66％。玻璃化快速冷冻保存,解冻后正常胚胎率亦达72％,移植受体3只,产羔4只。     

绵羊胚胎细胞核移植的研究

采用国产药品和试剂对绵羊进行超数排卵和胚胎细胞核移植。以 McGrath Solter 和Willadsen 两种去(注)核方法,将8-细胞胚胎细胞核经电融合植入去核成熟卵母细胞内,并经琼脂包埋和中间受体培养,使移核胚胎发育。实验结果表明:(1)用国产激素和化学药品进行绵羊胚胎细胞核移植可使移核胚胎在中间受体内发育为囊胚或桑椹胚;(2)去核时卵母细胞质剩得过少可导致移核胚过早(6-细胞期)发生致密化或形成内细胞团细胞数目较少的小囊胚;(3)Willadsen 去(注)核方法的去核和注核操作成功率明显优于 McGrath-Solter 方法;应用McGrath Solter 法的去核率仅为60%;(4)强度为0.63KV/cm,持续160微秒(μs)的一次电脉冲获得的胚胎融合率最高,达71.2%;以同样电场条件刺激未去核卵母细胞的孤雌活化率在71.4%。     

胚胎分割液及分割方法对绵羊体外胚分割效果的影响

主要研究了胚胎分割液、分割方法和胚胎发育时期对绵羊体外生产胚胎的影响.体外采集绵羊卵丘卵母细胞复合体,成熟培养24 h,经过体外受精培养,得到体外胚胎样品.借助显微操作仪,将体外受精的桑葚胚和囊胚分割,体外培养半胚,观察其发育情况.结果发现:在D-PBS+0.2 mol/L蔗糖液与D-PBS+5%PVP液中分割桑葚胚和囊胚,其分割成功率及半胚的囊胚发育率及囊胚细胞数三者均无差异显著性(P＞0.05);用显微分割法和徒手分割法分割桑葚胚和囊胚,其分割成功率、半胚的囊胚发育率及囊胚细胞数均无差异显著性(P＞0.05);比较桑葚胚和囊胚分割,囊胚的分割成功率显著高于桑葚胚的分割成功率(P＜0.05),而半胚的囊胚发育率及半胚细胞数均无差异显著性(P＞0.05).结果表明:在D-PBS液中分别添加0.2 mol/L的蔗糖和5%的PVP都可作为绵羊体外胚的胚胎分割液;显微分割法和徒手分割法均可用于绵羊体外胚胎的分割;囊胚比桑葚胚更适于胚胎分割.     

不同的体外培养条件对绵羊毛囊生长的影响

选择蒙古绵羊完整的生长期毛囊,分别培养于有血清及无血清的3种不同的培养基中,研究了不同的体外培养条件对绵羊毛囊生长的影响。结果表明,Williams E无血清培养基+胰岛素等相关药品培养液中培养的绵羊毛囊最接近于绵羊自然生长毛囊,表现出生长发育初期的结构特征,培养后期的毛囊尽管正常生长发育,但结构有了明显的变化。     

不同因素对西藏阿旺绵羊胚胎冷冻与移植效果的影响

为探究西藏阿旺绵羊推行胚胎移植及胚胎冷冻技术的可行性,以阿旺绵羊为供体,澳湖羊为受体,探讨发情期内不同月份对阿旺绵羊超排效果的影响、不同发育阶段鲜胚和移植数量对母羊受胎率及产羔率的影响,以及冷冻方法对胚胎移植的影响。结果显示：发情期7月超排组平均可用胚数(3.95±4.23)显著低于10月超排组(5.45±4.03);阿旺绵羊胚胎移植2枚桑椹胚的受体妊娠率最高,达到81.81%,产羔率达57.58%,具有显著性差异;阿旺绵羊胚胎程序化冷冻组受体妊娠率为35.48%,显著优于玻璃化冷冻组受体妊娠率13.63%。以上结果表明,西藏推行阿旺绵羊胚胎移植技术的可行性较高。     

细毛羊羔羊超数排卵及体外胚胎生产移植

[目的]研究羔羊日龄、羔羊体重、超排方法、精卵共孵育时间对细毛羔羊超排效果及卵母细胞体外受精效果的影响.[方法]用国产FS3H对4.～9周龄羔羊进行两种超排方法处理,回收可用卵母细胞1 032枚,体外受精后移植受体98只,产羔25只.[结果]不同周龄羔羊只均获卵数和可用卵数之间差异显著(P＜0.05);不同激素方案处理组的发育卵泡两种处理方案在发育卵泡数上无显著差异(P＞0.05),但在回收率和可用卵数上差异显著(P＜0.05);不同体重组只均发育卵泡数和可用卵数之间差异显著(P＜0.05).[结论]4～6周龄的细毛羊羔羊超排获得卵母细胞数目较多;重复超排的羔羊超排效果不理想;同时,将受精液pH值调为7.5 ～7.6,并将精卵共孵育时间控制在22 ～26 h,卵母细胞体外受精及发育效果较好.     

提高牛冷冻胚胎成活率和移植受胎率的研究

本文从冻前胚胎质量（等级）、胚胎的发育阶段、脱除冷冻保护剂的方法等对冷冻胚胎成活率的影响进行了比较系统的研究；从冻后胚胎质量（等级）、受体牛子宫及卵巢黄体生理状况，移植者技术水平对冷冻胚胎移植受胎率的影响进行了比较详细的研究。冻胚解冻成活率和移植受胎率分别达到７６．２％（１２８／１６８）和４６．６％（５７／１２２），其中１９９５年的同项研究结果分别为８４．４％（３８／４５）和５５．６％（２０／３６），不仅达到实际应用水平，而且与国际先进水平相当。     

影响转基因绵羊胚胎移植受胎率的因素

为了提高并稳定转基因胚胎移植受胎率,对可能影响受胎率的供受体同期化程度、移植胚胎数量、受体处理方式、胚胎发育速度、受体注射黄体酮、供体作受体等6个方面进行研究。结果表明,(1)供受体发情时间差在±12h以内,不影响受胎率(P>0.05);(2)每只受体移植2～3枚转基因胚胎的受胎率极显著高于移植1枚的受胎率(P<0.01);(3)在繁殖季节里,受体采用自然发情、肌肉注射PGF2α、肌肉注射PMSG+PGF2α等方式,三者受胎率间差异不显著(P>0.05);(4)发育迟缓的胚胎移植后,受胎率显著低于正常发育胚胎的受胎率(P<0.01);(5)移植后的受体注射2mg黄体酮,不能提高受胎率(P>0.05);(6)供体当作受体使用,不影响受胎率(P>0.05)。     

TSA浓度及处理时间对猪体细胞核移植胚胎体外发育影响

曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂.有研究表明TSA处理可以提高核移植胚胎的发育率.为探讨TSA对猪核移植胚胎发育的作用,试验重点研究了TSA浓度及处理时间对核移植胚胎体外发育的影响,同时也探索了TSA对不同供核细胞构建的重构胚体外发育的影响.结果表明,40 nmol·L-...     

体细胞克隆猪繁殖性能及后代生长性能评估

本文旨在探讨克隆种猪与供体猪在繁殖和遗传性能的关系,评估体细胞克隆公猪在保存优良基因和商品猪生产中的应用。克隆皮杜公猪,检测其精液质量相关指标,比较克隆公猪、供体公猪与配母猪的窝产总仔、活仔数等指标,并对两者后代进行生长性能测定。结果表明,与供体猪相比,克隆猪及后代在各项检测指标中均无显著差异,说明克隆猪具有正常的繁殖性能,且保留了供体优秀的遗传性能,可以作为优秀种公猪进行生产应用。     

提高绵羊受胎率的研究

选择临床健康的繁殖活龄母羊１０１只（海西５０只，海南５１只），在母羊发情、人工授精的同时肌肉注射ｈＣＧ５００ＩＵ，其情期受胎率（８８．０％，８６．２７％）和部受胎率（９２．００％，９２．１５％）显著高于对照组（７２．００％、７０．００％和７８．００％、７６．００％）。     

不同营养水平对生长绵羊产毛性能的影响

本研究以毛用、毛肉兼用和肉毛兼用型生长绵羊为对象,探讨营养水平对全身净毛量、净毛率、毛能沉积量、羊毛细度、羊毛伸直长度、单位皮肤面积净毛量,以及反映羊毛着生面积的胸围和体长的影响作用。为揭示不同类群试羊的种质特性和确定合理的营养水平提供了依据。     

嫁接对硫华菊及凤仙花后代生长的影响

通过盆栽试验,研究未嫁接、同株嫁接(同一株苗上部为接穗、下部为砧木)、异株同苗嫁接(2株大小一致的苗分别作砧木和接穗)、异株异苗嫁接(小的1株苗作接穗、大的1株苗作砧木)对硫华菊及凤仙花后代生长的影响。结果表明,嫁接提高了硫华菊及凤仙花的株高、生物量、光合色素含量及抗氧化酶活性,其后代综合表现排序为异株异苗嫁接异株同苗嫁接同株嫁接未嫁接;与未嫁接后代相比,异株异苗嫁接的硫华菊后代茎秆、叶片、地上部分生物量分别提高34.78%、30.63%、32.54%,异株异苗嫁接的凤仙花后代茎秆、叶片、地上部分生物量分别提高20.03%、17.86%、19.50%。自根苗嫁接可促进硫华菊及凤仙花后代的生长,其中以异株异苗嫁接的效果相对最好。     

山羊胚胎体外培养和移植的研究

用FSH、LH、PMSG、HCG对40只山羊进行超数排卵处理，平均每只排卵21．5枚，回收11．5枚胚胎。超数排卵和卵子回收数，FSH分别为24和14枚，PMSG为19和9枚。将正常的30枚1细胞，12枚2细胞和45枚4细胞胚胎在TCM──199培养液，5％CO2和38．5℃环境中培养60－78小时，65．23％的胚胎可发育至囊胚，移植6只受体羊。妊娠检查已孕3只。     

甘露寡糖对生长绵羊瘤胃发酵功能(体外)的影响

采用批次培养的方法,研究了体外条件下日粮添加甘露寡糖对生长绵羊瘤胃发酵功能的影响。甘露寡糖的添加水平为0,0.20%,0.40%,0.60%,0.80%以及1.00%。结果表明,日粮添加甘露寡糖可以提高培养液中的挥发性脂肪酸(VFA)含量;可以提高培养液中的菌体蛋白(BCP)含量,并以0.60%的添加量效果最佳;添加量在0.80%以上时,可以显著降低(P<0.05)培养液中的NH3-N含量;对培养残渣中的中性洗涤纤维(NDF)含量没有显著影响(P>0.05)。研究初步证明,日粮添加甘露寡糖可以在一定程度上提高生长绵羊的瘤胃发酵功能。     

促黄体素对绵羊卵母细胞体外成熟及卵裂的影响

促黄体素对卵母细胞成熟有一定的促进作用。为研究不同浓度LH(促黄体素)对绵羊卵母细胞体外成熟及受精发育的影响,从屠宰场采集绵羊卵巢,切割法获取卵母细胞,于不同浓度LH成熟培养液中培养24 h,进行体外受精及体外胚胎培养。按照LH的添加浓度将试验分为5个组(A组,0μg/mL;B组,5μg/mL;C组,10μg/mL;D组,15μg/mL;E组,20μg/mL)。试验结果表明:LH的添加浓度为10μg/mL时,卵母细胞的成熟率为76.60%,卵裂率为63.24%,桑椹胚率为30.81%,均显著高于其它试验组(P0.05)。综上,本试验在含有10μg/mL FSH的TCM199成熟培养液中添加10μg/mL的LH时能显著提高绵羊卵母细胞的成熟率、卵裂率及桑椹胚率,这对建立稳定有效的绵羊卵母细胞成熟体外培养体系有着重要意义。     

不同类型绵羊胚胎体外发育率的比较研究

分别利用孤雌激活技术、体外受精技术及体细胞核移植技术生产不同类型的体外胚胎,比较不同类型胚胎的体外发育率和囊胚细胞总数间的差异,研究季节、卵巢保存条件和培养液对孤雌激活胚(PAE)和体细胞核移植胚(SCNTE)发育能力的影响.结果表明:PAE、SCNTE和体外受精胚(IVFE)的卵裂率没有显著差异;PAE的囊胚率(23.4%)显著高于SCNTE(18.2%);SCNTE的囊胚细胞数(120)显著多于PAE的囊胚细胞数(96),而与IVFE的囊胚细胞数(107)没有显著差异.繁殖季节卵巢PAE和SCNTE的发育率显著高于非繁殖季节.卵巢在14～18 ℃保存15～17 h,没有影响PAE的体外发育,却显著降低了SCNTE的卵裂率,且没有得到囊胚.SOFaa和CR1aa培养基对PAE和SCNTE的早期发育没有显著影响.由此可见,季节和卵巢的保存方式对绵羊胚胎的体外发育率有显著影响,且不同类型胚胎的质量也存在显著差异.     

Ghrelin对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

该研究旨在探讨外源Ghrelin对绵羊卵母细胞体外成熟的调控作用。在成熟培养液中分别添加浓度为0、100、200和300ng/m L的Ghrelin,进行绵羊卵母细胞体外培养,成熟培养24h,观察统计处于MII期的细胞数目。选择最佳添加浓度,在体外成熟培养0、6、8、14、16、24h,通过Hoechst33342染色持续检测卵细胞中细胞核成熟随时间变化,并对不同培养时期细胞进行实时荧光定量PCR检测,以证明细胞质量相关基因的相对表达量。成熟培养24h时,添加0、100、200、300 ng/m LGhrelin组卵母细胞成熟率分别为:63.7%(220/345)、69.4%(230/332)、85.6%(270/316)、75.9%(231/305)。200ng/m L Ghrelin组显著高于对照组(P0.01),其余组并未显著高于对照组(P0.05);染色证明:200ng/m L Ghrelin组于成熟培养0h、6h、14h、16h到达GV、GVBD、MI、MII期(P0.05);实时荧光定量PCR证明:对卵母细胞成熟GV、GVBD、MI、MII期,Ghrelin受体基因GH-SR-1a和卵母细胞质量相关基因OCT-4、GLUT1和IFNT的相对表达时间提前,但并不显著影响这些基因的表达水平。外源Ghrelin参与了绵羊卵母细胞的体外成熟调控,可在没有改变其成熟过程的前提下加速卵母细胞的体外成熟过程,但对绵羊卵母细胞的质量和进一步发育相关的基因的表达没有明显影响。