HP-PRRSV人工感染后猪血清病毒载量和体重增长的变化规律

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(high pathogenic-porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)感染猪后其血清病毒载量和体重增长的变化规律,以大白猪和通城猪的高代横交群体中72头健康仔猪为研究对象进行HP-PRRSV人工感染,观察临床症状,并在感染前和感染后第4、7、11、14、21、28、35天进行空腹采血、体重称量、血清分离以及病毒载量检测。结果显示:在感染第0～4天体重增长速度缓慢,第4～21天体重一直呈负增长、第7～11天体重减少量达最大值、第21～35天体重呈正增长;病毒载量在感染第4天达到峰值并持续到第7天,第7～35天病毒载量逐渐下降至6.62 lg copies/mL;感染第7天出现死亡,死亡个体主要集中在7～14 d,在第10天出现死亡高峰,第19天后基本稳定;依据第14天存活与否,将试验猪分为抗病和易感2个组,抗病组的病毒载量在第4、7、11天均显著低于易感组(P0.05),该组的体重增长量在第4～7、7～11、11～14天均显著高于易感组(P0.05)。上述结果表明,在感染过程中体重增长和病毒载量2个性状可作为预测PRRS抗病性的指示性状。     

高致病性PRRSV与PCV2共感染协同致病性研究

 【目的】为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）和猪圆环病毒2型（PCV2）的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。【方法】选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组、HP-PRRSV+PCV2同时共感染组、HP-PRRSV感染组、PCV2感染组、未接种对照组。感染后每天测量体温、观察临床症状,每周称量体重、采血。用流式细胞仪检测血液中的CD3+ CD4+ CD8-、CD3+ CD4- CD8+、γδT、NK细胞及粒细胞和单核细胞变化;免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）检测这两种病毒抗体变化;用ELISA法检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-2、GM-CSF细胞因子变化;用荧光定量PCR法检测血清和组织中病毒载量。对各组试验猪进行组织病理学观察。【结果】HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组临床症状最严重,死亡率达60%;组织和血清中病毒载量显著高于其它组,抗体滴度明显低于其它组;淋巴细胞亚群及细胞因子（尤以TNF-α）变化也最为明显。【结论】HP-PRRSV和PCV2之间存在协同致病作用,且猪群先感染HP-PRRSV后感染PCV2可明显提高猪群发病率和死亡率。本研究对临床HP-PRRSV和PCV2的综合防制提供科学依据。     

猪圆环病毒2型感染后猪血液学指标研究

为观察PCV2感染猪对其血常规及生化指标变化的影响,将6头PCV2抗体阴性的21日龄断奶仔猪随机分成攻毒组和对照组,攻毒组经颈部肌肉及口鼻分别接种PCV2-BH毒株,攻毒后检测部分血常规指标、免疫球蛋白质量浓度及部分血清生化指标。结果显示,感染后第4天和第7天,白细胞总数分别是正常生理水平的74.2%、79.9%;感染后第7天,淋巴细胞百分比是正常生理水平的35.05%,差异达显著水平(P<0.05),单核细胞和中性粒细胞百分比均显著低于对照组,说明PCV2感染降低了机体的先天免疫机能,增加了继发感染的几率,同时还说明PCV2-BH株具有较好的抗原性;攻毒组血清全部转阳,说明PCV2-BH毒株具有较好的免疫原性,可作为开发PCV2疫苗的候选毒株。     

环丙沙星对链球菌病猪免疫反应的影响研究

 取 7周龄长大杂交猪 2 4头 ,随机分为空白组、阴性组、阳性组和试验组。阴性组和试验组人工复制猪链球菌病亚急性模型 ,空白组和阳性组用生理盐水接种 ,阳性组和试验组于接种后第 7天由耳静脉推注环丙沙星 ,空白组和阴性组用生理盐水给药。接种后第 0、7、14、2 1、2 8天 ,自前腔静脉采血 ,用显微镜法计数白细胞总数 ,姬姆萨染色法作白细胞分类计数 ,硝基蓝四氮唑 (NBT)还原试验定量检测嗜中性白细胞吞噬功能 ,噻唑蓝 (MTT)比色法检测外周血中淋巴细胞转化 ,单向免疫扩散法测定血清IgG浓度 ,5 0 %溶血试验测定血清中补体总活性 ,同时 ,用植物血凝素(PHA)皮肤试验检测迟发型超敏 (DTH)反应。结果表明 ,环丙沙星能缓解链球菌病所致的白细胞增高血症 ,升高感染猪外周血中淋巴细胞百分含量 ,相对降低嗜中性白细胞百分含量 ;能增强感染猪嗜中性白细胞吞噬功能 ,接种后第14、2 1、2 8天 ,给药和接种细菌感染两因素交互作用极显著 (P <0 .0 1) ,二者共同使试验组猪嗜中性白细胞还原NBT能力极显著高于空白组 (P <0 .0 1) ;能加强PHA刺激感染猪淋巴细胞体外增殖能力 ,接种后 ,PHA刺激感染猪淋巴细胞增殖指数 (SI) ,均极显著低于空白组 (P <0 .0 1) ,但试验组猪用药后第 2 1天恢复 ,与空白组猪无显著差异 (P >0 .0     

中药复方宫炎净提取物中生物碱对家兔部分血液学指标的影响

为研究中药复方宫炎净提取物中生物碱对子宫内膜炎家兔部分血液学指标的影响,制备家兔子宫内膜炎模型,分别在用药前、用药4d和用药7d采血,对血液中Ca、P浓度变化、红细胞总数、血红蛋白质量、红细胞压积以及白细胞分类计数变化进行测定。结果表明,中药复方宫炎净提取物中生物碱能显著增加血液中红细胞总数、淋巴细胞数量及Ca浓度(P0.05),极显著提高血液中血红蛋白质量及淋巴细胞百分比(P0.01);并能极显著降低白细胞总数、中性粒细胞、中性粒细胞百分比及红细胞压积(P0.01)。说明中药复方宫炎净提取物中生物碱能调节子宫内膜炎家兔部分血液指标,使之恢复正常。     

中药复方制剂对患子宫内膜炎奶牛部分血液学指标的影响

为探讨中药复方对患有子宫内膜炎奶牛部分血液学指标的影响,对12头用药前后奶牛血液中的Ca、P、血红蛋白含量、红细胞沉降率进行了测定,并对血液中的红细胞、白细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞进行了计数.结果显示,中药复方能够显著增加血液中的红细胞数、血红蛋白含量、淋巴细胞和单核细胞比例(P<0.05),极显著降低血液中的中性粒细胞比例(P<0.01),表明中药复方能够调节部分血液指标使之恢复到正常水平,这可能也是该药发挥药效的途径之一.     

注射嗜水气单胞菌灭活菌的齐口裂腹鱼外周血免疫指标的变化

齐口裂腹鱼Schizothoraxprenanti 是我国重要的冷水鱼类之一,为我国长江上游名贵经济鱼类.该研究在 免疫组和对照组齐口裂腹鱼胸鳍基部分别注射0.2mL体积单位为1.0×108 CFU/mL福尔马林灭活的嗜水气单胞 菌苗(F-AH)和0.65%灭菌生理盐水,在免疫后第1,2,4,7,14,21,28天,测定外周血液血细胞数量及组成比例,血 细胞吞噬活性和血清抗体效价.结果显示注射灭活菌苗后红细胞、白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞和单核细胞的数 量逐渐增加,显著高于对照组;血栓细胞的数量逐渐降低,在第4天和第7天显著低于对照.吞噬百分比(PP)和吞 噬指数(PI)迅速上升,第2天达峰值,PP第2,4天显著或极显著高于对照组;PI第2,4和7天极显著高于对照组. 血清抗体效价逐渐升高且在第7天和第14天达到最高值.结果表明单次注射灭活菌苗后齐口裂腹鱼可以产生良好 的免疫应答.     

日粮添加精氨酸对肥育猪免疫功能的调节作用

以杜×(大×长)三元杂种猪为研究对象,将其分为2组,分别饲喂基础日粮和添加1%精氨酸日粮.测定试验猪血液白细胞分类计数,血清免疫球蛋白和细胞因子水平、淋巴细胞增殖活性以及脾脏IL-2、TNF-α和IFN-γ的mRNA表达水平,探讨日粮添加精氨酸对肥育猪免疫功能的调节作用.结果表明:日粮中添加1%精氨酸可显著增加单核细胞数和百分比、淋巴细胞百分比和增殖活性及血清IgG和IL-2水平,显著降低中性粒细胞数和百分比及血清TNF-α水平;明显增加脾脏IL-2和IFN-γ表达水平,降低TNF-α表达水平.结果提示,精氨酸可通过调节肥育猪的细胞和体液免疫水平,从而增强机体免疫功能.     

猪附红细胞体病BALB/c小鼠模型的建立

为了解现阶段延边地区猪附红细胞体的致病性,以注射地塞米松和摘除脾脏的BALB/c小鼠为实验动物,以腹腔注射方式人工感染猪附红细胞体,通过临床症状观察、血液涂片姬姆萨染色镜检及PCR方法对BALB/c小鼠感染猪附红细胞体情况进行鉴定,并进行血液常规检测。结果表明,注射地塞米松组、摘除脾脏组和正常感染组BALB/c小鼠在感染后8～10d相继达到高峰,正常感染组BALB/c小鼠在感染后第24天猪附红细胞体消失,注射地塞米松组在感染后第32天消失,而摘除脾脏组在试验结束时仍具有较高的感染率。经血液常规检测,各组BALB/c小鼠在感染猪附红细胞体后,白细胞总数显著升高(P<0.01),淋巴细胞总数、红细胞总数、血红蛋白含量均显著下降(P<0.05),红细胞比容显著下降(P<0.01)。因此,猪附红细胞体对低免疫力的BALB/c小鼠具有一定感染性,并表现出典型临床症状。     

人工感染嗜水气单胞菌对黄鳝血细胞的影响

用不同浓度嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染健康黄鳝(Monopterus albus),采用血细胞计数、血涂片及显微测量等方法分别测定感染24 h、48 h、72 h后各组黄鳝血细胞数量,红细胞长、短径。结果表明:随着处理组菌浓度增加,感染24 h的黄鳝红细胞浓度逐渐减小,感染48h和72h的呈先增大后减小的变化趋势,但各处理组差异不显著;感染后白细胞中主要是嗜中性粒细胞、单核细胞核淋巴细胞在血细胞中所占百分比显著升高。     

Evaluation of the Pathogenicity of a Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Variant in Piglets

Since May 2006,a highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV) variant characterized by 30 amino acids deletion within its NSP2-coding region emerged and caused extensive economic losses to China's pig industry.To investigate the in vivo pathogenicity and immune responses of the newly emerging PRRSV,3 groups of 60-d-old conventional piglets were inoculated intranasally with a representative strain of the HP-PRRSV variant HuN4 with 3 different infection doses (3× 103-3× 105 TCID50).The results revealed that the virus variant caused severe disease in piglets and the significant clinical characteristics consisted of persistently high fever (41.0-41.9℃) and high morbidity and mortality (60-100％),the marked clinical signs of PRRS and severe histopathogenic damages in multiple organs.It induced rapid and intense humoral immune responses and seroconversion was detected in most infected pigs at 7 d post-infection (DPI).The virus vigorously replicated in vivo and the highest virus average titer was 9.7 log copies mL-1 serum at 7 DPI.Elevated levels of IFN-y and IL- 10 cytokine production in serum in this study were also observed.Taken together,our results demonstrated that the HP-PRRSV variant HuN4 strain is highly pathogenic for piglets and suitable to be a reference strain of highly virulent PRRSV for evaluating the efficacy of the new vaccines.     

Influence of Hypericum perforatum Extract on Piglet Infected with Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome Virus

To study the influence of Hypericum perforatum extract （HPE） on piglets infected with porcine respiratory and reproductive syndrome virus （PRRSV）, enzyme-labeled immunosorbent assay （ELISA） and cytopathic effect （CPE） were used to determine in vitro whether HPE could induce swine pulmonary alveolar macrophages （PAMs） to secrete IFN-γ, and whether PRRSV titers in PAMs were affected by the levels of HPE-induced IFN-γ. HPE （200 mg·kg-1） was administrated by oral gavage to piglets infected with the PRRSV in vivo to observe whether HPE affected the viremia, lung viral titers, and weight gain of piglets infected with PRRSV. The results showed that HPE was capable of inducing PAMs to produce IFN-γ in a dose dependent manner and HPE pretreatment was capable of significantly reducing PRRSV viral titers in PAMs （P〈 0.01）. Administration of HPE to the PRRSV-infected animals significantly （P〈 0.05） reduced viremia over time as compared with the PRRSV-infected animals. But there was not significant decrease in lung viral titers at day 21 post-infection between the HPE- treated animals and the PRRSV-infected control piglets. There were no significant differences in weight gain over time among the HPE-treatment animals, the normal control, and the HPE control animals. The PRRSV-infected animals caused significant （P〈 0.01） growth retardation as compared with the HPE controls and the normal piglets. It suggested that HPE might be an effective novel therapeutic approach to diminish the PRRSV-induced disease in swine.     

Pig macrophages with site-specific edited CD163 decrease the susceptibility to infection with porcine reproductive and respiratory syndrome virus

Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) is recognized as one of the most infectious viral diseases of swine. Although Cluster of differentiation 163 (CD163) is identified as an essential receptor for mediating PRRS virus (PRRSV) infection, the important residues involved in infection on CD163 are still unclear. Therefore, it is very important to identify these key residues to study the mechanism of PRRSV infection and to generate anti-PRRSV pigs. In this study, we first generated immortalized porcine alveolar macrophage (IPAM) cell lines harboring 40-residues (residues 523–562, including R561 (arginine (R) at position 561)) deletion of CD163. PRRSV infection experiments showed that these IPAM cell lines were completely resistant to PRRSV infection. We then generated cloned pigs carrying CD163-R561A (an arginine (R) to alanine (A) substitution at position 561 of CD163). PRRSV challenge experiments in porcine alveolar macrophages (PAMs) isolated from the CD163-R561A pigs showed significantly lower susceptibility to PRRSV than that of CD163-R561 PAMs. Through this study, we show that CD163 523–562 contains essential residues for mediating PRRSV infection, and that CD163 R561 significantly contributes to PRRSV infection but is not essential for infection. These functional sites can therefore serve as new targets for understanding the mechanism of PRRSV infection. Furthermore, CD163-R561A pigs can be used as an important model for improving pig germplasm with resistance against PRRSV.     

PRRSV 的病毒蛋白研究进展

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒引起的一种以妊娠母猪严重繁殖障碍及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征的病毒性疾病,给世界养猪业造成了极大的威胁.从猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因组、非结构蛋白和结构蛋白3个方面对PRRSV的病毒蛋白研究进展进行综述.     

芪板青颗粒体外抗PRRSV效果研究

为了检验芪板青颗粒体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒效果,降低养猪场因感染猪繁殖与呼吸综合征病毒带来的损失,本试验通过调整芪板青颗粒溶液与猪繁殖与呼吸综合征病毒液加到Marc-145细胞中的不同顺序,分别检验芪板青颗粒对猪繁殖与呼吸综合征病毒的抑制、杀灭和阻断作用。结果显示：芪板青颗粒对猪繁殖与呼吸综合征病毒有一定的抑制、杀灭和阻断作用,在芪板青溶液浓度为24.4～3 125.0 mg/L时,有显著的抑制和杀灭猪繁殖与呼吸综合征病毒作用,在浓度195.3～3 125.0 mg/L时,有显著的阻断猪繁殖与呼吸综合征病毒作用。结果表明：芪板青颗粒可用于体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒,本试验为芪板青颗粒的应用提供了依据,为猪繁殖与呼吸综合征的防治提供了帮助。     

PCV2感染仔猪急性期蛋白的变化

【目的】探讨实验性感染PCV2仔猪血清中急性期蛋白浓度和肝脏急性期蛋白表达的变化,为PCV2的致病机制和诊断提供有价值的资料。【方法】19头ELISA检测PCV2抗体阴性的5周龄健康断奶仔猪,随机分为对照组和攻毒组,在攻毒后不同时间采集血液和肝脏。用ELISA方法检测血清中APPs的动态变化,荧光定量RT-PCR测定肝脏中APPsmRNA表达,同时观察肝脏的组织病理学变化。【结果】仔猪接种PCV2后,肝脏出现实质细胞变性,结缔组织增生和嗜酸性粒细胞浸润为特征的病理学损伤;血清中,猪主要急性期蛋白(Pig-MAP)在攻毒后7d达到峰值,在7和10d显著高于对照组(P0.05);血清淀粉样蛋白A(SAA)在攻毒后7d和21d显著高于对照组(P0.05);血清载脂蛋白AⅠ(Apo-AⅠ)攻毒后21d显著高于对照组(P0.05),其余时间差异均不显著;PCV2感染后21d仔猪肝脏中结合珠蛋白(HP)、C-反应蛋白(CRP)、α1-酸性糖蛋白(AGP)和SAAmRNA的表达呈现升高的趋势。【结论】PCV2感染可引起仔猪肝脏出现以实质细胞变性坏死和结缔组织增生为特征的病理学变化,血清APPs浓度和肝脏APPsmRNA表达呈现不同的变化,其中Pig-MAP可以作为病程发展的重要检测指标,对监测PCV2感染、疾病的预后起重要作用。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白2研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸困难、病毒血症为典型症状的一种传染性疾病,给世界养猪业带来巨大的经济损失。深入研究PRRSV的相关致病机制可为该病防控奠定理论依据。在对PRRSV的研究中,非结构蛋白2(non-structural protein 2, Nsp2)一直是研究的热点,文章综述了Nsp2与遗传变异、病毒致病性、病毒复制、免疫调控和重组疫苗与分子标签等相关的研究进展。Nsp2基因序列在对疫苗毒株的鉴别诊断中发挥重要作用。     

尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼人工 杂交卵子、精子形态观察

采集尼罗罗非鱼意伊萨罗罗非鱼杂交中人工挤压亲鱼腹部获得的卵子、精子。用光学显微镜和解剖镜 对卵子形态进行观察、拍照,比较分析不同成熟阶段卵子形状、卵径、表面色泽及卵黄颗粒积累特征,结果表明,未成 熟卵细胞呈椭圆形,表层布满细长血管;成熟卵细胞呈梨形,卵径0.5耀1.6 mm,外层有透明卵膜,充满金黄色卵黄颗 粒;过成熟卵细胞形状极不规则,卵黄颗粒开始液化。用扫描电镜对精子外形特征进行观察,发现正常精子由头部、 中片及尾部组成,头部呈长锥状,长径1.82（依0.35）滋m,宽径1.41（依0.34）滋m;中片近圆柱形、较短,长径0.74（依0.08） 滋m,宽径0.16（依0.06）滋m;尾部极长,为16.42（依0.35）滋m,单鞭毛结构;同时,还观察到短尾、双头、双尾3 种异常类 型。研究结果可为罗非鱼人工杂交技术改进提供一定基础依据。     

Marc-145细胞微载体悬浮培养及PRRSV增殖工艺的建立

采用分批式培养方法研究了Marc-145细胞微载体悬浮培养及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖工艺。结果表明,在3 g/L的微载体用量下,采用1 ml 3×105个细胞的初始接种密度及培养至第3 d进行换液操作工艺可以获得最佳的Marc-145细胞生长效能。采用感染复数为0.05的接毒比例及接毒后48 h收获毒液可获得最高的PRRSV增殖效价。在5 L反应器中重复验证上述工艺,获得较为稳定的试验结果,最大细胞密度均可高于1 ml 2×106个细胞,PRRSV的增殖效价均高于108.0TCID50/ml。为猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础。     

山东部分地区猪瘟与蓝耳病的流行病学调查

[目的]对山东部分地区进行猪瘟与蓝耳病的流行病学调查。[方法]采取血清学检测方法和问卷调查的方式,对山东6个地区养殖场的猪瘟(CFS)与蓝耳病(PRRS)感染情况进行流行病学调查,同时进行现场临床调查和病例剖检。[结果]在检测的598份病猪血清中,有463份为阳性,感染率为77.42%,其中377份为CFSV感染,感染率为63.04%;274份为PRRSV感染,感染率为45.82%;188份为PRRSV和CFSV混合感染,感染率为31.44%。在198份问卷调查中,44个兽医站、112个村级兽医和42个养殖场确定了CSF与PRRS的存在,并且通过现场临床调查和剖检诊断,进一步证实了2种疾病的存在。[结论]CSF和PRRS仍然是危害山东养猪业发展的主要疾病,应加强对该种病的防控工作。