非洲绿猴肾细胞外源绿色荧光蛋白基因表达的RNA干扰

非洲绿猴肾细胞(Vero)是多种病毒的适应细胞。本研究将外源的绿色荧光蛋白(GFP)基因转染到Veto-E6中,并利用体外转录合成的绿荧光蛋白短双链干扰RNA(siGFP)其表达进行干扰。结果显示：siGFP能有效阻断外源的绿色荧光蛋白基因在Vero-E6细胞中的表达,而不相关的siRNA则对绿荧光蛋白基因的表达没有影响。这为利用RNAi技术在Vero-E6细胞中,抑制外源基因的表达以及通过RNAi技术进行抗病毒的研究奠定了一定的基础。     

RNA干扰用siRNA的体外转录合成

RNA干扰(RNA interference，RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法，正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具，而获得符合干扰要求的短双链干扰RNA(small interference RNA，siRNA)是进行RNA；研究的首要步骤。本研究建立了体外转录合成siRNA方法。并用其生成的siRNA干扰鸡成纤维细胞外源绿荧光蛋白(GFP)基因和内源3—磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的表达。结果显示，siRNA能特异性降低鸡成纤维细胞中内外源基因的表达。本实验认为这种以DNA为模板体外转录合成siRNA方法操作简单、成本低、产物得率高，值得从事RNA研究者参考借鉴。     

RNA干扰研究现状

RNA干扰(RNAi)是指生物体内利用双链RNA(dsRNA)诱导同源靶基因的mRNA特异性降解,从而导致转录后基因沉默的现象。其在抵抗病毒感染、抑制转座子活动、调控内源性基因表达等方面发挥重要作用。RNAi以其高特异性、高效性等显著优势将成为研究基因功能的全新手段。简要概括RNAi作用机制和siRNA技术的原理,同时也讨论了RNAi技术在其他领域,如在基因信号通路研究、高通量研究基因功能、基因治疗如肿瘤研究和疾病治疗等方面的应用。     

siRNA对鸡胚成纤维细胞中GAPDH基因表达的抑制作用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是通过短双链RNA(small interference RNA,siRNA)介导的特异性抑制相应基因表达的新技术。作为研究基因功能的有效手段,该技术已在线虫、果蝇、斑马鱼和鼠等动物中进行了应用。本研究利用体外转录合成的短双链干扰RNA(siRNA),针对鸡的管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH),在鸡胚成纤维细胞中对其表达进行干扰。结果显示siGAPDH能有效阻断GAPDH基因在鸡胚成纤维细胞中的表达,而不相关的siRNA则对该基因的表达没有影响,证明在鸡细胞中也存在RNA干扰现象,为利用RNAi技术对鸡的基因功能研究奠定了一定基础。     

RNAi及其在哺乳动物中的应用*

 RNA干扰(RNAi)是由特定双链RNA(dsRNA)引发的转录后基因沉默,广泛存在于真菌、植物和动物中,它是近年来迅速发展起来的高效、特异、易操作的基因阻断技术,在功能基因组的研究中有着广阔的应用前景。研究表明,断裂dsRNA产生的小干扰RNA(siRNA)可抑制哺乳动物基因表达。从哺乳动物整体水平应用研究的角度,对RNAi的分子机制、生物学功能和特点,siRNA导入体内的方法以及应用等方面的研究作一综述。     

植物中依赖于RNA的RNA聚合酶研究进展

依赖于RNA的RNA聚合酶(RDR)能够以单链RNA为模版合成互补RNA链,产生双链RNA。双链RNA在细胞内被类似RNaseⅢ的酶DCL加工成20～24 nt的小分子干扰RNA(siRNA)。siRNA可以在转录水平或转录后水平抑制靶基因的表达。RDR通过基因沉默途径参与植物的生长发育调节、逆境应答以及表观遗传修饰等许多生物学过程。加深对植物RDR表达模式、生化活性及生物学功能等方面的理解将有利于植物基因沉默的发展和运用。     

RNAi在哺乳动物中的研究新进展

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是一种高度保守的、基于RNA水平的特异性降解机制,它通过特异性地抑制基因的表达来快速、简便以及大规模地鉴定基因的功能。虽然dsRNA不能应用于哺乳动物,但是小分子干扰型RNA（siRNA）的技术却证明RNAi可以成功应用于哺乳动物。近年来,RNAi技术在哺乳动物中得到了飞速发展和广泛应用,包括设计更加合理、更加有效的siRNA,在更多的已经分裂或者尚未分裂的细胞系中诱导RNAi,通过瞬时RNAi或转基因RNAi在活体动物中抑制基因的表达,建立时空调控或组织特异性的RNAi以及利用RNAi对哺乳动物基因组功能进行大规模的筛选和鉴定。本文对近几年RNAi在哺乳动物中的研究新发展进行综述。     

基于smad7基因为靶序列的RNA干涉作用研究

本文旨在探讨小干涉RNA(siRNA)对靶基因Smad7 mRNA表达的阻断作用。用体外转录方法制备Smad7基因的小干涉RNAs(siRNAs)，脂质体介导瞬时转染BERP35T-2肺癌细胞系，Northern blot杂交检测靶基因mRNA的表达丰度。根据Smad7编码区序列在体外成功地制备了针对两个不同靶序列的siRNAs，Northern blot杂交显示，在转染siRNA和BERP35T-2细胞中，不管是内源性的还是外源性的Smad7 mRNA的表达丰度均明显下降，Smad7基因编码区中542bp-563bp及701bp-722bp两个区域均是siRNA作用的有效靶序列；本研究设计并制备的siRNAs能有效抑制smad7基因的表达。     

RNA干扰技术在农作物害虫防治中的应用

RNA干扰(RNAi)技术作为基因沉默的工具,已被广泛应用于农作物害虫防治研究。准确选择靶基因、将dsRNA或siRNA导入昆虫体内、siRNA在昆虫体内的扩增和扩散是RNAi技术应用于农作物害虫防治的基础。应用RNAi技术能有效地保护农作物抵抗害虫危害,在农作物遗传改良进行精准抗虫方面具有重大的应用前景。     

白背飞虱体内RNA干扰技术体系的建立

应用双链RNA(dsRNA)诱导的RNA干扰(RNAi)技术原理,将体外合成的源于白背飞虱肌动蛋白(Actin)基因的dsRNA通过膜饲喂法饲喂其2龄若虫.通过优化人工饲料、dsRNA浓度和饲喂时间,成功地干扰了白背飞虱Actin基因的表达,并引发白背飞虱的死亡,从而建立了白背飞虱体内的RNAi体系.     

RNAi技术及其应用

RNAi主要通过双链RNA(dsRNA)被核酸酶切割成21~23 nt的干涉性小的RNA,即siRNA,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现。目前RNAi技术在基因功能和基因治疗等方面的研究有了广泛的应用,RNAi技术有望成为后基因组时代基因功能分析的有力工具。     

Hairpin RNAs and retrotransposon LTRs effect RNAi and chromatin-based gene silencing

The expression of short hairpin RNAs in several organisms silences gene expression by targeted mRNA degradation. This RNA interference (RNAi) pathway can also affect the genome, as DNA methylation arises at loci homologous to the target RNA in plants. We demonstrate in fission yeast that expression of a synthetic hairpin RNA is sufficient to silence the homologous locus in trans and causes the assembly of a patch of silent Swi6 chromatin with cohesin. This requires components of the RNAi machinery and Clr4 histone methyltransferase for small interfering RNA generation. A similar process represses several meiotic genes through nearby retrotransposon long terminal repeats (LTRs). These analyses directly implicate interspersed LTRs in regulating gene expression during cellular differentiation.     

RNA干涉原理及其应用

RNA干涉是指外源dsRNA引发生物体内的基因的同源序列降解，从而表现出的基因转录后的沉默现象，它与植物中的共抑制和真菌中的基因压制可能具有相同的作用机制。在这一过程中，需要eIF2c类似蛋白因子、RNA螺旋酶、RNA依赖性RNA多聚酶、核糖核酸酶、ATP和转膜蛋白参与。RNA干涉可以用于功能基因组学研究，也可用于克服转基因生物的基因沉默现象，使外源基因在遗传改良生物中能更好地表达，还用于基因治疗，抑制有害基因的表达等。     

RNAi技术及其应用综述

Ribonucleic Acid interference简称RNAi，是双链RNA（double stranded RNA，dsRNA）分子在mRNA水平上关闭相应序列及基因的表达使其沉默的过程。介绍了RNAi技术的定义及特征、发现历史、作用机制及其在植物基因功能研究与品质改良方面的应用。     

VEGFR1基因特导性siRNA的筛选

[目的]筛选血管内皮生长因子受体(VEGRF)基因特异性小干扰RNA(Small Interference RNA,siRNA),为肿瘤等疾病的基因治疗寻找一种新途径。[方法]以高表达VEGFR1的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为模型,采用RNA干扰技术,化学合成了3条针对血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)的特异性siRNA,用Lipofectamine2000TM转染HUVEC细胞株,通过Real time RT-PCR技术检测HUVEC细胞VEGFR1基因mRNA的表达。并对效果最好的VEGFR1 siRNA-2进行siRNA的浓度梯度效果检测。[结果]结果表明,与对照组相比,所设计的3条siRNA均能不同程度地抑制VEGFR1 mRNA的表达,其中siRNA-2号最有效,浓度为50 nmol/L时抑制率达到95%左右。在浓度梯度试验中,VEGFR1 siRNA-2转染浓度为50 pmol/L时,对VEGFR1基因的沉默效果还能达到50%左右。[结论]所设计的siRNA能有效抑制VEGFR1基因的表达,为RNAi用于靶向VEGFR1的基因治疗提供了非常有效的siRNA序列。     

RNA干扰机制及其主要蛋白因子研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)分子介导的、在mRNA水平上关闭相应序列基因表达、使其沉默的过程.RNAi作为一种古老而保守的基因沉默机制,广泛存在于真核生物体内,在细胞的发育调控、抗病毒防御、修复遗传损伤、调节正常的基因等生命过程中起着重要的作用.RNAi机制可以分为3个阶段:启动阶段、效应阶段及扩增阶段.RNAi干扰相关的主要蛋白因子有Dicer酶、Argonaute(AGO)蛋白家族和RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP).文章对RNAi机制及其相关主要蛋白因子进行简要综述.