拟南芥DREB1A基因的克隆与植物表达载体构建

用PCR方法从拟南芥中克隆DREB1A基因,序列分析发现,所克隆的DREB1A基因与已发表的DREB1A基因序列(AB007787)的同源性为99.69%.利用基因重组技术成功构建了植物表达栽体pBI121-DREB1A,为进一步利用DREB1A基因综合改良植物抗旱性奠定了基础.     

转录因子DREB1A基因的克隆及植物表达载体的构建

研究转录因子DREB1A在植物抗渗透胁迫反应中的作用。根据GenBank中登录的DREB1A基因的序列设计引物,用PCR方法从拟南芥中克隆DREB1A基因,利用基因重组技术成功构建了植物表达载体pCAMB1A1300-DREB1A。该结果为进一步利用DREB1A基因做遗传转化研究奠定了基础。     

DREB1A转录因子的克隆及植物表达载体构建

采用CTAB法提取拟南芥叶片总DNA,根据GenBank中报道的DREB1A转录因子序列设计并合成1对引物,通过PCR扩增得到一特异片段,并将其连接到pGEM-T Easy Vector上进行克隆并测序.结果表明,该片段全长651 bp,与报道的DREB1A转录因子序列完全一致,以此克隆片段构建了由组成型启动子CaMV35S驱动DREB1A基因表达的植物表达载体pBI121/DREB1A,从而为后期花卉等植物的遗传转化及品种抗性改良奠定了基础.     

DREB 2A基因的克隆、序列分析及其植物表达载体的构建

研究提取盐处理的拟南芥植株叶片总RNA,用DREB2A基因特异引物通过RT-PCR扩增出1050bp的片段,并将该片段克隆至pUC18上。序列分析结果表明,该克隆序列与GenBank上的DREB2A基因序列同源性达100%。进一步将DREB2A基因分别克隆至植物表达载体卡盒pCCE12和pCC29A上,构建了分别由E12启动子、rd29A启动子调控的DREB2A基因植物表达载体pCDRE12和pCDR29A。通过冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404中,为农杆菌介导的DREB2A基因对植物的遗传转化奠定基础。     

抗真菌、抗渗透胁迫基因多价植物表达载体构建及对黄瓜遗传转化的研究

本研究以黄瓜为试材,建立黄瓜植株再生体系和遗传转化体系;构建了分别由双35S组成型启动子、E12强组成型启动子和rd29A诱导型启动子调控的核糖体失活蛋白基因、几丁质酶基因和DREB1A基因的多价基因植物表达载体;利用农杆菌介导入法将其导入黄瓜优良品种,获得了转pBDCR T0及T1代PCR阳性植株。T1代转基因植株的抗逆性实验表明,DREB1A基因的表达可以提高黄瓜的抗旱性。本研究为培育抗逆境及抗真菌病转基因植株探索途径,并为进一步揭示核糖体失活蛋白基因、几丁质酶基因和DREB1A基因的分子机理提供了理论依据。     

DREB转录因子及其在植物抗逆育种中的应用进展

DREB(干旱应答元件结合蛋白)转录因子是AP2/EREBP的一个亚族。由于其过量表达能够提高植物抗旱、耐盐、耐低温、抗冻甚至抵抗重金属等逆境胁迫的能力,因此DREB转录因子基因被作为应用基因工程途径进行植物抗逆性状改良的理想候选基因。本文主要综述了DREB转录因子的结构、功能以及近年来国内外新的DREB转录因子基因的发现及其在培育抗逆性转基因植物中的应用,以期为植物抗逆分子育种改良提供参考。     

转DREB1A基因地被菊耐旱节水性

选用已经获得的具有多重抗逆性的转DREB1A基因地被菊6个株系为试验材料,以未转基因的野生型植株‘WT'为对照,将各株系盆栽幼苗分别进行室温条件下和高温条件下的水分胁迫处理,通过研究水分胁迫 前后各株系植株生理指标的变化规律,分析了各株系的耐失水特性,并利用方差分析及隶属函数综合评价的方法对不同株系的耐旱节水能力进行了...     

DREB1A基因植物表达载体的构建

以 p Bch质粒为基础 ,构建了分别由 35 s启动子、 rd2 9A启动子调控的 DREB1A基因双子叶植物表达载体p BD35 s、p BD2 9A,其植物选择标记为新霉素磷酸转移酶基因 (N PT ) ,适用于双子叶植物的遗传转化。以 p CU质粒为基础 ,构建了分别由 E12启动子、 rd2 9A启动子调控的 DREB1A基因单子叶植物表达载体 p CDE12、p CD2 9A,其植物选择标记为乙酰 Co A转移酶基因 (bar) ,适用于单子叶植物的遗传转化。并分别通过三亲本杂交法和冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌 L BA4 4 0 4中 ,为通过农杆菌介导法将 DREB1A基因导入植物奠定基础     

农杆菌介导Prd29A：DREB1A基因转化番茄的研究

DREB是植物体内一类特有的与逆境调节相关的转录因子.本试验以番茄材料06P28子叶外植体为受体,以prd29A:drEB1A嵌合基因为目的基因,利用根癌农杆菌介导的方法对番茄进行遗传转化,获得了4株抗潮霉索的抗性植株.对这些抗性植株进行GUS基因表达检测和PCR扩增检测,结果表明,其中的3株抗性植株中已经有稳定的GUS基因表达,并且PCR扩增也检测到目的基因Prd29A:DREB1A的存在.     

转DREB基因小麦品系抗逆性和品质性状变异

对5个转DREB基因小麦品系进行了田间抗逆性鉴定、产量性状研究和品质性状的检测。结果表明,转DREB基因小麦品系抗冻性增强,小麦产量显著增加,穗粒数和千粒质量均有不同程度提高;转DREB基因小麦品系在蛋白质品质性状和淀粉特性方面没有显著变化。     

小麦耐盐性鉴定指标及其分析评价

通过对近１０年国内外研究资料的整理和分析认为，有１０多项指标可用于小麦的耐盐性鉴定。其中，比较可靠的形态生长指标有盐胁迫条件下的幼苗存活率、幼苗的根长、苗高和苗重、春季分蘖数及籽粒产量；比较可靠的生理生化指标有盐胁迫条件下植株地上部的Ｋ／Ｎａ比、细胞膜透性、ＳＯＤ活性、根细胞质膜上的ＡＴＰ酶活性、植株组织中的甜菜碱和多胺含量、细胞壁上的羟脯氨酸含量、细胞壁糖蛋白中的糖分含量以及植株体内盐激蛋白的合成情况。关于游离脯氨酸含量这一指标，不同研究者看法不一致，其可靠性尚难以确定，应慎用或作进一步研究。     

新疆冬小麦品种萌发期耐盐性综合评价及耐盐种质的筛选

【目的】研究不同类型盐胁迫对新疆冬小麦萌发期的影响,并进行耐盐性综合评价,为新疆小麦萌发期耐盐品种的评价和指标筛选提供理论依据。【方法】测定76份新疆冬小麦品种(系)在NaCl和NaCl∶Na₂SO₄两种不同盐胁迫条件下小麦根数、最长根长、苗高、胚芽鞘长度、发芽势、发芽率等6个性状,利用隶属函数法并通过聚类分析分别对两种盐胁迫条件下冬小麦品种(系)的耐盐性进行筛选,综合评价和筛选新疆冬小麦耐盐性。【结果】与对照处理相比,NaCl和NaCl∶Na₂SO₄两种盐胁迫对新疆冬小麦品种(系)各性状均有明显的抑制作用,其中NaCl单盐胁迫对各性状抑制作用比NaCl∶Na₂SO₄混合盐胁迫抑制程度更大。通过NaCl单盐胁迫条件下聚类分析,新疆冬小麦品种(系)按耐盐性强弱可分为高耐型(6个/占供试材料的7.89%)、耐盐型(15个/19.74%)、中耐型(16个/21.05%)、敏感性(18个/23.68%)和高敏感型(21个/27.63%)等5类。NaCl∶Na₂SO₄混合盐胁迫条件下聚类分析,新疆冬小麦品种(系)按耐盐性强弱也可分为高耐型(13个/占供试材料的17.11%)、耐盐型(10个/13.16%)、中耐型(16个/21.05%)、敏感性(26个/34.21%)和高敏感型(11个/14.47%)等5类。获得高耐NaCL单盐胁迫的品种(系)6份,占供试品种的7.89%;高耐NaCl∶Na₂SO₄混合盐胁迫的品种(系)13份,占供试品种的17.11%。【结论】两种盐胁迫条件下,350 mol/L浓度对小麦种子的萌发有抑制作用,NaCl单盐胁迫和NaCl∶Na₂SO₄混合盐胁迫均为高耐型的品种3份,均是自育品种和引进品种分别为石冬8号、洛夫林10号和新冬7号。     

小麦细胞壁糖蛋白的耐盐性保护作用与机制研究

 小麦盐胁迫处理后发现，强耐盐品种（961、R-025、鲁德1号和R-017）细胞壁结合的羟脯氨酸及糖蛋白合成显著高于盐敏感品种（东103和中国春）；品种间的游离脯氨酸含量与其耐盐性关系不明显。电镜观察结果表明：盐胁迫过程中强耐盐品种其细胞表面糖蛋白层明显增厚、致密，而盐敏感品种则变薄、脱落甚至完全消失，游离到细胞间隙中。细胞壁糖蛋白的积累是小麦品种耐盐性反应的重要生化机制，在小麦的耐盐生理活动中起着重要作用。     

Cloning and Characterization of a Putative CTR1 Gene from Wheat

CTR1 is a key negative regulator in ethylene signal transduction. A salt-induced CTR1 like gene （TaCTR1） was cloned from wheat, its expression under abiotic stresses, subcellular localization and the effect of overexpression of TaCTR1 on salt tolerance in tobacco was studied. A putative CTR1 gene was cloned and characterized from wheat via rapid amplification of cDNA ends （RACE） and RT-PCR. TaCTR1 expression under stresses was analyzed using semi-quantitative RT-PCR and the effect of overexpression of TaCTR1 on salt tolerance was conducted in tobacco. The full-length cDNA of TaCTR1 is 2 635 bp which codes for a polypeptide of 759 amino acids. There is a conserved serine/threonine protein kinase domain at the carboxyl terminus containing an ATP-binding site. Southern blot analysis revealed that TaCTR1 consisted of a gene family in wheat. The amino acid homologies of CTR1 among different organisms share higher similarities. Expression analysis revealed that TaCTR1 was induced by NaC1 and drought stress but inhibited by ABA treatment. Transient expression of TaCTR1-GFP in the onion epidermal cells indicated that TaCTR1 was probably targeted to the plasma membrane. Overexpression of TaCTR1 decreased salt tolerance in transgenic tobacco （Nicotiana tabacum L.） plants compared with the control. To our knowledge, TaCTR1 is the first CTR1 gene cloned in wheat and may be involved in various abiotic stresses. Overexpression of TaCTR1 decreased the salt tolerance in tobacco suggested that TaCTR1 may act as a negative regulator of salt stress in plants.     

Effects of Hypergravity on Salt Tolerance of Wheat Seedlings

[Objective] The study aimed to reveal the effects of hypergravity on saJt tolerance of wheat seedlings. [Method] The seed germination rate (Gr) and germination index (Gi) of wheat seedlings were measured under hypergravity of 600 x g or 1 000 x g for 4 h and under the stress of 0.4% or 0.9% salt solution. The catalase (CAT) activity and malondialdehyde ( MDA ) content of wheat seedlings were also measured under 0.4% salt stress. [Result] Compared with seedlings in CK group (no hypergravity or salt stress), the Gr and G/of the seedlings in salt stress treatment decreased to differ-ent extents; while the Gr and Gi of the seedlings in treatment group (hypergravity and salt stress) increased compared with that in salt stress group. CAT in seedlings of hypergravity treatment was higher than that of CK group and 0.4% salt treatment group, meanwhile the MDA showed an opposite result. [Conclusion] Hypergravity could enhance the salt resistance of wheat in specific range, and hypergravity of 600 × g for 4 h pedormed better than that of 1 000×g for4 h.     

利用cDNA-AFLP技术分离与小麦耐盐性相关的 cDNA片段及基因的可行性研究

利用cDNA-AFLP技术分析了耐盐性受主效基因控制的小麦品系98-160盐胁迫前后基因表达的变化。对112个克隆的cDNA片断进行了tBlastx分析，约有65.2%的基因与已知基因有较高的同源性，从中筛选出18个与小麦耐盐性密切相关的片段，主要包括转录因子、与离子转运有关的蛋白、信号传导相关蛋白、胁迫相关蛋白以及与蛋白-蛋白相互作用有关的蛋白。目前已得到部分序列的全长cDNA，RT-PCR结果表明一些基因与耐盐性密切相关。     

旱盐双胁迫对小麦芽期的影响研究

[目的]研究春小麦芽期的抗旱、耐盐性。[方法]以2个小麦品种宁春27号、宁春4号以及2个亲本后代中13个小麦品系为研究对象,将不同小麦材料用0(CK)、1%Na Cl+10%PEG、1%NaCl+15%PEG旱盐复合处理后,测定并分析小麦芽期的发芽率、芽长、根长,计算发芽抑制率、芽长抑制率、根长抑制率。[结果]在旱盐双胁迫下,芽期抗旱耐盐性最强的是S129、宁春27号(S127)、S9,芽期抗旱耐盐性最差的是S105、宁春4号(S126)、S75、S103。[结论]该研究筛选出3个耐盐性较强的小麦品种,为培育抗旱耐盐品种提供材料基础。     

超重力处理对小麦幼苗抗盐性的影响

以小麦为材料，进行超重力和盐胁迫处理，探讨其生理生化指标的变化，以期为超重力育种、植物抗性机理研究提供依据。     

超重力处理对小麦幼苗抗盐性的影响(英文)

[Objective] The study aimed to reveal the effects of hypergravity on salt tolerance of wheat seedlings. [Method] The seed germination rate (Gr) and germination index (Gi) of wheat seedlings were measured under hypergravity of 600×g or 1 000×g for 4 h and under the stress of 0.4% or 0.9% salt solution. The catalase (CAT) activity and malondialdehyde (MDA) content of wheat seedlings were also measured under 0.4% salt stress. [Result] Compared with seedlings in CK group (no hypergravity or salt stress),the Gr and Gi of the seedlings in salt stress treatment decreased to different extents; while the Gr and Gi of the seedlings in treatment group (hypergravity and salt stress) increased compared with that in salt stress group. CAT in seedlings of hypergravity treatment was higher than that of CK group and 0.4% salt treatment group,meanwhile the MDA showed an opposite result. [Conclusion] Hypergravity could enhance the salt resistance of wheat in specific range,and hypergravity of 600×g for 4 h performed better than that of 1 000×g for 4 h.     

盐胁迫对近缘属小麦种子发芽的影响

采用培养皿发芽法研究了NaCl胁迫处理对小麦近缘属种子萌发的影响。结果表明:低浓度NaCl胁迫对近缘属小麦种子萌发的影响较小,只有在高浓度NaCl胁迫下,才对种子萌发起抑制作用。不同浓度的NaCl胁迫对近缘属小麦发芽的影响有显著差异。3个小麦近缘属种中,黑麦耐盐性相对最好,小黑麦次之,硬粒小麦耐盐性相对较差。