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相似文献
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1.
新颖抗猪流行性腹泻免疫制剂   总被引:1,自引:0,他引:1  
以新生乳猪增殖猪流行性腹泻病毒(PEDV),通过蔗糖密度梯度离心纯化,获得结构较为完整的病毒颗粒,病毒ELISA效价为1:3×10^5,蛋白含量为3.96mg/mL。将提纯的PEDV免疫Balb/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,融合率为95.6%。用间接ELISA筛选并进行3次再克隆,阳性率达100%,共获得15株能稳定分泌特异性抗PEDV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞。其染  相似文献   

2.
蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制   总被引:2,自引:0,他引:2  
用蚕豆萎蔫病毒提纯病毒粒子免疫BAL B/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用纯化的BBWV病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有稀释法克隆,成功获得了2株BBWV特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为4D11,3G12.2株单抗腹水间接ELISA效价高达1:640000,抗体类型均为IgG1,经Western-blotting分析表明,2株单抗均是针对BBWV 44.7kD的外壳蛋白  相似文献   

3.
蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制   总被引:14,自引:3,他引:11  
用蚕豆萎蔫病毒(BBWV)提纯病毒粒子免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用纯化的BBWV病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得2株BB-WV特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为4D11,3G12.2株单抗腹水间接ELISA效价高达1∶640000,抗体类型均为IgG1,经Western-bloting分析表明,2株单抗均是针对BBWV44.7kD的外壳蛋白大亚基的特异性抗体.单抗抗原结合位点分析表明4D11和3G12两单抗作用于同一抗原决定簇  相似文献   

4.
抗鸡IgC单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立   总被引:4,自引:0,他引:4  
利用纯化鸡血清IgC免疫的Balb/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用ELISA间接法和夹心法作阳性抗体检测,经有限稀释法克隆,结果筛选出1株可持续分泌抗鸡IgC单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株3E3,其培养上清和诱生Blab/c小鼠腹水的McAb效价分别为1:4×10^2-1.28×10^4和1:8×10^5-1×10^10,经染色体分析可见到两种形态的染色体,该细胞株经体连续  相似文献   

5.
用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒(IBV,M41)作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞,经ELISA筛选,获得了4株能分泌特异性抗IBV单克隆抗体的细胞系,分别命名为4AC1、4AF1、6DH8及2DH10。4株单抗的亚类都属于IgG2b,在Westernblotting试验中,4AF1、6DH82株单抗特异性地识别IBV的核衣壳蛋白(N);经ELISA测定,各株单抗40h培养上清效价达10-2~10-4,第7天腹水效价达10-5~10-6,4AF1、6DH8与所试7个IBV标准株及2个IBV分离株都发生反应  相似文献   

6.
嗜水气单胞菌HEC毒素单克隆抗独特型抗体研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
用嗜水气单胞菌HEC毒素免疫Balb/C小鼠,通过一次性杂交瘤融合,在筛选HEC毒素单克隆抗体(McAb1)的同时,用兔抗HEC毒素血清(PAb)包板的ELISA方法,筛选到两株抗HEC毒素的单克隆抗独特型抗体(McAb2)。两株McAb2腹水ELISA效价分别为1:20480和1:5120,属于IgG1亚类。HEC毒素的模拟抗原McAb2不能溶解人的O型红细胞,但能与相应的PAb反应,并能阻断PAb与HEC毒素的结合。将McAb2连接到同源小鼠红细胞(MRBC)后免疫小鼠,用HEC毒素包板的ELISA检测其血清,呈阳性结果,说明McAb2能模拟HEC刺激机体产生抗HEC毒素的抗体(Ab3)。  相似文献   

7.
用甘薯青枯病菌(Pseudomonassolanacearcum)免疫的BALB/C小鼠脾细胞与鼠骨髓瘤细胞杂交融合,建立了4株分泌抗甘薯青枯病菌的特异性、有鉴别力的杂交瘤细胞株:PSB24、PSB28、PSB46、PSB56。 交瘤细胞株染色体数范围为98-104,ELISA试验培养液抗体滴度为保这McAb的玫##  相似文献   

8.
钩端螺旋体七日热血清型(56610)特异性单克隆抗体的研制   总被引:2,自引:0,他引:2  
钩端螺旋体七日热血清型(56610)培养物,经甲醛灭活后免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合获得6株阳性杂交瘤,分别定名为1A9、1B8、1F9、2D10、2E4、3E8,其中1A9、1F9、2D10、2E4为特异性抗56610杂交瘤.抑制试验结果表明,多抗血清能够有效地抑制这些特异性单抗,这些特异性单抗被鉴定为IgG1亚类.  相似文献   

9.
钩端螺旋体七日热血清型(56610)培养物,经甲醛灭活后免疫BAL B/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合获得6株阳性杂交瘤,分别定名为1A9、1B8、1F9、2D10、2E4、3E8,其中1A9、1F9、2D10、2E4为特异性抗56610杂交瘤。抑制试验结果表明,多抗血清能够有效地抑制这些特异性单抗,这些特异性单抗被鉴定为IgG1亚类。  相似文献   

10.
鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定   总被引:2,自引:1,他引:1  
用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒(IBV,M41)作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过常规淋巴细胞发校瘤技术产生杂交瘤细胞,经ELISA筛选,获得了4株能分泌特异性抗IBV单克隆抗体的细胞系,分别命名为4AC、4AF1、6DH及2DH10。4株单抗的亚类都属于IgG2b,在Western blotting试验中,4AF1、6DH62株单抗牧场卉性地识别IBV的核衣壳蛋白(N);经ELI  相似文献   

11.
制备新城疫病毒(NDV)NP蛋白单抗,以期为NDV抗原表位研究及检测方法建立方面奠定基础。利用NDV F48E9株pET32a-NP重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,间接ELISA筛选,获得了2株稳定分泌抗NP重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G3、4B12。经间接ELISA测定,腹水抗体效价分别为1 2.56×105、1 5.12×105。亚类鉴定结果表明这两株单抗均为IgG1。Western blot分析结果显示,1G3、4B12均能特异性识别重组NP蛋白。与NDV感染细胞经间接免疫荧光试验检测均呈黄绿色荧光。经相加ELISA测定表明两株单抗识别的抗原表位不同。  相似文献   

12.
 【目的】真菌毒素可导致严重的食品安全问题。本试验旨在制备可用于检测伏马菌素B1的特异性单克隆抗体。【方法】制备伏马菌素B1人工抗原,杂交瘤细胞法筛选杂交瘤细胞株制备腹水型单克隆抗体,并对其特性进行鉴定。【结果】筛选得到杂交瘤细胞株F3,分泌的单克隆抗体亚类为IgG1,轻链类型为κ链;10%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单抗蛋白重链分子质量约为50 kD,轻链分子质量约为25 kD;间接酶联免疫吸附法测定杂交瘤细胞F3细胞培养上清和腹水效价分别为1:3 200和1:51 200;亲和力常数为1.60×10-8 mol•L-1;IC50值可达3.589 ng•mL-1;对其它真菌毒素不存在交叉反应;免疫转印法鉴定抗体具有高特异性。【结论】本试验制备FB1单克隆抗体具有较好亲和力和高特异性,具有良好的应用价值。  相似文献   

13.
用聚乙二醇沉淀浓缩纯化猪瘟兔化弱毒中国株(SFV-C)免疫 BALB/C 小鼠,取其脾脏,制备淋巴细胞,与 FO 骨髓瘤细胞融合,经 EliSA 检测和有限稀释法克隆化,最后筛选出5株对SFV 的单克隆抗体杂交瘤细胞.所制成的腹水抗体,一株只对 SFV-C 发生特异性反应,四株与SFV-S,SFV-F 及 BVDV oregon 发生微弱的交叉反应.细胞上清液的 EliSA 效价为1:800~1600,腹水效价为1:10~6~10~7.  相似文献   

14.
[目的]筛选出稳定分泌抗犬瘟热病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。[方法]用纯化的犬瘟热病毒(CDV)抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA和有限稀释法克隆杂交瘤细胞。研究了杂交瘤细胞的稳定性和染色体数,测定了单克隆抗体的效价并鉴定其特异性和亚型。[结果]经反复筛选和亚克隆后,共获得3株能稳定分泌抗CDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。3株单抗对CDV均有较高的特异性,与犬传染性肝炎病毒、犬细小病毒均不反应。3株杂交瘤细胞的腹水效价为1∶(8 000~128 000),细胞培养上清效价为1∶(256~512),染色体数为80~100。3株单克隆抗体重链均属于IgG1,轻链均属于κ链。[结论]该研究为研制CDV快速检测试剂盒奠定了基础。  相似文献   

15.
复合免疫制备3种有机磷农药单克隆抗体的技术研究   总被引:4,自引:1,他引:3  
以α-氨基丁酸和农药中间体为原料合成了甲基对硫磷、杀螟硫磷和甲基毒死蜱3种有机磷农药人工半抗原(H1、H2和H3);通过活泼酯法将H1、H2和H3分别交联于牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上制备免疫原和包被原.以等体积混合的 H1-BSA、H2-BSA和H3-BSA复合免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备单克隆抗体获4株抗上述复合抗原的单克隆抗体,其中甲基对硫磷1株(H9/A3),杀螟硫磷2株(H9/B3、C8/H6),甲基毒死蜱1株(G7/F5).所获4株抗体的类型及亚类均为IgG1,轻链均为κ链,间接ELISA法测定腹水效价均高达1×106.间接竞争ELISA法测定H9/A3、C8/H6和G7/F5细胞株的抑制中浓度(I50)分别为1070、404和752 μg·L-1,且与类似物无交叉反应.本研究建立了一种可在较短的研制周期内,通过单次细胞融合获得多种不同农药的单克隆抗体的有效方法.  相似文献   

16.
单克隆抗体用于比较禽呼肠孤病毒株的抗原关系   总被引:3,自引:0,他引:3  
  相似文献   

17.
抗牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的研制   总被引:1,自引:0,他引:1  
将含有牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)囊膜糖蛋白E2编码基因的真核表达质粒pEC143免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组E2蛋白纯化产物为检测抗原,经间接ELISA法筛选和3次有限稀释法克隆,得到1株能稳定分泌抗BVDV1和BVDV2单克隆抗体的杂交瘤细胞株.该3D8株单抗能识别BVDV1标准毒株(NADL、OregonC24V)、BVDV2标准毒株(890、104)、2株BVDV1分离株和3株BVDV2分离株,而不能识别牛轮状病毒、牛疱疹病毒1型,显示出良好的特异性.阳性杂交瘤细胞的上清液、腹水ELISA抗体效价分别为2~9和10×2~7,为IgM亚类.其单克隆抗体杂交瘤细胞株的获得,为建立单抗介导的检测BVDV1和BVDV2抗原和抗体的血清学方法和实现标准化诊断奠定基础.  相似文献   

18.
高亲和力的农药克百威单克隆抗体的制备及鉴定   总被引:3,自引:1,他引:2  
【目的】制备高亲和力农药克百威单克隆抗体,建立克百威残留免疫检测方法,控制克百威残留,保障人民身体健康与保护环境。【方法】合成克百威半抗原BFNB,用人工抗原BFNB-BSA免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合,经间接ELISA筛选及显微克隆法亚克隆,分离出阳性细胞株,腹水诱导法及辛酸-硫酸铵沉淀法大量制备及纯化单克隆抗体,间接ELISA法测定抗体滴度及亲和力,间接竞争ELISA法测定抗体特异性。【结果】获得1株稳定分泌抗克百威单克隆抗体的杂交瘤细胞株5D3,其培养上清和腹水抗体滴度分别为1﹕2.048×103和1﹕1.024×106,其抗体亚类为IgG1,亲和力常数为2.54×109 L•mol-1,IC50为1.18 ng•ml-1,最低检测限为0.01 ng•ml-1。与克百威降解产物呋喃酚的交叉反应率为4.59×10-4%,另外几种结构类似的氨基甲酸酯类农药的交叉反应率均小于3.0×10-4%。【结论】此抗克百威的单克隆抗体亲合力高、特异性强,为建立克百威简便、快速、特异的免疫检测方法奠定了基础。  相似文献   

19.
用纯化的重组PRV VP6蛋白免疫BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,通过间接ELISA筛选,获得了1株稳定分泌抗PRV VP6的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名C5D10。经鉴定C5D10为IgG1亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数为93,细胞培养液上清及腹水效价分别为18∶00和11∶×106,且C5D10单克隆抗体不与猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒发生交叉反应,显示良好的特异性。  相似文献   

20.
【目的】制备大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体,为大片吸虫病的免疫诊断、防治等研究奠定基础。【方法】利用杂交瘤技术,以大片吸虫分泌排泄抗原为免疫原制备单克隆抗体,并用ELISA、硫氰酸盐洗脱法等方法鉴定其生物学特性。【结果】通过间接ELISA筛选及3次亚克隆后,共获得5株大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为6D3、6B4、7D2、7D1和7D4。经鉴定,发现5株杂交瘤细胞染色体数为90~110条,均大于亲本细胞,其亚类鉴定分别属于IgG2b、IgM、IgM、IgG1和IgM,其轻链均为κ型;5株单克隆抗体(6D3、6B4、7D2、7D1、7D4)的上清效价分别为1∶400、1∶3200、1∶25600、1∶6400和1∶6400,腹水效价分别为1∶104、1∶104、1∶105、1∶107和1∶106;而表位测定结果表明,5株单克隆抗体中,6D3与7D1、7D2以及7D4与7D1、7D2作用于不同表位,6D3与6B4 可能识别同一表位或重叠表位,或同一表位有空间位阻,7D4与6D3以及6B4与7D4、7D1、7D2可能具有空间位阻;5株单克隆抗体的相对亲和力为:6B4>7D4>7D1>6D3>7D2;5株杂交瘤细胞株均能稳定地分泌单克隆抗体。【结论】制备获得的分泌排泄抗原单克隆抗体可用于大片吸虫病的诊断和免疫机理等方面的进一步研究。  相似文献   

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