黄粉虫蛹超氧化物歧化酶的提取及性质研究初报

以黄粉虫蛹冻干粉为研究材料,获得了一种超氧化物歧化酶(SOD),PAGE法显示为均一的蛋白谱带.通过在相同时间内,不同pH值、温度对酶的影响,结果表明,意大利蜂蛹中SOD在相同的时间内,pH值为8.35时,有最大的酶活力,pH值高于或低于8.35,酶活力均明显下降;温度在25.5℃左右酶活力最高,400C时保持活力80%以上,到90℃时没有活力.     

仙人掌超氧化物歧化酶提取与纯化研究

以仙人掌为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀法得到超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）粗酶液。然后用Sephadex（葡聚糖凝胶）G-75层析柱层析对粗酶液进行进一步纯化,最后用邻苯三酚法测定酶活力,并对酶活力主要影响因素（包括pH值、温度、抑制剂）进行了研究。结果显示仙人掌SOD酶比活力为751.56U.mg-1。pH值为7.5~8.5时酶活力最大,稳定性也好。温度维持在25~30℃时酶活力最高。由于过氧化氢和氰化钾均能使仙人掌SOD的酶活力显著下降,因而可以初步判断从仙人掌中提取到的SOD是Cu.Zn-SOD。     

胞壁质酶的性质研究

[目的]以提取的胞壁质酶为材料,研究胞壁质酶的性质。[方法]通过测定胞壁质酶在595nm处光吸收值的增量,测定该酶活力和蛋白质浓度。通过测定米氏常数Km,研究酶促反应的速度及影响速度的因素。在不同pH值缓冲液中测定胞壁质酶活力,同时测定该酶的最适pH值。酶促反应的速度在酶的最适温度时达到最大。利用SDS-PAGE电泳法,测定胞壁质酶的分子量及纯度。[结果]胞壁质酶在219.00g/L光吸收下降最快,活力最高。Km为0.57。脲对胞壁质酶为抑制作用,其抑制类型为竞争性抑制。胞壁质酶在pH值为8.0时酶活力最高,属于弱碱性,在40℃时酶活力最高,其Kd为13。[结论]该研究可为今后采用生物工程技术对胞壁质酶进行克隆、提取以及制取提供参考。     

一株细菌产生的脂肪酶性质研究

从郑州油脂厂附近的土壤中筛选到一株产脂肪酶细菌,对该细菌的脂肪酶性质进行了初步研究.结果表明,该酶的最适反应温度为40℃,50℃以下稳定性良好;40℃时的最适反应pH值为7;在pH值为10时酶活力最高,pH值5～12时酶活性较为稳定;超声波处理对酶活力的影响较大,处理时间不应超过10min;研究表明该酶是具有良好开发前...     

不同品种赤小豆子叶SOD提取技术优化及活性研究

以京农红8号赤小豆子叶为材料,进行单因素和正交试验,优化出超声波法提取赤小豆子叶超氧化物歧化酶(SOD)的最佳条件,并分析比较不同品种赤小豆子叶中SOD的活力。结果表明,赤小豆子叶SOD最佳提取工艺条件为:液固比15∶1(m L/g),超声提取功率140 W,磷酸缓冲液pH值7.0,水浴浸提温度40℃;对赤小豆子叶SOD提取率影响的大小顺序为超声功率>磷酸缓冲液pH值>液固比>水浴温度。对比8个品种的赤小豆子叶SOD活力可以得出,不同品种赤小豆子叶SOD含量有显著差异,小丰7号SOD活力最高,SOD活力值为11.17 U/g;而吉红2号SOD活力最低,活力值仅为8.97 U/g。     

丝素-壳聚糖合金膜固定化超氧化物歧化酶的研究

采用富含自由氨基的丝素-壳聚糖合金膜为载体，吸附固定从柞蚕蛹提取分离的超氧化物歧化酶(SOD)，研究并确定了固定化的最佳条件，分别为酶浓度38U／mL、pH6．3、温度4-8℃、时间15h．制得的固定化酶活力为89．1U／g载体，酶的活力回收达到35．9％．     

绿色木霉F-UV264产纤维素酶酶学性质研究

从绿色木霉F-UV264固体发酵物中提取纤维素酶,基本酶学性质的研究表明:纤维素酶适宜pH值为4.6~5.6,此时能保持90%以上的酶活,pH值为5.0时相对酶活最高;适宜温度在40~50℃之间,在50℃时相对酶活达到最大值,纤维素酶有较好的热稳定性,在55℃保温1 h后,剩余酶活力为74.1%。     

高效毛细管电泳法测定吲哚乙酸氧化酶的活力

[目的]为霍山石斛的进一步研究和开发提供依据。[方法]采用高效毛细管电泳技术,以pH值为9.0的80mmol/L硼砂缓冲溶液和15mmol/L葡萄糖溶液所组成的缓冲体系为流动相,研究吲哚乙酸氧化酶活性的最佳测定条件。[结果]当反应80min后,酶活力下降。当底物浓度较低时,酶活力随底物浓度的增加而增加,当底物浓度大于20mg/L时,酶活力不再增加,保持在5.7g(/mg·h)左右。当pH值在6.0左右时,酶活性最高。温度对酶活性有很大的影响。当反应温度为5℃时,酶活力较低,然后酶活力随温度的升高而逐渐升高,30℃后明显下降。当温度为20～30℃时,吲哚乙酸氧化酶活力最高。[结论]当温度为25℃、pH值为6.0、底物浓度为20mg/L时,吲哚乙酸氧化酶的活力最高。     

蛹虫草超氧化物歧化酶的分离纯化及性质研究

以蛹虫草为材料,经过硫酸铵盐析、SephedexG!75柱层析和DEAE!52柱层析,得到纯化的超氧化物歧化酶(SOD),经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白区带,此酶比活力为17855.73U/mg,纯化倍数为53.7,回收率为21.8%。该酶在40℃保温150min,活性不变;在pH值5.0～9.0有较好的稳定性。该酶每亚基含1原子铁,对H2O2和乙醇-氯仿溶液敏感。     

茶薪菇产纤维素酶最佳液体发酵条件的研究

[目的]研究茶薪菇产纤维素酶的最佳液体培养条件。[方法]以茶薪菇为材料,探讨碳源、氮源、初始pH值、温度、转速和培养时间对茶薪菇产纤维素酶的影响,确定最佳发酵条件。[结果]麸皮为碳源时,茶薪菇产纤维素酶活力最高,葡萄糖为碳源时产酶活力较低。(NH4)2SO4为氮源时,茶薪菇产纤维素酶活力最高,其次是酵母粉与蛋白胨。茶薪菇在pH值6.0时产酶活力最高。28℃以下时茶薪菇生长较缓慢,32℃以上时菌丝生长较快,但酶活力较低,30℃时产酶活力最高。转速180 r/min、培养时间5 d时茶薪菇产酶活力最高。[结论]茶薪菇产纤维素酶的最佳液体培养条件为麸皮5%,(NH4)2SO41%,初始pH值6.0,培养温度30℃,转速180 r/min,培养时间5 d,此条件下,纤维素酶活力达40.2 U/ml。     

番茄中超氧化物歧化酶提取工艺的优化

[目的]对番茄中超氧化物歧化酶(SOD酶)的提取工艺进行优化,旨在进一步开发植物SOD酶源。[方法]以富含SOD酶的番茄为试验材料,选取浸提缓冲液的pH值、浸提时间、热处理温度、热处理时间4个因素进行正交试验设计,优化提取工艺。[结果]番茄中SOD酶最佳提取工艺为缓冲液pH7.8、浸提时间2 h、热处理温度50℃、热处理时间30 min。[结论]该工艺简便高效地从番茄中提纯了超氧化物歧化酶,可用于实际生产,为后续进一步纯化研究该酶奠定了基础。     

离子交换层析法纯化羊血SOD及其稳定性研究

以羊血为原料,通过热处理、透析、离子交换层析等方法获得SOD提取物,测定其酶活力和蛋白质含量,并从温度、pH稳定性和外源试剂耐受性等几个方面对SOD稳定性进行了研究.结果表明:经过离子交换层析后,SOD的比活力达到5289.1U·mg-1,回收率为60%,纯化倍数为25.3倍;在40～60℃保温30min,SOD酶活力基本不变;pH6～9范围内SOD的稳定性较好;SOD对2mmol·L-1H2O2和尿素较敏感,2mmol·L-1SDS对SOD没有明显的抑制作用.     

青梅果超氧化物歧化酶粗酶的提取及活性研究

[目的]测定青梅果超氧化物歧化酶（SOD）活性，筛选青梅果SOD粗酶提取最有效的方法。[方法]以重庆綦江青梅果为原料，采取不同料液比提取青梅SOD粗酶，以Sevage法除去杂蛋白，硫酸铵分级沉淀。同时对各步骤所得S0D粗酶活性、蛋白量、比活的检测结果进行比较。[结果]H3P04缓冲液的用量对SOD粗酶的提取有直接影响。当H3PO4缓冲液与梅果的比例为3：1时，测得酶的比活最高，为25．34U／mg蛋白；粗酶液按3：1体积比加入的氯仿-乙醇混合液除去杂蛋白效果明显；粗酶液添加（NH4）2SO4至90％饱和度沉淀SOD效果好，比活较提取液上升51．43U／mg蛋白。[结论]青梅果SOD粗酶提取的最佳条件：H3PO4缓冲液与青梅比例为3：1，温度为25～30℃，pH值为7．8，Sevage法除去杂蛋白，（NH4）2SO4盐析从35％添加至90％饱和度沉淀SOD。该条件下，总蛋白为215．13mg，酶总活力为5415．74U／mg蛋白，比活为25．34U／mg蛋白。     

木瓜超氧化物歧化酶粗酶提取工艺初探

[目的]筛选木瓜超氧化物歧化酶(SOD)粗酶最佳提取工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为原料,以溶解SOD,去除杂蛋白,沉淀SOD为基本工艺程序,对SOD的4种提取工艺进行比较研究。同时对4种工艺提取的SOD单位蛋白、活性、比活的检测结果进行比较。[结果]磷酸缓冲液的用量对提取效果有直接影响,缓冲液与木瓜之比为3∶1,测得其比活最高,为54.55 U/mg。粗酶液加2.5倍体积的氯仿-乙醇混合液去除杂蛋白效果比较明显。粗酶液添加(NH4)2SO4到90%饱和度沉淀SOD效果较好,比活较提取液上升44.52 Umg。[结论]木瓜SOD粗酶最佳提取工艺条件:温度为25～30℃,pH值为7.8,0.05 mol/L磷酸缓冲液与木瓜比例为3∶1,用2.5倍体积的氯仿-乙醇混合液去杂蛋白,添加55%(NH4)2SO4至90%饱和度沉淀SOD。     

青果抗氧化酶类的测定及其测定时的最适pH和温度

为了测定提取青果抗氧化酶类的最适条件,并为青果保鲜及改进从青果中提取超氧化物歧化酶和抗氧化酶系提供一定理论基础.本实验采用低温离心技术,分别通过不同梯度的pH和温度提取并研究了青果过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD).结果表明,pH和温度对测定POD、CAT活性均有较大影响,POD和CAT的最适温度均为50℃左右;各酶最适pH值依次为POD:6.4,CAT:8.0,SOD:8.2,且POD的敏感度较大,建议修正其测定条件;而提取SOD时,当科液比为1:3、pH为8.2时,SOD酶活性最强.     

不同温度对桃小食心虫保护酶系活性的影响

为了探究温度对桃小食心虫的生长发育与繁殖的影响,用酶标仪分别测定了不同温度桃小食心虫成虫体内保护酶系的活性。结果表明:桃小食心虫体内存在清除自由基的保护酶系,且不同温度对其体内保护酶系有不同的影响;SOD在不同温度处理间的活性差异均达到显著水平,在22℃时活性最低,28℃时活性达最高,34℃时活性急剧下降;POD和CAT活性均低于SOD活性,整体呈先上升后下降趋势,在28℃时活性最高。     

猕猴桃中SOD提取工艺研究

[目的]寻找一条从植物中提取出较纯净S01）的廉价工艺路线。[方法]利用超氧化物歧化酶（SOD）耐热等性质,对以猕猴桃为原料制备的SOD粗酶液分别进行热变性、等电点、丙酮沉淀处理,以得到纯度较高的SOD酶液。[结果]试验确定了热变性、等电点、丙酮沉淀处理猕猴桃中的SOD粗酶液的最佳提取参数分别为65℃下25min、pH5．0、V丙酮：VSOD酶液=1：1,并且依次用3种方法下的最佳参数进行提取,得到的蛋白样品经分析达到了电泳纯。[结论]研究可为植物中SOD的廉价提取提供参考依据。     

啤酒废酵母自溶过程强化研究

[目的]研究啤酒废酵母强化自溶过程,优化强化作用因素。[方法]对影响啤酒废酵母自溶后释放的超氧化物歧化酶(SOD)、氨基酸、葡萄糖内容物含量及SOD的活性提取的各因素进行单因素试验,并设计物理因素正交试验进行各因素参数优化;同时对啤酒酵母自溶后释放的上述活性物质进行添加葡聚糖酶、木瓜蛋白酶促进自溶过程的单因素影响研究,并设计化学因素正交试验进行各因素参数优化。[结果]物化因素影响的正交试验表明,啤酒废酵母自溶过程氨基酸含量提取的最优组合为pH 5.0、加水量300%、加盐量3%,葡萄糖含量提取的最优组合为pH 5.0、加水量250%、加盐量1%,SOD含量提取的最优组合为pH 5.5、加水量300%、加盐量2%,SOD活性提取的最优组合为pH 5.5、加水量250%,加盐量1%。生化因素影响的正交试验表明,氨基酸含量提取的最优组合为pH 6.0、温度60℃、酶用量6 g/kg葡聚糖酶+4 g/kg木瓜蛋白酶,葡萄糖含量提取的最优组合为pH 6.0、温度55℃、酶用量6 g/kg葡聚糖酶+4g/kg木瓜蛋白酶,SOD含量提取的最优组合为pH 6.0、温度55℃、酶用量6 g/kg葡聚糖酶+2 g/kg木瓜蛋白酶,SOD活性提取的最优组合为pH 6.5、温度60℃、酶用量6 g/kg葡聚糖酶+4 g/kg木瓜蛋白酶。[结论]在优化的啤酒废酵母自溶过程强化作用各提取物的最优组合条件下,可简化操作过程、降低操作难度,提高酵母菌成分的利用率及其得率。     

贮藏温度对琯溪蜜柚果实品质及相关酶活性的影响

 琯溪蜜柚果实采后经过预冷，贮藏于室温和冷库（6℃）两个温度条件下，研究贮藏温度对果实品质及相关酶活性的影响。结果表明，冷藏处理的果实可溶性糖含量和糖酸比较高，贮藏期较长，风味较好；而贮于室温下的果实可溶性固形物、可滴定酸和Vc含量则较高；冷藏处理果实的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）活性均高于室温处理，而丙二醛（MDA）含量则低于室温处理。试验表明，琯溪蜜柚果实采后贮藏于6℃冷库中，可以抑制果实采后酸化现象的产生，提高保护酶的活性，延长贮藏期，较好地维持果实的贮藏品质