抗生素对非洲菊试管苗不定芽分化的影响研究

以卡那霉素和潮霉素作为非洲菊抗性植株的选择剂,头孢霉素和羧苄青霉素为抑菌剂,分别采取不同浓度,分析其对非洲菊试管苗不定芽分化的影响。结果表明,25 mg.L-1的卡那霉素或5 mg.L-1的潮霉素可作为非洲菊抗性植株的临界筛选浓度。头孢霉素浓度愈大,213品种不定芽分化频率愈低,当头孢霉素浓度较高(400～500 mg.L-1)时,愈伤组织生长受到抑制;而羧苄青霉素对愈伤组织影响很小,在适宜的浓度下能促进不定芽分化,213品种在羧苄青霉素浓度为200mg.L-1时,分化频率达到最大值68.8%。     

抗生素对剑麻愈伤组织生长和植株再生的影响

研究卡那霉素、潮霉素、头孢霉素和羧苄青霉素对剑麻愈伤组织生长、不定芽分化及生根的影响,并确定抑制农杆菌生长的头孢霉素、羧苄青霉素的质量浓度。结果表明:潮霉素明显抑制剑麻愈伤组织生长和不定芽分化,卡那霉素次之,头孢霉素和羧苄青霉素相对较小;4种抗生素均能抑制剑麻生根,其抑制效果依次为头孢霉素>卡那霉素>羧苄青霉素>潮霉素。头孢霉素和羧苄青霉素的浓度大于200 mg/L时,农杆菌生长完全被抑制。在筛选剑麻转化体时,卡那霉素和潮霉素的使用浓度分别以100、50 mg/L为宜,羧苄青霉素和头孢霉素的使用浓度均为200 mg/L。     

抗生素对高粱愈伤组织诱导和生长的影响

用羧苄青霉素等抗生素进行抑菌试验,以羧苄青霉素和头孢霉素的抑菌效果较好.头孢霉素对高梁愈伤组织的毒性表现出比羧苄青霉素大.浓度低于500 mg/L羧苄青霉素对高梁愈伤组织的生长起促进作用;而分化率随着羧苄青霉素浓度的提高而下降.在农杆菌介导高梁遗传转化时,选用羧苄青霉素是合适的,浓度以250 mg/L为宜.高梁愈伤组织对潮霉素的反应比卡那霉素更敏感,高梁不同基因型愈伤组织对卡那霉素和潮霉素的反应在褐化(死亡)率上表现不同.在以潮霉素作为抗性筛选标记时,选择压以50～75 mg/L为宜.     

不同抗生素对甘薯遗传转化的影响

探讨了卡那霉素(Kan)、头孢霉素(Cef)、羧苄青霉素(Cn)3种抗生素对甘薯遗传转化植株生长的影响。确立了甘薯用农杆菌介导的遗传转化研究中抑菌剂和筛选剂的计量方案。甘薯腋芽对卡那霉素(Kan)敏感，甘薯叶片次之。当卡那霉素(Kan)为50mg／L时植株的生长基本停止，当卡那霉素(Kan)为70mg／L时，甘薯腋芽一周就变白，3～5d褐变死亡。甘薯叶片20d左右全变白，井慢慢死亡。头孢霉素(Cef)为200mg／L时对甘薯愈伤的分化有一定的促进作用。羧苄青霉素(Cn)对甘薯的愈伤的分化影响不太明显．但浓度超过400mg／L时对甘薯出愈有抑制作用。     

不同抗生素对刺槐遗传转化受体系统的影响

本试验研究了卡那霉素(Kana)、头孢霉素(Cef)、氨苄青霉素(Amp)、羧苄青霉素(Carb)、红霉素(E)对刺槐形成层为外植体的遗传转化受体系统的影响。结果表明:刺槐形成层诱导愈伤时Cef对受体材料伤害最小,抑菌效果最好,浓度为200 mg/L时能完全抑制农杆菌生长;用Kana作为刺槐转基因植株的筛选,刺槐形成层愈伤组织分化时选择剂浓度为100~125 mg/L最佳,生根培养时选择剂浓度为75 mg/L最佳。     

银白杨遗传转化中抗生素浓度优化的研究

该文探讨了卡那霉素、G418、羧苄青霉素和头孢霉素4种抗生素对银白杨不同培养阶段外植体生长、分化或生根的影响,确立了由农杆菌介导的银白杨遗传转化研究中抗生素种类和转化体的筛选浓度.结果表明:在叶片转化筛选阶段,卡那霉素和G418的适宜浓度分别为15和10 mg/L,羧苄青霉素和头孢霉素的适宜浓度为200～600 mg/L和200～400 mg/L;在抗性芽生根培养时,卡那霉素和G418浓度分别为20～25 mg/L和15～20 mg/L,羧苄青霉素和头孢霉素浓度为200～800 mg/L和200～600 mg/L.头孢霉素或羧苄青霉素的抑菌效果因农杆菌菌株的不同而存在差异,羧苄青霉素对农杆菌LBA4404抑制效果好,头孢霉素对农杆菌C58抑制效果理想.      

抗生素对细枝木麻黄愈伤组织再生及农杆菌生长的影响

以细枝木麻黄3个无性系水培苗作为材料,研究了硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate,Km)对细枝木麻黄愈伤组织诱导、增殖和芽分化的影响,以及头孢霉素(cefotaxime,Cef)、羧苄青霉素(carbenicillin,Cab)和氨苄青霉素(ampicillin,Amp)对农杆菌的抑制效果。结果表明,Km对细枝木麻黄愈伤组织诱导适宜的选择压力是20mg/L,Km选择性筛选愈伤组织增殖的适宜质量浓度为40mg/L,愈伤组织芽分化的选择压力是40～50mg/L。在抗生素抑菌效果方面,Cef质量浓度为200mg/L、Cab300mg/L和Amp500mg/L能完全抑制农杆菌的生长。综合比较,对细枝木麻黄遗传转化研究最理想的抑菌剂是Cef,使用质量浓度低且能有效抑制根癌农杆菌的生长。     

抗生素对沙田柚外植体分化及生长的影响

不同浓度的卡那霉素结合羧苄青霉素、头孢霉素对沙田柚子叶、上胚轴、下胚轴的分化及新梢生长的影响试验结果表明：培养基中卡那霉素浓度超过５０ｍｇ／Ｌ时，不利于诱导产生愈伤组织，也不利于上、下胚轴形成不定芽；卡那霉素浓度大于７ｍｇ／Ｌ时，明显抑制愈伤组织的分化和新梢的生长；羧苄青霉素及头孢霉素浓度为３００－４００ｍｇ／Ｌ时抑菌效果较好，对外植体的生长分化影响亦较小。     

马铃薯地方主栽品种"春薯4号"遗传转化体系的建立

以吉林省马铃薯主栽品种"春薯4号"(Solanum tubberosum cv.Chunshu 4)无菌试管苗为材料,以茎段为外植体,采用L9(33)正交试验设计,研究植物激素对愈伤组织诱导和分化的影响;通过对遗传转化体系中的筛选剂浓度、抗生素种类及浓度等影响因素的优化,初步建立了马铃薯"春薯4号"的遗传转化体系.结果表明:最适合愈伤组织诱导的培养基配方为MS+2.0mg/L6苄氨基嘌呤(6-BA)+0.2 mg/L萘乙酸(NAA)+0.3 mg/L 2,4-二氯苯酚代乙酚(2,4-D),"春薯4号"茎段的愈伤组织诱导率最高,为98.57％,愈伤组织为淡绿色,呈致密的哑铃形;最适合愈伤组织分化的培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L吲哚乙酸(IAA)+1.0 mg/L玉米素(ZT),愈伤组织的分化出苗率最高,为54.1％,幼苗粗壮,畸形苗少;在遗传转化体系中,筛选剂双丙氨膦浓度为6.0 mg/L时,为愈伤组织最适筛选压,为4.5 mg/L时,为再生苗最适筛选压;农杆菌抑菌剂最适组合为500 mg/L头孢霉素+200 mg/L羧苄青霉素.     

抗生素对甘菊愈伤组织诱导和植株再生的影响

以甘菊叶片为外植体,尝试不同浓度羧苄青霉素(Carb)、卡那霉素(Kan)和潮霉素(Hyg)对甘菊愈伤组织诱导和植株再生的影响.结果表明,潮霉素和卡那霉素都对愈伤组织诱导有抑制作用:对不定芽分化而言,以潮霉素和卡那霉素作为抗性筛选标记时,选择压都以5mg·L-1为宜.羧苄青霉素的抑菌效果较好,质量浓度应在300～500mg·L-1范围;潮霉素3mg·L-1、卡那霉素20mg·L-1为合适的转化植株生根培养的抗生素临界浓度.     

烟草叶片愈伤组织诱导及分化培养的验证

[目的] 研究烟草愈伤组织的发育情况及其丛生芽或分化点的形态建成。[方法] 在无菌条件下，把烟草叶片切块培养在含有2mg/L NAA和1mg/L6-BA的MS培养基上诱导愈伤组织的形成；而后，转移愈伤组织到含有NAA 0.1mg/L＋BA2.0mg/L的分化培养基上使其产生丛生芽或分化点。[结果] 诱导培养20d后，愈伤组织基本形成且没有发生污染，烟草叶片愈伤组织的诱导培养是成功的。愈伤组织的整体分化率比较高，愈伤组织上形成的丛生芽或分化点比较多，且分布比较均匀；编号为4的分化培养基上愈伤组织的分化不理想，且其丛生芽或分化点分布极不均匀。在烟草叶片愈伤组织的分化培养中NAA和6-BA的添加量分别为0.1和2.0mg/L。[结论] 该研究为植株繁育提供了良好的技术支持。     

不同激素对杂交魔芋愈伤诱导及植株再生的影响

以杂交魔芋球茎为外植体,以添加不同种类和浓度的生长素及细胞分裂素的MS为培养基,研究不同浓度激素配比对魔芋愈伤组织诱导形成、增殖、分化以及植株再生等的影响。结果表明:6-BA浓度在3.0 mg/L时,对魔芋愈伤组织的诱导率最高,达到90%;6-BA与NAA配合使用时,有利于提高愈伤组织分化率,6-BA浓度在0.5~1.0 mg/L、NAA浓度在0.1~0.5 mg/L时,成苗率均较高,其中6-BA浓度在1.0 mg/L、NAA浓度在0.1 mg/L时,愈伤分化率最高,达到84.4%,成苗率达到253%;NAA浓度在0.2~0.5 mg/L时,生根率最高,达到247%。综合以上不同浓度及激素配比的作用效果,认为适合杂交魔芋麻杆球茎植株再生的最适愈伤诱导培养基是MS+6-BA 3.0 mg/L;最适愈伤分化及芽分化培养基是MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L;最适生根培养基是1/2 MS+NAA 0.2~0.5 mg/L。     

矮牵牛的组织培养研究

矮牵牛以茎尖、茎段和叶片为外植体,以MS为基本培养基,添加不同的激素配比,在MS BA2mg/L NAA0.1mg/L上诱导形成的愈伤组织块,再移至MS BA1 mg/L NAA 0.1mg/L上分化形成苗,如此交替作用,可达到最高的繁殖倍数、诱导率和分化率,变异苗也最少,能取得最佳效果;生根适宜的培养基为NS NAA0.5mg/L和MS NAA0.3mg/L IAA 0.2mg/L。     

唐菖蒲球茎芽高频再生体系的建立

将带芽的唐菖蒲子球茎切块接种在附加2,4-D3．0mg／L的MS基本培养基上诱导愈伤组织的发生。愈伤组织转至MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．1mg／L诱导芽的分化。丛生芽继代增殖在MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．1mg／L上,增殖系数最高。生根培养以1／2MS＋NAA0．1mg／L效果最佳。     

抗生素对沂州木瓜离体叶片不定芽再生的影响

[目的]研究卡那霉素（Kan）、头孢霉素（Cef）和羧苄青霉素（Carb）对木瓜幼芽嫩叶不定芽再生的影响。[方法]采取沂州木瓜培养新梢嫩叶处理,依次接种在再生培养基及生根培养基上,注入设计浓度的对应抗生素,分析3种常见抗生素Cef、Kan、Carb对沂州木瓜培养新梢嫩叶上不定芽产生的效果。[结果]沂州木瓜对Kan反应极强烈,浓度为5mg/L时,叶片不定芽再生率非常低（2.4%）;浓度为10mg/L时,芽分化被完全抑制,叶柄略有膨大,组织变白,有微量愈伤组织;浓度为15～30mg/L时,叶片既不能形成愈伤组织也不能分化不定芽。Cef和Carb对沂州木瓜叶片生根及生长的作用呈负相关关联,浓度在100mg/L时均同对照差异很小,随着添加浓度的升高,抑制作用则显著表现出来,500mg/LCef或400mg/LCarb即可阻止沂州木瓜新梢嫩叶的愈伤组织出现。[结论]沂州木瓜叶片对Kan敏感,Cef和Carb对木瓜离体培养的影响相似,但Carb抑制再生的作用比Cef强烈。     

籼稻品种93-11遗传转化中抗生素适宜剂量的筛选

为优化农杆菌介导转化体系,研究了两种常用抑菌剂头孢霉素(cef)和羧苄青霉素(cb)的抑菌效果和对籼稻品种93-11成熟胚培养的影响,并进一步研究选择剂潮霉素(hyg)对愈伤诱导、分化和种子萌发生根的影响,确定其作为选择剂的有效浓度.对cb和cef共设置12种质量浓度处理,各处理都能完全抑制农杆菌的生长,同时对愈伤的诱导和生长没有不良影响,但是有些处理使愈伤的分化率下降.150、250 mg.L-1cb的单独作用,400、500 mg.L-1cef的单独作用,以及cb为100mg.L-1时,300、400、500 mg.L-1cef的3种互作处理都不影响愈伤的分化率;但cef高达600 mg.L-1时明显降低愈伤的分化率,达极显著水平,使分化率降到7%;cb为50 mg.L-1时,350、450、550 mg.L-1cef的3种互作处理都极显著地降低愈伤的分化率,表明高浓度的cef以及添加小量cb的处理与cef之间的互作对分化率的影响十分显著.两种抑菌剂单独使用(400-500 mg.L-1cef,150-250 mg.L-1cb)即有效抑制转化和培养过程中农杆菌的繁殖,同时不影响愈伤的生长和分化.对hyg的研究表明,愈伤诱导和分化对hyg最为敏感,5 mg.L-1的剂量足以使出愈率为0,使愈伤的分化率为0;hyg对愈伤的致死剂量为40 mg.L-1;hyg对种子萌发生根的致死剂量为25 mg.L-1.因此,在愈伤分化阶段不宜加入选择剂;在抗性愈伤组织筛选阶段加入hyg的适宜质量浓度要大于40 mg.L-1;利用愈伤诱导和种子萌发生根对hyg的敏感性,可用于转基因种子的筛选,筛选质量浓度分别要大于5和25 mg.L-1.     

发根农杆菌Ri质粒转化康乃馨初步研究

利用具有Ri质粒的发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）Pri15834对康乃馨组培苗的带叶茎节进行转化试验。转化后的外植体在K0附加500mg/L羧苄青霉素培养基上培养2～3周后，受感染的伤口部位长出无向地性的毛状根，频率为37.07%。将毛状根切碎分别在K0、K1、K2培养基上继续培养3周，毛状根在K0上表现为无限生长，在K1上主要表现为长愈伤组织，频率为51.42%，而在K2上则主要表现为长绿苗，频率为25%。这说明发根农杆菌的Ri质粒已整合到康乃馨细胞基因组中并得到表达。